2021/10/25 更新

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イダ ヒロコ
依田 浩子
IDA Hiroko
所属
教育研究院 医歯学系 歯学系列 准教授
歯学部 歯学科 准教授
医歯学総合研究科 口腔生命科学専攻 顎顔面再建学 准教授
職名
准教授
外部リンク

学位

  • 博士(歯学) ( 2000年3月   新潟大学 )

研究分野

  • ライフサイエンス / 病態系口腔科学

  • ライフサイエンス / 常態系口腔科学

経歴(researchmap)

  • 新潟大学   歯学部 歯学科   准教授

    2008年9月 - 現在

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  • 新潟大学   医歯学総合研究科 口腔生命科学専攻 顎顔面再建学   准教授

    2008年9月 - 現在

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  • 新潟大学   医歯学総合病院 口腔外科   講師

    2007年9月 - 2008年8月

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  • 新潟大学 医歯学総合研究科 口腔生命科学専攻 顎顔面再建学   准教授

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経歴

  • 新潟大学   歯学部 歯学科   准教授

    2008年9月 - 現在

  • 新潟大学   医歯学総合研究科 口腔生命科学専攻 顎顔面再建学   准教授

    2008年9月 - 現在

  • 新潟大学   口腔外科   講師

    2007年9月 - 2008年8月

所属学協会

 

論文

  • Oxygen regulates epithelial stem cell proliferation via RhoA-actomyosin-YAP/TAZ signal in mouse incisor. 査読 国際誌

    Keishi Otsu, Hiroko Ida-Yonemochi, Shojiro Ikezaki, Masatsugu Ema, Jiro Hitomi, Hayato Ohshima, Hidemitsu Harada

    Development (Cambridge, England)   148 ( 4 )   2021年2月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)  

    Stem cells are maintained in specific niches that strictly regulate their proliferation and differentiation for proper tissue regeneration and renewal. Molecular oxygen (O2) is an important component of the niche microenvironment, but little is known about how O2 governs epithelial stem cell (ESC) behavior. Here, we demonstrate that O2 plays a crucial role in regulating the proliferation of ESCs using the continuously growing mouse incisors. We have revealed that slow-cycling cells in the niche are maintained under relatively hypoxic conditions compared with actively proliferating cells, based on the blood vessel distribution and metabolic status. Mechanistically, we have demonstrated that, during hypoxia, HIF1α upregulation activates the RhoA signal, thereby promoting cortical actomyosin and stabilizing the adherens junction complex, including merlin. This leads to the cytoplasmic retention of YAP/TAZ to attenuate cell proliferation. These results shed light on the biological significance of blood-vessel geometry and the signaling mechanism through microenvironmental O2 to orchestrate ESC behavior, providing a novel molecular basis for the microenvironmental O2-mediated stem cell regulation during tissue development and renewal.

    DOI: 10.1242/dev.194787

    PubMed

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  • Hypoxia-Responsive Oxygen Nanobubbles for Tissues-Targeted Delivery in Developing Tooth Germs. 査読 国際誌

    Eun-Jung Kim, Ji-Eun Lee, Semi Yoon, Dong-Joon Lee, Han Ngoc Mai, Hiroko Ida-Yonemochi, Jonghoon Choi, Han-Sung Jung

    Frontiers in cell and developmental biology   9   626224 - 626224   2021年

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)  

    Hypoxia is a state of inadequate supply of oxygen. Increasing evidence indicates that a hypoxic environment is strongly associated with abnormal organ development. Oxygen nanobubbles (ONBs) are newly developed nanomaterials that can deliver oxygen to developing tissues, including hypoxic cells. However, the mechanisms through which nanobubbles recover hypoxic tissues, such as developing tooth germs remain to be identified. In this study, tooth germs were cultured in various conditions: CO2 chamber, hypoxic chamber, and with 20% ONBs for 3 h. The target stages were at the cap stage (all soft tissue) and bell stage (hard tissue starts to form). Hypoxic tooth germs were recovered with 20% ONBs in the media, similar to the tooth germs incubated in a CO2 chamber (normoxic condition). The tooth germs under hypoxic conditions underwent apoptosis both at the cap and bell stages, and ONBs rescued the damaged tooth germs in both the cap and bell stages. Using kidney transplantation for hard tissue formation in vivo, amelogenesis and dentinogenesis imperfecta in hypoxic conditions at the bell stage were rescued with ONBs. Furthermore, glucose uptake by tooth germs was highly upregulated under hypoxic conditions, and was restored with ONBs to normoxia levels. Our findings indicate that the strategies to make use of ONBs for efficient oxygen targeted delivery can restore cellular processes, such as cell proliferation and apoptosis, glucose uptake, and hypomineralization in hypoxic environments.

    DOI: 10.3389/fcell.2021.626224

    PubMed

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  • Responses of oral-microflora-exposed dental pulp to capping with a triple antibiotic paste or calcium hydroxide cement in mouse molars. 査読 国際誌

    Angela Quispe-Salcedo, Takuichi Sato, Junko Matsuyama, Hiroko Ida-Yonemochi, Hayato Ohshima

    Regenerative therapy   15   216 - 225   2020年12月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)  

    Introduction: Responses of oral-microflora-exposed dental pulp to a triple antibiotic paste (TAP), a mixture of ciprofloxacin, metronidazole, and minocycline in ointment with macrogol and propylene glycol, remain to be fully clarified at the cellular level. This study aimed to elucidate responses of oral-microflora-exposed dental pulp to capping with TAP in mouse molars. Methods: A cavity was prepared on the first molars of 6-week-old mice to expose the dental pulp for 24 h. The exposed pulp was capped with TAP (TAP group) or calcium hydroxide cement (CH group), in addition to the combination of macrogol (M) and propylene glycol (P) (MP, control group), followed by a glass ionomer cement filling. The samples were collected at intervals of 1, 2, and 3 weeks, and immunohistochemistry for nestin and Ki-67 and deoxyuride-5'-triphosphate biotin nick end labeling (TUNEL) assay were performed in addition to quantitative real-time polymerase chain reaction (qRT-PCR) analyses. Results: The highest occurrence rate of pulp necrosis was found in the control group followed by the CH group at Weeks 2 and 3, whereas the highest occurrence rate of healed areas in the dental pulp was observed in the TAP group at each time point. Tertiary dentin formation was first observed in the dental pulp of the TAP group at Week 2. In contrast, bone-like and/or fibrous tissues were frequently observed in the CH group. qRT-PCR analyses clarified that TAP activated the stem and dendritic cells at Weeks 1 and 2, respectively. Conclusions: The use of TAP as a pulp-capping agent improved the healing process of oral-microflora-exposed dental pulp in mouse molars.

    DOI: 10.1016/j.reth.2020.10.001

    PubMed

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  • Functional Expression of Sodium-Dependent Glucose Transporter in Amelogenesis. 査読 国際誌

    H Ida-Yonemochi, K Otsu, H Harada, H Ohshima

    Journal of dental research   99 ( 8 )   977 - 986   2020年7月

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    担当区分:筆頭著者, 責任著者   記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)  

    Glucose is an essential source of energy for mammalian cells and is transported into the cells by glucose transporters. There are 2 types of glucose transporters: one is a passive glucose transporter, GLUT (SLC2A), and the other is a sodium-dependent active glucose transporter, SGLT (SLC5A). We previously reported that the expression of GLUTs during tooth development is precisely and spatiotemporally controlled and that the glucose uptake mediated by GLUT1 plays a crucial role in early tooth morphogenesis and tooth size determination. This study aimed to clarify the localization and roles of SGLT1 and SGLT2 in murine ameloblast differentiation by using immunohistochemistry, immunoelectron microscopy, an in vitro tooth organ culture experiment, and in vivo administration of an inhibitor of SGLT1/2, phloridzin. SGLT1, which has high affinity with glucose, was immunolocalized in the early secretory ameloblasts and the ruffle-ended ameloblasts in the maturation stage. However, SGLT2, which has high glucose transport capacity, was observed in the stratum intermedium, papillary layer, and ameloblasts at the maturation stage and colocalized with Na+-K+-ATPase. The inhibition of SGLT1/2 by phloridzin in the tooth germs induced the disturbance of ameloblast differentiation and enamel matrix formation both in vitro (organ culture) and in vivo (mouse model). The expression of SGLT1 and SGLT2 was significantly upregulated in hypoxic conditions in the ameloblast-lineage cells. These findings suggest that the active glucose uptake mediated by SGLT1 and SGLT2 is strictly regulated and dependent on the intra- and extracellular microenvironments during tooth morphogenesis and that the appropriate passive and active glucose transport is an essential event in amelogenesis.

    DOI: 10.1177/0022034520916130

    PubMed

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  • Reduced enamel epithelium-derived cell niche in the junctional epithelium is maintained for a long time in mice. 査読 国際誌

    Miki Soda, Kotaro Saito, Hiroko Ida-Yonemochi, Kuniko Nakakura-Ohshima, Shinichi Kenmotsu, Hayato Ohshima

    Journal of periodontology   91 ( 6 )   819 - 827   2020年6月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)  

    BACKGROUND: Although numerous reports have demonstrated that the junctional epithelium (JE) is derived from the reduced enamel epithelium (REE), the fate of the REE-derived JE remains controversial. The present study elucidated the fate of the REE-derived JE and the cell dynamics of stem/progenitor cells in the JE following tooth eruption. METHODS: Mandibular first molar germs (embryonic days 15 to postnatal 1-day-old) were transplanted into the socket of 2-week-old mice after extraction of the upper first molars of B6 wild-type (WT) and green fluorescent protein (GFP) transgenic mice. After analysis by µ-CT, paraffin sections were processed for immunohistochemistry for Nestin, Ki67 and GFP. We also performed chasing analysis using BrdU-administered TetOP-H2B-GFP mice. RESULTS: Amelogenesis progressed normally in the cervical areas, and the structure of the JE was like that in normal tooth development. The JE was GFP-negative in transplantations using GFP transgenic mice as the host, and the oral epithelium (OE) showed a positive reaction. By contrast, the JE remained GFP-positive throughout the experimental period in transplantations using GFP transgenic mice as the donor. Chasing analysis revealed that H2B-GFP- and 5-Bromo-2'-deoxyuridine (BrdU)-labeled cells in the basal side of the JE translocated to oral side of the JE as the chasing time increased. Some label-retaining cells remained at the supra-basal cell layer in the JE. CONCLUSION: These results suggest that REE-derived cell niche in the JE is maintained for a long time following tooth eruption. Therefore, the JE may be available as the source of the odontogenic epithelium.

    DOI: 10.1002/JPER.19-0269

    PubMed

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  • Loss of autophagy in chondrocytes causes severe growth retardation. 査読 国際誌

    Yoji Horigome, Hiroko Ida-Yonemochi, Satoshi Waguri, Shunichi Shibata, Naoto Endo, Masaaki Komatsu

    Autophagy   16 ( 3 )   501 - 511   2020年3月

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    担当区分:筆頭著者   記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)  

    Chondrogenesis is accompanied by not only cellular renovation, but also metabolic stress. Therefore, macroautophagy/autophagy is postulated to be involved in this process. Previous reports have shown that suppression of autophagy during chondrogenesis causes mild growth retardation. However, the role of autophagy in chondrocyte differentiation still largely remains unclear. Here, we show the important role of autophagy on chondrogenesis. The transition of mesenchymal cells to chondrocytes was severely impaired by ablation of Atg7, a gene essential for autophagy. Mice lacking Atg7 after the transition exhibited phenotypes severer than mutant mice in which Atg7 was removed before the transition. Atg7-deficient chondrocytes accumulated large numbers of glycogen granules, hardly proliferate and died specifically in the proliferative zone without any ER-stress signal. Our results suggest that the suppression of autophagy in prechondrogenic cells drives compensatory mechanism(s) that mitigate defective chondrogenesis, and that autophagy participates in glycogenolysis to supply glucose in avascular growth plates.Abbreviations: DDIT3/CHOP: DNA damage inducible transcript 3; ER: endoplasmic reticulum; NFE2L2/NRF2: nuclear factor, erythroid derived 2, like 2; SQSTM1/p62: sequestosome 1; STBD1: starch-binding domain-containing protein 1.

    DOI: 10.1080/15548627.2019.1628541

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  • Extracellular enzymatically synthesized glycogen promotes osteogenesis by activating osteoblast differentiation via Akt/GSK-3β signaling pathway. 査読 国際誌

    Hiroko Ida-Yonemochi, Eizo Nakagawa, Hiroki Takata, Takashi Furuyashiki, Ryo Kakutani, Mikako Tanaka, Hayato Ohshima

    Journal of cellular physiology   234 ( 8 )   13602 - 13616   2019年8月

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    担当区分:筆頭著者, 責任著者   記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)  

    Glycogen is the stored form of glucose and plays a major role in energy metabolism. Recently, it has become clear that enzymatically synthesized glycogen (ESG) has biological functions, such as the macrophage-stimulating activity. This study aimed to evaluate the effect of ESG on osteogenesis. MC3T3-E1 cells were cultured with ESG, and their cell proliferative activity and osteoblast differentiation were measured. An in vivo study was conducted in which ESG pellets with BMP-2 were grafted into mouse calvarial defects and histomorphometrically analyzed for the new bone formation. To confirm the effect of ESG on bone growth in vivo, ESG was orally administered to pregnant mice and the femurs of their pups were examined. We observed that ESG stimulated cell proliferation and enhanced messenger RNA expression of osteocalcin and osteopontin in MC3T3-E1 cells. ESG was taken up by the cells associated with GLUT-1 and activated the Akt/GSK-3β pathway. In vivo, the new bone formation in the calvarial defect was significantly accelerated by ESG and the maternal administration of ESG promoted fetal bone growth. In conclusion, ESG stimulates cell proliferation and differentiation of preosteoblasts via the activation of Akt/GSK-3β signaling and promotes new bone formation in vivo, suggesting that ESG could be a useful stimulant for osteogenesis.

    DOI: 10.1002/jcp.28039

    PubMed

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  • Three-dimensional configuration of apical epithelial compartments including stem cell niches in guinea pig cheek teeth. 査読 国際誌

    Yuta Seino, Mitsushiro Nakatomi, Hiroko Ida-Yonemochi, Daisuke Koga, Tatsuo Ushiki, Hayato Ohshima

    Journal of oral biosciences   61 ( 1 )   55 - 63   2019年3月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)  

    OBJECTIVES: Continuously growing rodent incisors have an apically located epithelial stem cell compartment, known as an "apical bud" (AB). Few studies have described the morphological features of ABs and stem cell niches in continuously growing premolars/molars. We attempted to clarify the relationship between the three-dimensional configuration of ABs and the stem cell niches in guinea pig cheek teeth. METHODS: We perfusion-fixed four-week-old guinea pigs, then decalcified their premolars/molars to produce serial paraffin sections, which we immunostained for Sox2. We reconstructed the serial sections using image processing and analysis software. We processed undecalcified samples for scanning electron microscopy by KOH digestion. RESULTS: Two types of epithelia with M and Δ shapes surrounded the S-shaped dental papilla in the apical region of the premolars/molars, and there were three Sox2-positive epithelial bulges above the M- and Δ-shaped epithelia. Sox2-positive epithelial stem cell niches were restricted to the apical side, and cell proliferation and differentiation immediately proceeded in the crown-analogue dentin. The Sox2-positive epithelial stem cell niches were sparsely distributed and extended to the occlusal side. We also detected continuously proliferating cells in the cervical loop and Hertwig's epithelial root sheath of the root-analogue dentin. CONCLUSIONS: Our findings suggest that guinea pig cheek teeth have three ABs, and the complex configuration of these types of teeth may be attributed to the prompt formation of crown-analogue dentin followed by the long-term formation of root-analogue dentin.

    DOI: 10.1016/j.job.2019.01.002

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  • Craniofacial abnormality with skeletal dysplasia in mice lacking chondroitin sulfate N-acetylgalactosaminyltransferase-1. 査読 国際誌

    Hiroko Ida-Yonemochi, Wataru Morita, Nobuo Sugiura, Ryosuke Kawakami, Yuki Morioka, Yuka Takeuchi, Toshiya Sato, Shunichi Shibata, Hideto Watanabe, Takeshi Imamura, Michihiro Igarashi, Hayato Ohshima, Kosei Takeuchi

    Scientific reports   8 ( 1 )   17134 - 17134   2018年11月

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    担当区分:筆頭著者, 責任著者   記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)  

    Chondroitin sulfate (CS) proteoglycan is a major component of the extracellular matrix and plays an important part in organogenesis. To elucidate the roles of CS for craniofacial development, we analyzed the craniofacial morphology in CS N-acetylgalactosaminyltransferase-1 (T1) gene knockout (KO) mice. T1KO mice showed the impaired intramembranous ossification in the skull, and the final skull shape of adult mice included a shorter face, higher and broader calvaria. Some of T1KO mice exhibited severe facial developmental defect, such as eye defects and cleft lip and palate, causing embryonic lethality. At the postnatal stages, T1KO mice with severely reduced CS amounts showed malocclusion, general skeletal dysplasia and skin hyperextension, closely resembling Ehlers-Danlos syndrome-like connective tissue disorders. The production of collagen type 1 was significantly downregulated in T1KO mice, and the deposition of CS-binding molecules, Wnt3a, was decreased with CS in extracellular matrices. The collagen fibers were irregular and aggregated, and connective tissues were dysorganized in the skin and calvaria of T1KO mice. These results suggest that CS regulates the shape of the craniofacial skeleton by modulating connective tissue organization and that the remarkable reduction of CS induces hypoplasia of intramembranous ossification and cartilage anomaly, resulting in skeletal dysplasia.

    DOI: 10.1038/s41598-018-35412-5

    PubMed

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  • Msx2 Prevents Stratified Squamous Epithelium Formation in the Enamel Organ. 査読 国際誌

    M Nakatomi, H Ida-Yonemochi, C Nakatomi, K Saito, S Kenmotsu, R L Maas, H Ohshima

    Journal of dental research   97 ( 12 )   1355 - 1364   2018年11月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)  

    Tooth enamel is manufactured by the inner enamel epithelium of the multilayered enamel organ. Msx2 loss-of-function mutation in a mouse model causes an abnormal accumulation of epithelial cells in the enamel organ, but the underlying mechanism by which Msx2 regulates amelogenesis is poorly understood. We therefore performed detailed histological and molecular analyses of Msx2 null mice. Msx2 null ameloblasts and stratum intermedium (SI) cells differentiated normally in the early stages of amelogenesis. However, during subsequent developmental stages, the outer enamel epithelium (OEE) became highly proliferative and transformed into a keratinized stratified squamous epithelium that ectopically expressed stratified squamous epithelium markers, including Heat shock protein 25, Loricrin, and Keratin 10. Moreover, expression of hair follicle-specific keratin genes such as Keratin 26 and Keratin 73 was upregulated in the enamel organ of Msx2 mutants. With the accumulation of keratin in the stellate reticulum (SR) region and subsequent odontogenic cyst formation, SI cells gradually lost the ability to differentiate, and the expression of Sox2 and Notch1 was downregulated, leading to ameloblast depolarization. As a consequence, the organization of the Msx2 mutant enamel organ became disturbed and enamel failed to form in the normal location. Instead, there was ectopic mineralization that likely occurred within the SR. In summary, we show that during amelogenesis, Msx2 executes a bipartite function, repressing the transformation of OEE into a keratinized stratified squamous epithelium while simultaneously promoting the development of a properly differentiated enamel organ competent for enamel formation.

    DOI: 10.1177/0022034518777746

    PubMed

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  • Nestin expression is differently regulated between odontoblasts and the subodontoblastic layer in mice. 査読 国際誌

    Mitsushiro Nakatomi, Angela Quispe-Salcedo, Masaka Sakaguchi, Hiroko Ida-Yonemochi, Hideyuki Okano, Hayato Ohshima

    Histochemistry and cell biology   149 ( 4 )   383 - 391   2018年4月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)  

    The Nestin gene encodes type VI intermediate filament and is known to be expressed in undifferentiated cells during neurogenesis and myogenesis. To regulate Nestin expression, the first or second intron enhancer is activated in a tissue-dependent manner, for example, the former in mesodermal cells and the latter in neural stem cells. Although Nestin has also been used as a differentiation marker for odontoblasts during tooth development, how Nestin expression is regulated in odontoblasts remains unclear. Therefore, this study aimed to compare the expression patterns of Nestin-GFP (green fluorescent protein) with that of endogenous Nestin in developing teeth of Nestin-EGFP (enhanced GFP) transgenic mice, in which the second intron enhancer is connected with the EGFP domain, at postnatal 7d, 3w, and 8w. Immunohistochemical and in situ hybridization analyses revealed that endogenous Nestin protein and Nestin mRNA were intensely expressed in differentiated odontoblasts, while GFP immunoreactivity, which reflects the activity of Nestin second intron enhancer-mediated transcription, was mainly observed in the subodontoblastic layer. These results indicate that the first intron enhancer may be activated in differentiated odontoblasts. Intriguingly, Nestin-GFP expression in the subodontoblastic layer was found to be restricted to the coronal pulp of molars, which is susceptible to tooth injuries. Because the subodontoblastic layer serves as a reservoir of newly differentiated odontoblast-like cells upon exogenous stimuli to dentin, our findings suggest that the original odontoblasts and regenerated odontoblast-like cells may differently regulate Nestin expression.

    DOI: 10.1007/s00418-018-1651-3

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  • Donor–host tissue interaction in allogenic transplanted tooth germ with special reference to periodontal tissue 査読

    Tetsuro Nakaki, Kuniko Nakakura-Ohshima, Eizo Nakagawa, Yuko Ishikawa, Kotaro Saito, Hiroko Ida-Yonemochi, Hayato Ohshima

    Journal of Oral Biosciences   60 ( 1 )   21 - 30   2018年3月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:Japanese Association for Oral Biology  

    Objectives: Limited biological evidence exists regarding donor–host interaction in the periodontal tissue during allogenic tooth germ transplantation. This study aimed to clarify donor–host tissue interactions during periodontal tissue healing following tooth germ transplantation. Methods: This study compared the localization of putative stem cells in the periodontal ligament (PDL) by 5-bromo-2′-deoxyuridine (BrdU), Gli1, and periostin immunoreactions using pulse-chase paradigm (BrdU prenatal labeling: peritoneal pulse injections at embryonic days [E] 15–17) in TetOP–H2B–GFP mice (doxycycline administration at E14.5). The current study characterized periodontal tissue healing following allogenic tooth grafts in GFP-labeled donor or host and wild-type mice by pulse-chase paradigm and GFP, BrdU, Gli1, and periostin immunohistochemistry. Results: BrdU prenatal labeling demonstrated that dense label-retaining cells (BrdU–LRCs) disappeared from the PDL by postnatal week 2 (P2W). However, H2B–GFP–LRCs were localized in the PDL of TetOP–H2B–GFP mice during P3–8W, and Gli1-positive cells in the PDL increased at P2–3W, showing that H2B–GFP–LRCs in the PDL are derived from non-proliferating cells during E15–17. Transplanted molars formed cusps and roots and erupted into occlusion by two weeks postoperatively. The junctional epithelium and tooth-related zone of PDL were exclusively composed of donor cells, whereas the PDL alveolar-related zone was a hybrid structure of donor and host cells. Conclusions: The current tooth germ transplantation suggests that the PDL contains putative stem cells, which never proliferate during E15–17, and is composed of resident dental follicle-derived cells and other cell population.

    DOI: 10.1016/j.job.2018.02.002

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  • Donor-host tissue interaction in allogenic transplanted tooth germ with special reference to periodontal tissue 査読

    Tetsuro Nakaki, Kuniko Nakakura-Ohshima, Eizo Nakagawa, Yuko Ishikawa, Kotaro Saito, Hiroko Ida-Yonemochi, Hayato Ohshima

    JOURNAL OF ORAL BIOSCIENCES   60 ( 1 )   21 - 30   2018年3月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:ELSEVIER SCIENCE BV  

    Objectives: Limited biological evidence exists regarding donor host interaction in the periodontal tissue during allogenic tooth germ transplantation. This study aimed to clarify donor host tissue interactions during periodontal tissue healing following tooth germ transplantation.Methods: This study compared the localization of putative stem cells in the periodontal ligament (PDL) by 5-bromo-2'-deoxyuridine (BrdU), Gli1, and periostin immunoreactions using pulse-chase paradigm (BrdU prenatal labeling: peritoneal pulse injections at embryonic days [E] 15-17) in TetOP-H2B-GFP mice (doxycycline administration at E14.5). The current study characterized periodontal tissue healing following allogenic tooth grafts in GFP-labeled donor or host and wild-type mice by pulse-chase paradigm and GFP, BrdU, Gli1, and periostin immunohistochemistry.Results: BrdU prenatal labeling demonstrated that dense label-retaining cells (BrdU-LRCs) disappeared from the PDL by postnatal week 2 (P2W). However, H2B-GFP-LRCs were localized in the PDL of TetOP- H2B GFP mice during P3-8W, and Glil-positive cells in the PDL increased at P2-3W, showing that H2B GFP-LRCs in the PDL are derived from non-proliferating cells during E15-17. Transplanted molars formed cusps and roots and erupted into occlusion by two weeks postoperatively. The junctional epithelium and tooth-related zone of PDL were exclusively composed of donor cells, whereas the PDL alveolar-related zone was a hybrid structure of donor and host cells.Conclusions: The current tooth germ transplantation suggests that the PDL contains putative stem cells, which never proliferate during E15-17, and is composed of resident dental follicle-derived cells and other cell population. (C) 2018 Japanese Association for Oral Biology. Published by Elsevier B.V. All rights reserved.

    DOI: 10.1016/j.job.2018.02.002

    Web of Science

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  • Orthodontic force application upregulated pain-associated prostaglandin-I2/PGI2-receptor/TRPV1 pathway-related gene expression in rat molars. 査読

    Mariko Ohkura, Naoto Ohkura, Nagako Yoshiba, Kunihiko Yoshiba, Hiroko Ida-Yonemochi, Hayato Ohshima, Isao Saito, Takashi Okiji

    Odontology   106 ( 1 )   2 - 10   2018年1月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)  

    This study aimed to analyze the mRNA expression and protein localization of prostaglandin I2 (PGI2) synthase (PGIS), the PGI2 receptor (IP receptor) and transient receptor potential cation channel, subfamily V, member 1 (TRPV1) in force-stimulated rat molars, toward the elucidation of the PGI2-IP receptor-TRPV1 pathway that is in operation in the pulp and possibly associated with orthodontic pain and inflammation. Experimental force was applied to the maxillary first and second molars by inserting an elastic band between them for 6-72 h. PGIS, PTGIR (the IP receptor gene), and TRPV1 mRNA levels in the coronal pulp were analyzed with real-time PCR. PGIS, IP receptor, and TRPV1 proteins were immunostained. The force stimulation induced significant upregulation of PGIS at 6-24 h, and PTGIR and TRPV1 at 6 and 12 h in the pulp. PGIS was immunolocalized in odontoblasts and some fibroblasts in the force-stimulated pulp. The IP receptor and TRPV1 immunoreactivities were detected on odontoblasts and some nerve fibers. It was concluded that PGIS, PTGIR, and TRPV1 in rat molar pulp were significantly upregulated shortly after the force application, and that the IP receptor was co-expressed on TRPV1-expressing nerves and odontoblasts. These findings suggest that the PGI2-IP receptor-TRPV1 pathway is associated with the acute phase of force-induced pulp changes involving odontoblasts and nerves.

    DOI: 10.1007/s10266-017-0309-2

    PubMed

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  • Quiescent adult stem cells in murine teeth are regulated by Shh signaling. 査読 国際誌

    Yuko Ishikawa, Mitsushiro Nakatomi, Hiroko Ida-Yonemochi, Hayato Ohshima

    Cell and tissue research   369 ( 3 )   497 - 512   2017年9月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:SPRINGER  

    The mechanisms regulating the maintenance of quiescent adult stem cells in teeth remain to be fully elucidated. Our aim is to clarify the relationship between BrdU label-retaining cells (LRCs) and sonic hedgehog (Shh) signaling in murine teeth. After prenatal BrdU labeling, mouse pups were analyzed during postnatal day 1 (P1) to week 5 (P5W). Paraffin sections were processed for immunohistochemistry for BrdU, Sox2, Gli1, Shh, Patched1 (Ptch1) and Ki67 and for in situ hybridization for Shh and Ptch1. Dense LRCs, Gli1-(+) cells and Ptch1-(+) cells were co-localized in the outer enamel epithelium of the apical bud and apical dental papilla of incisors. In developing molars, dense LRCs were numerous at P1 but then decreased in number over the course of odontogenesis and were maintained in the center of pulp tissue. Gli1-(+) cells were maintained in the pulp horn during the examined stages, while they increased in number and were maintained in the center of pulp tissue during P2-5W. Ptch1-(+) cells were localized in the pulp horn at P1 and increased in number in the center of the pulp after P3W. Shh mRNA was first expressed in the enamel epithelium and then shifted to odontoblasts and other pulp cells. Shh protein was distributed in the epithelial and mesenchymal tissues of incisors and molars. These findings suggest that quiescent dental stem cells are regulated by Shh signaling, and that Shh signaling plays a crucial role in the differentiation and integrity of odontoblasts during epithelial-mesenchymal interactions and dentinogenesis.

    DOI: 10.1007/s00441-017-2632-x

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  • Effects of pulpotomy using mineral trioxide aggregate on prostaglandin transporter and receptors in rat molars. 査読 国際誌

    Naoto Ohkura, Naoki Edanami, Ryosuke Takeuchi, Aiko Tohma, Mariko Ohkura, Nagako Yoshiba, Kunihiko Yoshiba, Hiroko Ida-Yonemochi, Hayato Ohshima, Takashi Okiji, Yuichiro Noiri

    Scientific reports   7 ( 1 )   6870 - 6870   2017年7月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)  

    Mineral trioxide aggregate (MTA) is a commonly used dental pulp-capping material with known effects in promoting reparative dentinogenesis. However, the mechanism by which MTA induces dentine repair remains unclear. The aim of the present study was to investigate the role of prostaglandin E2 (PGE2) in dentine repair by examining the localisation and mRNA expression levels of its transporter (Pgt) and two of its receptors (Ep2 and Ep4) in a rat model of pulpotomy with MTA capping. Ep2 expression was detected in odontoblasts, endothelial cells, and nerve fibres in normal and pulpotomised tissues, whereas Pgt and Ep4 were immunolocalised only in the odontoblasts. Moreover, mRNA expression of Slco2a1 (encoding Pgt), Ptger2 (encoding Ep2), and Ptger4 (encoding Ep4) was significantly upregulated in pulpotomised dental pulp and trigeminal ganglia after MTA capping. Our results provide insights into the functions of PGE2 via Pgt and Ep receptors in the healing dentine/pulp complex and may be helpful in developing new therapeutic targets for dental disease.

    DOI: 10.1038/s41598-017-07167-y

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  • Pannexin 3 regulates proliferation and differentiation of odontoblasts via its hemichannel activities. 査読 国際誌

    Tsutomu Iwamoto, Takashi Nakamura, Masaki Ishikawa, Keigo Yoshizaki, Asuna Sugimoto, Hiroko Ida-Yonemochi, Hayato Ohshima, Masahiro Saito, Yoshihiko Yamada, Satoshi Fukumoto

    PloS one   12 ( 5 )   e0177557   2017年

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:PUBLIC LIBRARY SCIENCE  

    Highly coordinated regulation of cell proliferation and differentiation contributes to the formation of functionally shaped and sized teeth; however, the mechanism underlying the switch from cell cycle exit to cell differentiation during odontogenesis is poorly understood. Recently, we identified pannexin 3 (Panx3) as a member of the pannexin gap junction protein family from tooth germs. The expression of Panx3 was predominately localized in preodontoblasts that arise from dental papilla cells and can differentiate into dentin-secreting odontoblasts. Panx3 also co-localized with p21, a cyclin-dependent kinase inhibitor protein, in preodontoblasts. Panx3 was expressed in primary dental mesenchymal cells and in the mDP dental mesenchymal cell line. Both Panx3 and p21 were induced during the differentiation of mDP cells. Overexpression of Panx3 in mDP cells reduced cell proliferation via up-regulation of p21, but not of p27, and promoted the Bone morphogenetic protein 2 (BMP2)-induced phosphorylation of Smad1/5/8 and the expression of dentin sialophosphoprotein (Dspp), a marker of differentiated odontoblasts. Furthermore, Panx3 released intracellular ATP into the extracellular space through its hemichannel and induced the phosphorylation of AMP-activated protein kinase (AMPK). 5-Aminoimidazole-4-carboxamide-ribonucleoside (AICAR), an activator of AMPK, reduced mDP cell proliferation and induced p21 expression. Conversely, knockdown of endogenous Panx3 by siRNA inhibited AMPK phosphorylation, p21 expression, and the phosphorylation of Smad1/5/8 even in the presence of BMP2. Taken together, our results suggest that Panx3 modulates intracellular ATP levels, resulting in the inhibition of odontoblast proliferation through the AMPK/p21 signaling pathway and promotion of cell differentiation by the BMP/Smad signaling pathway.

    DOI: 10.1371/journal.pone.0177557

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  • Locally Produced BDNF Promotes Sclerotic Change in Alveolar Bone after Nerve Injury. 査読 国際誌

    Hiroko Ida-Yonemochi, Yurie Yamada, Hiroyuki Yoshikawa, Kenji Seo

    PloS one   12 ( 1 )   e0169201   2017年

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    担当区分:筆頭著者   記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:PUBLIC LIBRARY SCIENCE  

    Brain-derived neurotrophic factor (BDNF), which is released due to nerve injury, is known to promote the natural healing of injured nerves. It is often observed that damage of mandibular canal induces local sclerotic changes in alveolar bone. We reported that peripheral nerve injury promotes the local production of BDNF; therefore, it was possible to hypothesize that peripheral nerve injury affects sclerotic changes in the alveolar bone. This study aimed to evaluate the effect of BDNF on osteogenesis using in vitro osteoblast-lineage cell culture and an in vivo rat osteotomy model. MC3T3-E1 cells were cultured with BDNF and were examined for cell proliferative activity, chemotaxis and mRNA expression levels of osteoblast differentiation markers. For in vivo study, inferior alveolar nerve (IAN) injury experiments and mandibular cortical osteotomy were performed using a rat model. In the osteotomy model, exogenous BDNF was applied to bone surfaces after corticotomy of the mandible, and we morphologically analyzed the new bone formation. As a result, mRNA expression of osteoblast differentiation marker, osteocalcin, was significantly increased by BDNF, although cell proliferation and migration were not affected. In the in vivo study, osteopontin-positive new bone formation was significantly accelerated in the BDNF-grafted groups, and active bone remodeling, involving trkB-positive osteoblasts and osteocytes, continued after 28 days. In conclusion, BDNF stimulated the differentiation of MC3T3-E1 cells and it promoted new bone formation and maturation. These results suggested that local BDNF produced by peripheral nerve injury contributes to accelerating sclerotic changes in the alveolar bone.

    DOI: 10.1371/journal.pone.0169201

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  • The Semaphorin 4D-RhoA-Akt Signal Cascade Regulates Enamel Matrix Secretion in Coordination With Cell Polarization During Ameloblast Differentiation. 査読 国際誌

    Keishi Otsu, Hiroko Ida-Yonemochi, Naoki Fujiwara, Hidemitsu Harada

    Journal of bone and mineral research : the official journal of the American Society for Bone and Mineral Research   31 ( 11 )   1943 - 1954   2016年11月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:WILEY-BLACKWELL  

    During tooth development, oral epithelial cells differentiate into ameloblasts in order to form the most mineralized tissue in the vertebrate body: enamel. During this process, ameloblasts directionally secrete enamel matrix proteins and morphologically change from low columnar cells to polarized tall columnar cells, both of which are essential for the proper formation of enamel. In this study, we elucidated the molecular mechanism that integrates ameloblast function and morphology. Immunohistochemistry revealed that the restricted expression of semaphorin 4D (Sema4D) and RhoA activation status are closely associated with ameloblast differentiation in mouse incisors. In addition, in vitro gain-of-function and loss-of-function experiments demonstrated that Sema4D acts upstream of RhoA to regulate cell polarity and amelogenin expression via the Plexin B1/Leukemia-associated RhoGEF (LARG) complex during ameloblast differentiation. Experiments in transgenic mice demonstrated that expression of a dominant-negative form of RhoA in dental epithelium hindered ameloblast differentiation and subsequent enamel formation, as well as perturbing the establishment of polarized cell morphology and vectorial amelogenin expression. Finally, we showed that spatially restricted Akt mediates between Sema4D-RhoA signaling and these downstream cellular events. Collectively, our results reveal a novel signaling network, the Sema4D-RhoA-Akt signal cascade, that coordinates cellular function and morphology and highlights the importance of specific spatiotemporally restricted components of a signaling pathway in the regulation of ameloblast differentiation. © 2016 American Society for Bone and Mineral Research.

    DOI: 10.1002/jbmr.2876

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  • Osteopontin Is Essential for Type I Collagen Secretion in Reparative Dentin. 査読 国際誌

    K Saito, M Nakatomi, H Ida-Yonemochi, H Ohshima

    Journal of dental research   95 ( 9 )   1034 - 41   2016年8月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:SAGE PUBLICATIONS INC  

    Osteopontin (OPN) is a highly phosphorylated glycoprotein that is a prominent component of the mineralized extracellular matrix of bone. The secretion of OPN by immunocompetent cells plays a role in the differentiation of odontoblast-like cells during pulpal healing following tooth transplantation. This study aimed to clarify the role of OPN during reparative dentinogenesis. A groove-shaped cavity was prepared on the mesial surface of the upper first molars of wild-type (WT) and Opn knockout (KO) mice, and the samples were collected at intervals of 1 to 14 d. The demineralized sections were processed for immunohistochemistry for Ki67, nestin, OPN, dentin sialoprotein (DSP), integrin αvβ3, and type I collagen; in situ hybridization for Opn, col1a1, and dentin sialophosphoprotein (Dspp); and apoptosis assay. For the loss and gain of function experiments, an in vitro culture assay for evaluating dentin-pulp complex regeneration was performed. On day 1 in WT mice, odontoblasts beneath the affected dentin lost nestin immunoreactivity. On day 3, the expression of Opn was recognized at the mesial dental pulp, and OPN was deposited along the predentin-dentin border. Nestin-positive newly differentiated odontoblast-like cells expressed both Dspp and col1a1 and showed positive immunoreactivity for integrin αvβ3, DSP, and type I collagen. Until day 14, reparative dentin formation continued next to the preexisting dentin at the mesial coronal pulp. In contrast, there was no reparative dentin in the Opn KO mice where nestin- and DSP-positive newly differentiated odontoblast-like cells lacked immunoreaction for type I collagen. The in vitro organ culture demonstrated that the administration of recombinant OPN rescued the type I collagen secretion by odontoblast-like cells in the Opn KO mice. The results suggested that the deposition of OPN at the calcification front is essential for the type I collagen secretion by newly differentiated odontoblast-like cells to form reparative dentin during pulpal healing following cavity preparation.

    DOI: 10.1177/0022034516645333

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  • The glycogen metabolism via Akt signaling is important for the secretion of enamel matrix in tooth development. 査読 国際誌

    Hiroko Ida-Yonemochi, Keishi Otsu, Hayato Ohshima, Hidemitsu Harada

    Mechanisms of development   139   18 - 30   2016年2月

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    担当区分:筆頭著者, 責任著者   記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:ELSEVIER SCIENCE BV  

    Cells alter their energy metabolism depending on the stage of differentiation or various environments. In the ameloblast differentiation of continuous growing mouse incisors, we found temporary glycogen storage in preameloblasts before the start of enamel matrix secretion and investigated the relationship between enamel matrix secretion and glycogen metabolism. Immunohistochemistry showed that in the transitional stage from preameloblasts to secretory ameloblasts, the glycogen synthase changed from the inactive form to the active form, the expression of glycogen phosphorylase increased, and further, the levels of IGF-1, IGF-1 receptor and activated Akt increased. These results suggested that the activation of Akt signaling via IGF is linked to the onset of both glycogen metabolism and enamel matrix deposition. In the experiments using organ culture and ameloblast cell line, the activation of Akt signaling by IGF-1 stimulated glycogen metabolism through the up-regulation of Glut-1,-4 and Gsk-3β and the dephosphorylation of glycogen synthase. Subsequently, they resulted in increased enamel matrix secretion. In contrast, some inhibitors of Akt signals and glycogen synthesis/degradation down-regulated enamel matrix secretion. Taking these findings together, glycogen metabolism via Akt signaling is an essential system for the secretion of enamel matrix in ameloblast differentiation.

    DOI: 10.1016/j.mod.2016.01.002

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  • Role of MSX1 in Osteogenic Differentiation of Human Dental Pulp Stem Cells. 査読 国際誌

    Noriko Goto, Katsumi Fujimoto, Sakiko Fujii, Hiroko Ida-Yonemochi, Hayato Ohshima, Takeshi Kawamoto, Mitsuhide Noshiro, Chisa Shukunami, Katsuyuki Kozai, Yukio Kato

    Stem cells international   2016   8035759 - 8035759   2016年

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:Hindawi Limited  

    Msh homeobox 1 (MSX1) encodes a transcription factor implicated in embryonic development of limbs and craniofacial tissues including bone and teeth. Although MSX1 regulates osteoblast differentiation in the cranial bone of young animal, little is known about the contribution of MSX1 to the osteogenic potential of human cells. In the present study, we investigate the role of MSX1 in osteogenic differentiation of human dental pulp stem cells isolated from deciduous teeth. When these cells were exposed to osteogenesis-induction medium, runt-related transcription factor-2 (RUNX2), bone morphogenetic protein-2 (BMP2), alkaline phosphatase (ALPL), and osteocalcin (OCN) mRNA levels, as well as alkaline phosphatase activity, increased on days 4-12, and thereafter the matrix was calcified on day 14. However, knockdown of MSX1 with small interfering RNA abolished the induction of the osteoblast-related gene expression, alkaline phosphatase activity, and calcification. Interestingly, DNA microarray and PCR analyses revealed that MSX1 knockdown induced the sterol regulatory element-binding protein 2 (SREBP2) transcriptional factor and its downstream target genes in the cholesterol synthesis pathway. Inhibition of cholesterol synthesis enhances osteoblast differentiation of various mesenchymal cells. Thus, MSX1 may downregulate the cholesterol synthesis-related genes to ensure osteoblast differentiation of human dental pulp stem cells.

    DOI: 10.1155/2016/8035759

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  • Responses of pulp vasculature after cavity preparation in rat molars 査読

    Kotaro Saito, Hiroko Ida-Yonemochi, Tatsuo Ushiki, Hayato Ohshima

    Journal of Oral Biosciences   57 ( 3 )   157 - 164   2015年8月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:Japanese Association for Oral Biology  

    Objectives: Our recent study showed that cavity preparation increases the number of proliferative cells in the dental pulp during postoperative days 2-5. This study aimed to clarify pulp vascular changes following cavity preparation. Methods: Groove-shaped cavities were prepared on the medial surfaces of the upper first molars of 100-day-old Wistar rats. The animals were perfusion-fixed and tissues were collected during postoperative days 1-30, with subsequent India ink perfusion, immunohistochemistry for type IV collagen, CD31, and protein gene product (PGP) 9.5 and scanning electron microscopy with KOH digestion. The untreated upper first molars were used as controls. Results: In the controls, blood vessels with large diameters were located in the center of the pulp tissue and ramified to make capillary networks and PGP9.5-positive nerves were extensively arborized to form the subodontoblastic nerve plexus beneath the odontoblast layer. Cavity preparation induced disturbance in injured odontoblasts and subodontoblastic capillaries and nerves. Blood vessel density and thickness subsequently increased in the center and periphery of the pulp tissues with the exception of the subodontoblastic capillary network during postoperative days 3-5. PGP9.5-positive nerves overlapped with CD31-positive blood vessels in the mesial coronal pulp. Until day 30, when the tertiary dentin formation was completed, the pulp blood vasculature showed the same distribution and morphological features as that of the controls. Conclusions: These results suggest that increased vascular flow under neuronal regulation plays an important role in cell proliferation in the dental pulp following cavity preparation.

    DOI: 10.1016/j.job.2015.05.003

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  • The effects of enzymatically synthesized glycogen on the pulpal healing process of extracted teeth following intentionally delayed replantation in mice 査読

    Angela Quispe-Salcedo, Hiroko Ida-Yonemochi, Hayato Ohshima

    JOURNAL OF ORAL BIOSCIENCES   57 ( 2 )   124 - 130   2015年5月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:ELSEVIER  

    Objectives: Glucose uptake plays a crucial role in early tooth morphogenesis and size determination. Recently, enzymatically synthesized glycogen (ESG), with the characteristics of natural glycogen (a major storage form of glucose), has been developed. This study aimed to elucidate the effectiveness of ESG on the pulpal healing process following intentionally delayed tooth replantation in mice.Methods: The upper first molar was extracted, immersed in phosphate buffered saline (PBS) or ESG (5000 kDa) solution (1 mg/mL) for 60 min, and then replanted. Immunohistochemistry (for nestin, osteopontin, and TUNEL assay, and reverse transcription-polymerase chain reaction were performed at different time points.Results: Increased apoptosis occurred in the dental pulp of mice from both treatment groups at Day 7, followed by active cell proliferation at Day 14 and tertiary dentin and/or bone-like tissue deposition at Day 21, in the PBS group. In contrast, active cell proliferation and coronal immunoreaction for nestin occurred around Day 10, and hard tissue deposition were observed at Day 14, in the ESG group. The mRNA expression of genes encoding dentin sialophosphoprotein and nestin first reappeared in the ESG group at Day 5, while expression levels of alkaline phosphatase and osteopontin, as well as Crillc, tended to increase from Day 3 in both groups, and that of the stem cell marker, octamer-binding transcription factor Oct314, greatly enhanced at Day 1, particularly in the ESG group.Conclusions: ESG improved the pulpal healing process of extracted teeth following intentionally delayed replantation, although both ESG and PBS may induce the formation of bone-like tissue. (C) 2015 Japanese Association for Oral Biology. Published by Elsevier B.V. All rights reserved.

    DOI: 10.1016/j.job.2015.01.003

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  • Contribution of donor and host mesenchyme to the transplanted tooth germs. 査読 国際誌

    T Nakaki, K Saito, H Ida-Yonemochi, E Nakagawa, S Kenmotsu, H Ohshima

    Journal of dental research   94 ( 1 )   112 - 20   2015年1月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:SAGE PUBLICATIONS INC  

    Autologous tooth germ transplantation of immature teeth is an alternative method of tooth replacement that could be used instead of dental implants in younger patients. However, it is paramount that the dental pulp remain vital and that root formation continue in the transplanted location. The goal of this study is to characterize the healing of allogenic tooth grafts in an animal model using GFP-labeled donor or host postnatal mice. In addition, the putative stem cells were labeled before transplantation with a pulse-chase paradigm. Transplanted molars formed cusps and roots and erupted into occlusion by 2 wk postoperatively. Host label-retaining cells (LRCs) were maintained in the center of pulp tissue associating with blood vessels. Dual labeling showed that a proportion of LRCs were incorporated into the odontoblast layer. Host cells, including putative dendritic cells and the endothelium, also immigrated into the pulp tissue but did not contribute to the odontoblast layer. Therefore, LRCs or putative mesenchymal stem cells are retained in the transplanted pulps. Hertwig's epithelial root sheath remains vital, and epithelial LRCs are present in the donor cervical loops. Thus, the dynamic donor-host interaction occurred in the developing transplant, suggesting that these changes affect the characteristics of the dental pulp.

    DOI: 10.1177/0022034514556536

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  • Effects of a triple antibiotic solution on pulpal dynamics after intentionally delayed tooth replantation in mice. 査読 国際誌

    Angela Quispe-Salcedo, Hiroko Ida-Yonemochi, Hayato Ohshima

    Journal of endodontics   40 ( 10 )   1566 - 72   2014年10月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:ELSEVIER SCIENCE INC  

    INTRODUCTION: This study analyzed the detailed biological events underlying pulpal dynamics evoked by 3Mix (the mixture of ciprofloxacin, metronidazole, and minocycline) solution after intentionally delayed tooth replantation because 3Mix improves pulpal healing after tooth injuries. METHODS: The maxillary first molars of 3-week-old mice were extracted and immersed in 3Mix solution for 30 minutes in comparison with phosphate buffered saline (PBS) alone. Cell proliferation, apoptosis, and differentiation were assessed in extracted/replanted teeth during days 0-14 using immunohistochemistry, apoptosis assay, and reverse-transcriptase polymerase chain reaction. RESULTS: 3Mix solution accelerated odontoblast differentiation in the coronal pulp on day 7 and tertiary dentin formation on day 14, whereas the regenerative process was delayed in the PBS group. Cell proliferation and apoptosis occurred in the pulp of the 3Mix group during days 5-7 and subsequently decreased from days 7-14. On day 5, dentin sialophosphoprotein and nestin were first recovered in the 3Mix group, whereas expression levels for alkaline phosphatase, osteopontin, and osteocalcin increased in the PBS group. The expression levels for octamer-binding factor 3/4A and 3/4B reached the maximum level on day 1 and were sharply decreased on day 3 in both groups. High expression levels of Cd11c were first observed in the 3Mix group on day 1 and later at days 5 and 7. CONCLUSIONS: The results suggest that the application of 3Mix may suppress osteoblast differentiation by the migration of dendritic cells to the injury site and via the activation of stem/progenitor cells, resulting in the acceleration of odontoblastlike cell differentiation.

    DOI: 10.1016/j.joen.2014.05.005

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  • Perlecan-enriched intercellular space of junctional epithelium provides primary infrastructure for leukocyte migration through squamous epithelial cells. 査読 国際誌

    Satoshi Maruyama, Manami Itagaki, Hiroko Ida-Yonemochi, Takehiko Kubota, Manabu Yamazaki, Tatsuya Abé, Hiromasa Yoshie, Jun Cheng, Takashi Saku

    Histochemistry and cell biology   142 ( 3 )   297 - 305   2014年9月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:SPRINGER  

    The aim of this study was to demonstrate the presence of intraepithelial stroma represented by extracellular matrix (ECM) deposits in the junctional epithelium to clarify its function as a scaffold for leukocyte migration through epithelial cells. Twenty-three biopsy specimens from the gingiva including the junctional epithelium were examined to determine comparative protein and gene level expression profiles for keratin and ECM molecules between the junctional epithelium and the gingival epithelium using immunohistochemistry and in situ hybridization. Intraepithelial leukocyte types and frequencies were also determined and compared between the junctional and gingival epithelia. In the junctional epithelium, which was positive for keratin 19, perlecan was strongly deposited in intercellular space of the whole epithelial layer, while it was faintly positive around the parabasal layer of the gingival epithelium. Perlecan mRNA signals were enhanced to a greater degree in both epithelial and inflammatory cells within the junctional epithelium. In the junctional epithelium, greater numbers of neutrophils and macrophages were found as compared with the gingival epithelium. Our results showed that perlecan is the primary ECM molecule comprising intraepithelial stroma of the junctional epithelium, in which leukocytes may migrate on ECM scaffolds in intercellular space toward the surface of the gingival sulci or pockets.

    DOI: 10.1007/s00418-014-1198-x

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  • Establishment of in vitro culture system for evaluating dentin-pulp complex regeneration with special reference to the differentiation capacity of BrdU label-retaining dental pulp cells. 査読 国際誌

    Hiroko Ida-Yonemochi, Mitsushiro Nakatomi, Hayato Ohshima

    Histochemistry and cell biology   142 ( 3 )   323 - 33   2014年9月

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    担当区分:筆頭著者   記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:SPRINGER  

    We have proposed the new hypothesis that dental pulp stem cells play crucial roles in the pulpal healing process following exogenous stimuli in cooperation with progenitors. This study aimed to establish an in vitro culture system for evaluating dentin-pulp complex regeneration with special reference to the differentiation capacity of slow-cycling long-term label-retaining cells (LRCs). Three intraperitoneal injections of BrdU were given to pregnant ICR mice to map LRCs in the mature tissues of born animals. The upper bilateral first molars of 3-week-old mice were extracted and divided into two pieces and cultured for 0, 1, 3, 5 and 7 days using the Trowel's method. We succeeded in establishing an in vitro culture system for evaluating dentin-pulp complex regeneration, where most odontoblasts were occasionally degenerated and lost nestin immunoreactivity because of the separation of cell bodies from cellular processes in the dentin matrix by the beginning of in vitro culture. Numerous dense LRCs mainly resided in the center of the dental pulp associating with blood vessels throughout the experimental periods. On postoperative days 1-3, the periphery of the pulp tissue including the odontoblast layer showed degenerative features. By Day 7, nestin-positive odontoblast-like cells were arranged along the pulp-dentin border and dense LRCs were committed in the odontoblast-like cells. These results suggest that dense LRCs in the center of the dental pulp associating with blood vessels were supposed to be dental pulp stem/progenitor cells possessing regenerative capacity for forming newly differentiated odontoblast-like cells.

    DOI: 10.1007/s00418-014-1200-7

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  • Reciprocal expressions between α-dystroglycan and integrin β1, perlecan receptors, in the murine enamel organ development. 査読 国際誌

    Ida-Yonemochi H, Harada H, Ohshima H, Saku T

    Gene expression patterns : GEP   13 ( 8 )   293 - 302   2013年12月

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    担当区分:筆頭著者   記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)  

    DOI: 10.1016/j.gep.2013.05.004

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  • Bcl11b transcription factor plays a role in the maintenance of the ameloblast-progenitors in mouse adult maxillary incisors 査読

    Yoshinori Katsuragi, Junko Anraku, Mitsushiro Nakatomi, Hiroko Ida-Yonemochi, Miki Obata, Yukio Mishima, Yoshiyuki Sakuraba, Yoichi Gondo, Yasumitsu Kodama, Atsushi Nishikawa, Ritsuo Takagi, Hayato Ohshima, Ryo Kominami

    MECHANISMS OF DEVELOPMENT   130 ( 9-10 )   482 - 492   2013年9月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:ELSEVIER SCIENCE BV  

    Rodent incisors maintain the ability to grow continuously and their labial dentin is covered with enamel. Bcl11b zinc-finger transcription factor is expressed in ameloblast progenitors in mouse incisors and its absence in Bcl11b(KO/KO) mice results in a defect in embryonic tooth development. However, the role of Bcl11b in incisor maintenance in adult tissue was not studied because of death at birth in Bcl11b(KO/KO) mice. Here, we examined compound heterozygous Bcl11b(S826G/KO) mice, one allele of which has an amino acid substitution of serine at position 826 for glycine, that exhibited hypoplastic maxillary incisors with lower concentrations of minerals at the enamel and the dentin, accompanying the maxillary bone hypoplasia. Histological examinations revealed hypoplasia of the labial cervical loop in incisors, shortening of the ameloblast progenitor region, and impairment in differentiation and proliferation of ameloblast-lineage cells. Interestingly, however, juvenile mice at 5 days after birth did not show marked change in these phenotypes. These results suggest that attenuated Bcl11b activity impairs ameloblast progenitors and incisor maintenance. The number of BrdU label-retaining cells, putative stem cells, was lower in Bcl11b(S826G/KO) incisors, which suggests the incisor hypoplasia may be in part a result of the decreased number of stem cells. Interestingly, the level of Shh and FGF3 expressions, which are assumed to play key roles in the development and maintenance of ameloblasts and odontoblasts, was not decreased, though the expressed areas were more restricted in ameloblast progenitor and mesenchyme regions of Bcl11b(S826G/KO) incisors, respectively. Those data suggest that the incisor maintenance by Bcl11b is not directly related to the FGF epithelial-mesenchymal signaling loop including Shh but is intrinsic to ameloblast progenitors and possibly stem cells. (C) 2013 Elsevier Ireland Ltd. All rights reserved.

    DOI: 10.1016/j.mod.2013.05.002

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  • Lymphoid enhancer-binding factor 1 expression precedes dentin sialophosphoprotein expression during rat odontoblast differentiation and regeneration. 査読 国際誌

    Mitsushiro Nakatomi, Hiroko Ida-Yonemochi, Hayato Ohshima

    Journal of endodontics   39 ( 5 )   612 - 8   2013年5月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:ELSEVIER SCIENCE INC  

    INTRODUCTION: The molecular mechanisms behind odontoblast differentiation remain obscure. Lymphoid enhancer-binding factor 1 (Lef1) is a transcription factor that mediates Wnt signaling and has been suggested to regulate dentin sialophosphoprotein (Dspp) expression in vitro. This study aimed to clarify their precise relationship in the process of odontoblast differentiation in vivo. METHODS: The detailed spatiotemporal expression patterns of Lef1 and Dspp together with other known and putative odontoblast differentiation markers such as P21 and heat-shock protein 25 (Hsp25) were examined by in situ hybridization and immunohistochemistry on paraffin sections of rat incisors and developing molars at postnatal days 1-100. To observe odontoblast regeneration following tooth injury, a cavity was prepared on the upper first molar of 10-week-old rats and the expressions of Lef1 and Dspp were investigated. RESULTS: Following undifferentiated state expressing none of these examined markers, preodontoblasts begun to express P21, Lef1 and Hsp25 according to their progress of differentiation, although Dspp was undetectable. Immature odontoblasts commenced transcribing Dspp simultaneously with dentin calcification. Lef1, Dspp and Hsp25 were co-expressed in mature odontoblasts. In contrast to continuously growing incisors, Lef1, Dspp and P21 were down-regulated in the resting odontoblasts in molars when primary dentin formation was completed. Remarkably, Lef1 expression also preceded Dspp expression in newly differentiated odontoblast-like cells during the pulpal healing process after tooth injury. CONCLUSIONS: Lef1 expression precedes Dspp expression without exception in both primary and reparative dentinogeneses. Our results suggest that Lef1 might play a key role in odontoblast differentiation through regulating Dspp expression.

    DOI: 10.1016/j.joen.2012.12.016

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  • Use of a triple antibiotic solution affects the healing process of intentionally delayed replanted teeth in mice 査読

    Angela Quispe-Salcedo, Hiroko Ida-Yonemochi, Ohshima Hayato

    Journal of Oral Biosciences   55 ( 2 )   91 - 100   2013年

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:Japanese Association for Oral Biology  

    Objective: A mixture of ciprofloxacin, metronidazole, and minocycline (3Mix) has been reported to be effective against oral bacteria from carious and endodontic lesions in vitro and in vivo. The objective of this study was to establish an animal model using mice for the application of 3Mix following intentionally delayed tooth replantation and to investigate the effects of 3Mix on the healing process of dental pulp and periodontal tissues. Methods: Upper first molars of ICR mice were extracted, immersed in 3Mix solution at different concentrations for 5-60 min with or without the use of a transfer solution (phosphate buffer solution (PBS)), in addition to transfer solution alone, and subsequently repositioned in the sockets. Immunohis-tochemistry for nestin and Ki-67, histochemistry for TRAP, and TUNEL assay were performed to assess pulpal healing during days 7-21. Results: Increased apoptosis was observed in the PBS group at week 1, followed by cell proliferation at week 2, and tertiary dentin and/or bone-like tissue formation at week 3. In contrast, nestin-positive, newly differentiated, odontoblast-like cells began to align along the pulp-dentin border following the appearance of Ki-67- and TUNEL-positive cells during weeks 1-2 in the 3Mix groups, suggesting that pulpal healing was accelerated. Severe root ankylosis was observed exclusively in the 3Mix groups. Rinsing with PBS before replantation partially rescued the viability of the periodontal ligament, but pulpal healing was delayed. Conclusions: The application of 3Mix promotes pulpal regeneration of intentionally delayed replanted teeth
    however, its use may induce severe damage to periodontal tissues. © 2013 Japanese Association for Oral Biology.

    DOI: 10.1016/j.job.2013.03.001

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  • Loss of keratin 13 in oral carcinoma in situ: a comparative study of protein and gene expression levels using paraffin sections. 査読 国際誌

    Hiroko Ida-Yonemochi, Satoshi Maruyama, Takanori Kobayashi, Manabu Yamazaki, Jun Cheng, Takashi Saku

    Modern pathology : an official journal of the United States and Canadian Academy of Pathology, Inc   25 ( 6 )   784 - 94   2012年6月

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    担当区分:筆頭著者   記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:NATURE PUBLISHING GROUP  

    Immunohistochemical loss of keratin (K)13 is one of the most valuable diagnostic criteria for discriminating carcinoma in situ (CIS) from non-malignancies in the oral mucosa while K13 is stably immunolocalized in the prickle cells of normal oral epithelium. To elucidate the molecular mechanism for the loss of K13, we compared the immunohistochemical profiles for K13 and K16 which is not expressed in normal epithelia, but instead enhanced in CIS, with their mRNA levels by in-situ hybridization in formalin-fixed paraffin sections prepared from 23 CIS cases of the tongue, which were surgically removed. Reverse transcriptase-PCR was also performed using RNA samples extracted from laser-microdissected epithelial fragments of the serial paraffin sections in seven of the cases. Although more enhanced expression levels for K16 were confirmed at both the protein and gene levels in CIS in these seven cases, the loss of K13 was associated with repressed mRNA levels in four cases, but not in the other three cases. The results suggest that the loss of K13 is partly due to its gene repression, but may also be due to some unknown post-translational events.

    DOI: 10.1038/modpathol.2011.218

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  • Expression patterns of nestin and dentin sialoprotein during dentinogenesis in mice. 査読

    Angela Quispe-Salcedo, Hiroko Ida-Yonemochi, Mitsushiro Nakatomi, Hayato Ohshima

    Biomedical research (Tokyo, Japan)   33 ( 2 )   119 - 32   2012年4月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:BIOMEDICAL RESEARCH PRESS LTD  

    Differentiated odontoblasts could not be identified by one unique phenotypic marker, but the combination of expression of dentin phosphoprotein (Dpp), dentin sialoprotein (Dsp), dentin matrix protein 1 (Dmp1), and nestin may be valuable for the assessment of these cells. However, the findings using these proteins remain controversial. This study aimed to compare two odontoblast differentiation markers: nestin and Dsp in the process of dentinogenesis in mice. We performed immunohistochemistry and/or in situ hybridization technique for nestin and Dsp using 3-week-old incisors as well as postnatal 1-day- to 8-week-old molars. Preodontoblasts began to express nestin and Dsp proteins and Dsp mRNA, which increased in their intensity according to the progress of odontoblast differentiation in both incisors and developing molars. Nestin was consistently expressed in the differentiated odontoblasts even after the completion of dentin matrix deposition. The expression of Dsp mRNA coincided with the odontoblast secretory activity for dentin matrix deposition. In contrast, other pulpal cells, predentin matrix and dentinal tubules also showed a positive reaction for Dsp protein in addition to differentiated odontoblasts. In conclusion, nestin is valuable as a differentiation marker for odontoblasts, whereas Dsp mRNA is a functional marker for their secretory activity.

    DOI: 10.2220/biomedres.33.119

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  • The relationship between cell proliferation and differentiation and mapping of putative dental pulp stem/progenitor cells during mouse molar development by chasing BrdU-labeling. 査読 国際誌

    Yuko Ishikawa, Hiroko Ida-Yonemochi, Kuniko Nakakura-Ohshima, Hayato Ohshima

    Cell and tissue research   348 ( 1 )   95 - 107   2012年4月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:SPRINGER  

    Human dental pulp contains adult stem cells. Our recent study demonstrated the localization of putative dental pulp stem/progenitor cells in the rat developing molar by chasing 5-bromo-2'-deoxyuridine (BrdU)-labeling. However, there are no available data on the localization of putative dental pulp stem/progenitor cells in the mouse molar. This study focuses on the mapping of putative dental pulp stem/progenitor cells in addition to the relationship between cell proliferation and differentiation in the developing molar using BrdU-labeling. Numerous proliferating cells appeared in the tooth germ and the most active cell proliferation in the mesenchymal cells occurred in the prenatal stages, especially on embryonic Day 15 (E15). Cell proliferation in the pulp tissue dramatically decreased in number by postnatal Day 3 (P3) when nestin-positive odontoblasts were arranged in the cusped areas and disappeared after postnatal Week 1 (P1W). Root dental papilla included numerous proliferating cells during P5 to P2W. Three to four intraperitoneal injections of BrdU were given to pregnant ICR mice and revealed slow-cycling long-term label-retaining cells (LRCs) in the mature tissues of postnatal animals. Numerous dense LRCs postnatally decreased in number and reached a plateau after P1W when they mainly resided in the center of the dental pulp, associating with blood vessels. Furthermore, numerous dense LRCs co-expressed mesenchymal stem cell markers such as STRO-1 and CD146. Thus, dense LRCs in mature pulp tissues were believed to be dental pulp stem/progenitor cells harboring in the perivascular niche surrounding the endothelium.

    DOI: 10.1007/s00441-012-1347-2

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  • Glucose uptake mediated by glucose transporter 1 is essential for early tooth morphogenesis and size determination of murine molars. 査読 国際誌

    Hiroko Ida-Yonemochi, Mitsushiro Nakatomi, Hidemitsu Harada, Hiroki Takata, Otto Baba, Hayato Ohshima

    Developmental biology   363 ( 1 )   52 - 61   2012年3月

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    担当区分:筆頭著者   記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:ACADEMIC PRESS INC ELSEVIER SCIENCE  

    Glucose is an essential source of energy for body metabolism and is transported into cells by glucose transporters (GLUTs). Well-characterized class I GLUT is subdivided into GLUTs1-4, which are selectively expressed depending on tissue glucose requirements. However, there is no available data on the role of GLUTs during tooth development. This study aims to clarify the functional significance of class I GLUT during murine tooth development using immunohistochemistry and an in vitro organ culture experiment with an inhibitor of GLUTs1/2, phloretin, and Glut1 and Glut2 short interfering RNA (siRNA). An intense GLUT1-immunoreaction was localized in the enamel organ of bud-stage molar tooth germs, where the active cell proliferation occurred. By the bell stage, the expression of GLUT1 in the dental epithelium was dramatically decreased in intensity, and subsequently began to appear in the stratum intermedium at the late bell stage. On the other hand, GLUT2-immunoreactivity was weakly observed in the whole tooth germs throughout all stages. The inhibition of GLUTs1/2 by phloretin in the bud-stage tooth germs induced the disturbance of primary enamel knot formation, resulting in the developmental arrest of the explants and the squamous metaplasia of dental epithelial cells. Furthermore, the inhibition of GLUTs1/2 in cap-to-bell-stage tooth germs reduced tooth size in a dose dependent manner. These findings suggest that the expression of GLUT1 and GLUT2 in the dental epithelial and mesenchymal cells seems to be precisely and spatiotemporally controlled, and the glucose uptake mediated by GLUT1 plays a crucial role in the early tooth morphogenesis and tooth size determination.

    DOI: 10.1016/j.ydbio.2011.12.020

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  • CT anatomy of the anterior superior alveolar nerve canal: A macroscopic and microscopic study 査読

    Ray Tanaka, Takafumi Hayashi, Hayato Ohshima, Hiroko Ida-Yonemochi, Shin-Ichi Kenmotsu, Makiko Ike

    Oral Radiology   27 ( 2 )   93 - 97   2011年12月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)  

    Objectives: The aims of this study were to confirm the course of the anterior superior alveolar nerve (ASAN) canal in maxillary bone on CT images and to clarify the components of its contents to provide new evidence for neurovascularization of the anterior jaw bones. Methods: The heads and two jaw bone specimens (maxillae) of three formalin-perfused cadavers were examined. The ASAN canal course was verified on cone-beam computed tomography (CBCT) images of the heads. Subsequently, the canal structures branching from the inferior orbital canal were dissected macroanatomically and compared with the CBCT images. Microanatomically, the ASAN canal was visualized in two bone specimens from the infraorbital region using micro-computed tomography (micro-CT). To verify the micro-CT findings, each specimen was sectioned for comparison with the histological observations. Results: The gross anatomy revealed close correspondence between the course of the ASAN canal on CBCT images and that of the neurovascular bundle dissected from the canal structures branching from the inferior orbital canal. Microscopically, it was verified on micro-CT images that the ASAN canal contained neurovascular bundles including nerve bundles, arteries, and veins. Conclusions: We confirmed that the canal-like structure in the anterior maxillary bone on CT images is the ASAN canal. It should be noted that the ASAN canal is filled with neurovascular structures. The present findings may provide useful information for clinicians assessing potential risks prior to anterior jaw bone surgical procedures. © 2011 Japanese Society for Oral and Maxillofacial Radiology and Springer.

    DOI: 10.1007/s11282-011-0067-8

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  • Responses of BrdU label-retaining dental pulp cells to allogenic tooth transplantation into mouse maxilla. 査読 国際誌

    Noriko Mutoh, Mitsushiro Nakatomi, Hiroko Ida-Yonemochi, Eizo Nakagawa, Nobuyuki Tani-Ishii, Hayato Ohshima

    Histochemistry and cell biology   136 ( 6 )   649 - 61   2011年12月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:SPRINGER  

    Recently, we demonstrated that a pulse of BrdU given to prenatal animals reveals the existence of slow-cycling long-term label-retaining cells (LRCs), putative adult stem or progenitor cells, which reside in the dental pulp. This study aims to clarify responses of LRCs to allogenic tooth transplantation into mouse maxilla using prenatal BrdU-labeling, in situ hybridization for osteopontin and periostin, and immunohistochemistry for BrdU, nestin, and osteopontin. The upper-right first molars were allografted in the original socket between BrdU-labeled and non-labeled mice or between GFP transgenic and wild-type mice. Tooth transplantation caused degeneration of the odontoblast layer, resulting in the disappearance of nestin-positive reactions in the dental pulp. On postoperative days 5-7, tertiary dentin formation commenced next to the preexisting dentin where nestin-positive odontoblast-like cells were arranged in the successful cases. In BrdU-labeled transplanted teeth, dense LRCs were maintained in the center of the dental pulp beneath the odontoblast-like cells including LRCs, whereas LRCs disappeared in the area surrounding the bone-like tissue. In contrast, LRCs were not recognized in the pulp chamber of non-labeled transplants through the experimental period. Tooth transplantation using GFP mice demonstrated that the donor cells constituted the dental pulp of the transplant except for endothelial cells and some migrated cells, and the periodontal tissue was replaced by host-derived cells except for epithelial cell rests of Malassez. These results suggest that the maintenance of BrdU label-retaining dental pulp cells play a role in the regeneration of odontoblast-like cells in the process of pulpal healing following tooth transplantation.

    DOI: 10.1007/s00418-011-0868-1

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  • Morphogenetic roles of perlecan in the tooth enamel organ: an analysis of overexpression using transgenic mice. 査読 国際誌

    Hiroko Ida-Yonemochi, Ichiro Satokata, Hayato Ohshima, Toshiya Sato, Minesuke Yokoyama, Yoshihiko Yamada, Takashi Saku

    Matrix biology : journal of the International Society for Matrix Biology   30 ( 7-8 )   379 - 88   2011年9月

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    担当区分:筆頭著者   記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:ELSEVIER SCIENCE BV  

    Perlecan, a heparan sulfate proteoglycan, is enriched in the intercellular space of the enamel organ. To understand the role of perlecan in tooth morphogenesis, we used a keratin 5 promoter to generate transgenic (Tg) mice that over-express perlecan in epithelial cells, and examined their tooth germs at tissue and cellular levels. Immunohistochemistry showed that perlecan was more strongly expressed in the enamel organ cells of Tg mice than in wild-type mice. Histopathology showed wider intercellular spaces in the stellate reticulum of the Tg molars and loss of cellular polarity in the enamel organ, especially in its cervical region. Hertwig's epithelial root sheath (HERS) cells in Tg mice were irregularly aligned due to excessive deposits of perlecan along the inner, as well as on the outer sides of the HERS. Tg molars had dull-ended crowns and outward-curved tooth roots and their enamel was poorly crystallized, resulting in pronounced attrition of molar cusp areas. In Tg mice, expression of integrin β1 mRNA was remarkably higher at E18, while expression of bFGF, TGF-β1, DSPP and Shh was more elevated at P1. The overexpression of perlecan in the enamel organ resulted in irregular morphology of teeth, suggesting that the expression of perlecan regulates growth factor signaling in a stage-dependent manner during each step of the interaction between ameloblast-lineage cells and mesenchymal cells.

    DOI: 10.1016/j.matbio.2011.08.001

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  • Differential expression of perlecan receptors, α-dystroglycan and integrin β1, before and after invasion of oral squamous cell carcinoma. 査読 国際誌

    Ahsan MS, Yamazaki M, Maruyama S, Kobayashi T, Ida-Yonemochi H, Hasegawa M, Henry Ademola A, Cheng J, Saku T

    Journal of oral pathology & medicine : official publication of the International Association of Oral Pathologists and the American Academy of Oral Pathology   40 ( 7 )   552 - 9   2011年8月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)  

    DOI: 10.1111/j.1600-0714.2010.00990.x

    Web of Science

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  • Nuclear translocation of β-catenin synchronized with loss of E-cadherin in oral epithelial dysplasia with a characteristic two-phase appearance. 査読 国際誌

    Alvarado CG, Maruyama S, Cheng J, Ida-Yonemochi H, Kobayashi T, Yamazaki M, Takagi R, Saku T

    Histopathology   59 ( 2 )   283 - 91   2011年8月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)  

    DOI: 10.1111/j.1365-2559.2011.03929.x

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  • Differentiation capacity of BrdU label-retaining dental pulp cells during pulpal healing following allogenic transplantation in mice. 査読

    Kotaro Saito, Yuko Ishikawa, Kuniko Nakakura-Ohshima, Hiroko Ida-Yonemochi, Mitsushiro Nakatomi, Shin-Ichi Kenmotsu, Hayato Ohshima

    Biomedical research (Tokyo, Japan)   32 ( 4 )   247 - 57   2011年8月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:BIOMEDICAL RESEARCH PRESS LTD  

    Our recent study has demonstrated the localization of putative dental pulp stem cells in the developing molar by chasing 5-bromo-2'-deoxyuridine (BrdU)-labeling. However, their differentiation capacity subsequent to the tooth transplantation remains to be elucidated. This study aims to clarify the differentiation capacity of BrdU label-retaining dental pulp cells and their relationship to cell proliferation and apoptosis during pulpal healing following allogenic transplantation in mice. Following extraction of the mouse molar in BrdU-labeled animals, the roots and pulp floor were resected and immediately allo-grafted into the sublingual region in non-labeled animals, and vice versa. In the labeled transplants, label-retaining cells (LRCs) were increased in number and committed in nestin-positive newly differentiated odontoblast-like cells, whereas they were not committed in osteoblast-like cells. In the labeled host, on the contrary, LRCs were committed in neither odontoblast- nor osteoblast-like cells, although they were transiently increased in number and finally disappeared in the pulp tissue of the transplants. Interestingly, numerous apoptotic cells appeared in the pulp tissue including LRCs during the experimental period. These results suggest that transplanted LRCs maintain their proliferative and differentiation capacity in spite of extensive apoptosis occurring in the transplant, whereas transiently increased host-derived LRCs finally disappear in the pulp chamber following apoptosis.

    DOI: 10.2220/biomedres.32.247

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  • The expression of GM-CSF and osteopontin in immunocompetent cells precedes the odontoblast differentiation following allogenic tooth transplantation in mice. 査読 国際誌

    Kotaro Saito, Mitsushiro Nakatomi, Hiroko Ida-Yonemochi, Shin-ichi Kenmotsu, Hayato Ohshima

    The journal of histochemistry and cytochemistry : official journal of the Histochemistry Society   59 ( 5 )   518 - 29   2011年5月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:SAGE PUBLICATIONS LTD  

    Dental pulp elaborates both bone and dentin under pathological conditions such as tooth replantation/transplantation. This study aims to clarify the expression of granulocyte macrophage colony-stimulating factor (GM-CSF) and osteopontin (OPN) in the process of reparative dentin formation by allogenic tooth transplantation using in situ hybridization for OPN and immunohistochemistry for GM-CSF and OPN at both levels of light and electron microscopes. Following the extraction of the mouse molar, the roots and pulp floor were resected and immediately allografted into the sublingual region. On days 1 to 3, immunocompetent cells such as macrophages and dendritic cells expressed both GM-CSF and OPN, and some of them were arranged along the pulp-dentin border and extended their cellular processes into the dentinal tubules. On days 5 to 7, tubular dentin formation commenced next to the preexisting dentin at the pulp horn where nestin-positive odontoblast-like cells were arranged. Until day 14, bone-like tissue formation occurred in the pulp chamber, where OPN-positive osteoblasts surrounded the bone matrix. These results suggest that the secretion of GM-CSF and OPN by immunocompetent cells such as macrophages and dendritic cells plays a role in the maturation of dendritic cells and the differentiation of odontoblasts, respectively, in the regenerated pulp tissue following tooth transplantation.

    DOI: 10.1369/0022155411403314

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  • O40-responses of BrdU-label-retaining dental pulp cells to allogenic tooth transplantation into mouse maxilla. 査読 国際誌

    N Mutoh, M Nakatomi, H Ida-Yonemochi, E Nakagawa, N Tani-Ishii, H Ohshima

    Bulletin du Groupement international pour la recherche scientifique en stomatologie & odontologie   49 ( 3 )   93 - 93   2011年4月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)  

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  • O39-establishment of in vitro culture system for evaluation of the dentin-pulp complex regeneration with special reference to differentiation capacity of the BrdU-label-retaining dental pulp cells. 査読 国際誌

    H Onshima, E Nakagawa, H Ida-Yonemochi

    Bulletin du Groupement international pour la recherche scientifique en stomatologie & odontologie   49 ( 3 )   92 - 92   2011年4月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)  

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  • O36-the expression of GM-CSF and osteopontin in immunocompetent cells precedes the odontoblast differentiation following allogenic tooth transplantation in mice. 査読 国際誌

    K Saito, M Nakatomi, H Ida-Yonemochi, S Kenmotsu, H Ohshima

    Bulletin du Groupement international pour la recherche scientifique en stomatologie & odontologie   49 ( 3 )   91 - 91   2011年4月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)  

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  • O5-differential expression and functional significance of glucose transporters during murine tooth development. 査読 国際誌

    Hiroko Ida-Yonemochi, Mitsushiro Nakatomi, Hidemitsu Harada, Hayato Ohshima

    Bulletin du Groupement international pour la recherche scientifique en stomatologie & odontologie   49 ( 3 )   86 - 86   2011年4月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)  

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  • Differential expression profiles between α-dystroglycan and integrin β1 in ameloblastoma: two possible perlecan signalling pathways for cellular growth and differentiation. 査読 国際誌

    Ida-Yonemochi H, Ahsan MS, Saku T

    Histopathology   58 ( 2 )   234 - 45   2011年1月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)  

    DOI: 10.1111/j.1365-2559.2010.03732.x

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  • Heparanase, heparan sulfate and perlecan distribution along with the vascular penetration during stellate reticulum retraction in the mouse enamel organ. 査読 国際誌

    Hiroko Ida-Yonemochi, Motowo Nakajima, Takashi Saku

    Archives of oral biology   55 ( 10 )   778 - 87   2010年10月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:PERGAMON-ELSEVIER SCIENCE LTD  

    OBJECTIVE: Immunohistochemical and gene expression profiles of heparanase were determined in murine molar tooth germs from their embryonic to postnatal stages, paying special attention to neovascularization within the enamel organ, which is poorly vascularized before birth. DESIGN: Protein and gene expression profiles of heparanase, heparan sulfate (HS), vascular endothelial growth factor (VEGF), transforming growth factor-beta1 (TGF-beta1), and perlecan were comparatively examined by immunohistochemistry and in-situ hybridization, respectively, in mouse mandibular molar tooth germs from embryonic day 11.5 to postnatal day 6. At the same time, their mRNA expression levels were also confirmed by reverse transcriptase-polymerase chain reaction using laser-captured microdissection of enamel organ tissues. RESULTS: Stellate reticulum cells highly expressed perlecan but only slightly expressed heparanase and HS in their embryonic days. On and after postnatal day 1, the expressions of heparanase became dramatically higher in the stellate reticulum, while HS disappeared leaving the immunopositivity for perlecan core protein. Immunohistochemically, HS was enhanced around blood vessels which were newly formed after birth within the enamel organs, whose volume was also regressive. Similar expression patterns were obtained for VEGF and TGF-beta1. CONCLUSIONS: Such synchronized expression modes among the HS metabolism-related molecules suggested that heparanase plays an important role in degradation of HS chains, which is closely related to vascular penetration into the stellate reticulum, which may be one of the driving forces for the postnatal regression of the enamel organ.

    DOI: 10.1016/j.archoralbio.2010.07.002

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  • Mapping of BrdU label-retaining dental pulp cells in growing teeth and their regenerative capacity after injuries. 査読 国際誌

    Yuko Ishikawa, Hiroko Ida-Yonemochi, Hironobu Suzuki, Kuniko Nakakura-Ohshima, Han-Sung Jung, Masaki J Honda, Yumiko Ishii, Nobukazu Watanabe, Hayato Ohshima

    Histochemistry and cell biology   134 ( 3 )   227 - 41   2010年9月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:SPRINGER  

    Recent studies have demonstrated that human dental pulp contains adult stem cells. A pulse of the thymidine analog BrdU given to young animals at the optimal time could clarify where slow-cycling long-term label-retaining cells (LRCs), putative adult stem cells, reside in the pulp tissue. This study focuses on the mapping of LRCs in growing teeth and their regenerative capacity after tooth injuries. Two to seven peritoneal injections of BrdU into pregnant Wistar rats revealed slow-cycling long-term dense LRCs in the mature tissues of born animals. Numerous dense LRCs were postnatally decreased in number and reached a plateau at 4 weeks after birth when they mainly resided in the center of the dental pulp, associating with blood vessels. Mature dental pulp cells were stained with Hoechst 33342 and sorted into (<0.76%) side population cells using FACS, which included dense LRCs. Some dense LRCs co-expressed mesenchymal stem cell markers such as STRO-1 or CD146. Tooth injuries caused degeneration of the odontoblast layer, and newly differentiated odontoblast-like cells contained LRCs. Thus, dense LRCs in mature pulp tissues were supposed to be dental pulp stem cells possessing regenerative capacity for forming newly differentiated odontoblast-like cells. The present study proposes the new hypothesis that both granular and dense LRCs are equipped in the dental pulp and that the dense LRCs with proliferative capacity play crucial roles in the pulpal healing process following exogenous stimuli in cooperation with the granular LRCs.

    DOI: 10.1007/s00418-010-0727-5

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  • Histopathological varieties of oral carcinoma in situ: Diagnosis aided by immunohistochemistry dealing with the second basal cell layer as the proliferating center of oral mucosal epithelia. 査読 国際誌

    Takanori Kobayashi, Satoshi Maruyama, Jun Cheng, Hiroko Ida-Yonemochi, Minoru Yagi, Ritsuo Takagi, Takashi Saku

    Pathology international   60 ( 3 )   156 - 66   2010年3月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:WILEY-BLACKWELL PUBLISHING, INC  

    To make reproducible diagnoses for oral carcinoma in situ (CIS), combined immunohistochemistry directed at the positioning of squamous cell proliferation (Ki-67) and differentiation (keratin (K) 13 and K19) was used, both of which support histological evaluations by providing biological evidence. Normal/hyperplastic epithelia was defined by K19+ cells only in the first basal layer, K13+ cells in the third basal and upper layers, and sporadic Ki-67+ cells in the second basal layer. These profiles indicated that a proliferating center of the oral epithelium is located in the parabasal cell layer, and K19 and K13 can be regarded as markers for basal and prickle cells, respectively. Epithelial dysplasia was characterized by irregular stratification of Ki-67+ cells and the absence of K19/K13 in proliferating cells. Irregular emerging of K19+ and K13+ cells in proliferating foci with unique stratification of atypical Ki-67+ cells indicated CIS. When the definition was applied, surgical margins in 172 recurrent cases were shown to contain CIS (39.4%) and squamous cell carcinoma (55.8%), indicating that the new diagnostic criteria for CIS reflected clinical behaviors of the cases. The results indicate that oral CIS contain more histological variations, especially those with definite keratinization, than what had been previously defined.

    DOI: 10.1111/j.1440-1827.2009.02499.x

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  • Oral solitary fibrous tumor: a cytogenetic analysis of tumor cells in culture with literature review. 査読 国際誌

    Wael M Swelam, Jun Cheng, Hiroko Ida-Yonemochi, Satoshi Maruyama, Takashi Saku

    Cancer genetics and cytogenetics   194 ( 2 )   75 - 81   2009年10月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:ELSEVIER SCIENCE INC  

    Solitary fibrous tumor (SFT) is an uncommon spindle-cell neoplasm of mesenchymal origin. Because the pathogenetic background of SFT is still controversial, cytogenetic analysis could help in tumor diagnosis and prognosis. In this study, cultured SFT cells from a lower lip lesion that presented characteristic immunopositivity for CD34, vimentin, CD99, and BCL2 showed a unique cytogenetic finding: 46,XX,inv(2)(p21q35),t(3;12)(q25;q15). To our knowledge, this is the third report of cytogenetic result of a case involving the oral cavity. The SFT cells in culture that maintained their immunohistochemical expression of diagnostic molecules, showed unique chromosomal changes previously unreported when compared with already documented ones. Our data suggest that the complicated pathogenetic nature of SFT is possibly tumor- or organ-related.

    DOI: 10.1016/j.cancergencyto.2009.05.003

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  • Matrix metalloproteinase 7 and perlecan in oral epithelial dysplasia and carcinoma in situ: an aid for histopathologic recognition of their cell proliferation centers. 査読 国際誌

    W M Tilakaratne, T Kobayashi, H Ida-Yonemochi, W Swelam, M Yamazaki, T Mikami, C G Alvarado, A Md Shahidul, S Maruyama, J Cheng, T Saku

    Journal of oral pathology & medicine : official publication of the International Association of Oral Pathologists and the American Academy of Oral Pathology   38 ( 4 )   348 - 55   2009年4月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:WILEY-BLACKWELL PUBLISHING, INC  

    BACKGROUND: As one of the valuable tools for differential diagnoses of oral epithelial dysplasia, carcinoma in situ (CIS) and squamous cell carcinoma (SCC), we have proposed the immunohistochemistry for perlecan, a heparan sulfate proteoglycan (HSPG). As HSPGs have been shown to be extracellular docking molecules for matrix metalloproteinase (MMP) 7, our aim was to determine the expression mode of MMP-7 in these lesions for its possible diagnostic aid for oral borderline malignancies. METHODS: Twenty cases each of moderate dysplasia, CIS, SCC, and normal/hyperplastic/mild dysplastic epithelia of the tongue and buccal mucosa were immunohistochemically examined for MMP-1, -2 and -7 in reference to their perlecan immunolocalization. RESULTS: The expression of all three MMPs in the normal mucosal epithelium was restricted mainly to the parabasal layers. The most striking finding was strong expression of MMP-7 in epithelial dysplasia with a two-phase appearance: a clear demarcation of MMP-7-immunopositive (+) lower dysplastic/basaloid cells from non-positive upper keratinized cells. MMP-7+ cells were spread over the whole epithelial layer of CIS. In SCC, MMP-7 positivity was reduced from carcinoma cells but instead appeared in stromal cells. These expression profiles of MMP-7 resembled those of perlecan. MMP-1 and MMP-2 exhibited a similar but much weaker staining than MMP-7. CONCLUSION: These results suggest that the enhanced metabolism of perlecan associated with MMP-7 plays an important role in the cell proliferation of oral epithelia in their malignant transformation process, and that MMP-7 immunohistochemistry may be a valuable aid for identification of the cell proliferation center in oral CIS and dysplasia.

    DOI: 10.1111/j.1600-0714.2009.00750.x

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  • Perlecan-rich epithelial linings as a background of proliferative potentials of keratocystic odontogenic tumor. 査読 国際誌

    Masayuki Tsuneki, Jun Cheng, Satoshi Maruyama, Hiroko Ida-Yonemochi, Motowo Nakajima, Takashi Saku

    Journal of oral pathology & medicine : official publication of the International Association of Oral Pathologists and the American Academy of Oral Pathology   37 ( 5 )   287 - 93   2008年5月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:BLACKWELL PUBLISHING  

    BACKGROUND: The intraepithelial deposit of perlecan, a basement membrane-type heparan sulfate (HS) proteoglycan, has been demonstrated in neoplastic conditions such as salivary gland tumors, odontogenic tumors, and oral carcinoma in situ. Our aim was to determine whether perlecan turnover was enhanced in the lining cells of keratocystic odontogenic tumor (KCOT), which had been recently renamed from odontogenic keratocyst because of its accumulated evidence of neoplasm, as a possible background for neoplastic proliferation. METHODS: Ten surgical specimens from each of KCOT, dentigerous cyst, and radicular cyst were examined for the expressions of perlecan core protein, HS chains, heparanase, and Ki-67 by immunohistochemistry and in situ hybridization. RESULTS: In KCOT, perlecan core protein and HS chains were localized on the cell border from the parabasal to subkeratinized layers of the lining epithelium. Heparanase was localized in a similar fashion to those for perlecan and HS chains but was within the cytoplasm. mRNA signals for perlecan core protein and heparanase were mostly compatible with their protein signals. Ki-67-positive cells were localized mainly in the second basal cell layers with definitely higher labeling indices (approximately 31.3%, second layer). In contrast to KCOT, dentigerous cysts and radicular cysts had no perlecan, HS chains, and heparanase deposition in their linings with extremely lower Ki-67 indices (0.4-0.8%). CONCLUSION: The result suggests that the characteristic intra-lining-epithelial deposit of perlecan in KCOT, which has never been seen in other cystic jaw lesions, is a new evidence supporting the neoplastic nature of KCOT.

    DOI: 10.1111/j.1600-0714.2007.00620.x

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  • Laminin alpha 5 is required for dental epithelium growth and polarity and the development of tooth bud and shape 査読

    S Fukumoto, JH Miner, H Ida, E Fukumoto, K Yuasa, H Miyazaki, MP Hoffman, Y Yamada

    JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY   281 ( 8 )   5008 - 5016   2006年2月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:AMER SOC BIOCHEMISTRY MOLECULAR BIOLOGY INC  

    In tooth development, the oral ectoderm and mesenchyme coordinately and reciprocally interact through the basement membrane for their growth and differentiation to form the proper shape and size of the tooth. Laminin alpha 5 subunit-containing laminin-10/11 ( LM-511/521) is the major laminin in the tooth germ basement membrane. Here, we have examined the role of laminin alpha 5 ( Lama5) in tooth development using laminin alpha 5-null mouse primary dental epithelium and tooth germ organ cultures. Lama5-null mice develop a small tooth germ with defective cusp formation and have reduced proliferation of dental epithelium. Also, cell polarity and formation of the monolayer of the inner dental epithelium are disturbed. The enamel knot, a signaling center for tooth germ development, is defective, and there is a significant reduction of Shh and Fgf4 expression in the dental epithelium. In the absence of laminin alpha 5, the basement membrane in the inner dental epithelium becomes discontinuous. In normal mice, integrin alpha 6 beta 4, a receptor for laminin alpha 5, is strongly localized at the basal layer of the epithelium, whereas in mutant mice, integrin alpha 6 beta 4 is expressed around the cell surface. In primary dental epithelium culture, laminin-10/11 promotes cell growth, spreading, and filopodia-like micro-spike formation. This promotion is inhibited by anti-integrin alpha 6 and beta 4 antibodies and by phosphatidylinositol 3-kinase inhibitors and dominant negative Rho-GTPase family proteins Cdc42 and Rac. In organ culture, anti-integrin alpha 6 antibody and wortmannin reduce tooth germ size and shape. Our studies demonstrate that laminin alpha 5 is required for the proliferation and polarity of basal epithelial cells and suggest that the interaction between laminin-10/11-integrin alpha 6 beta 4 and the phosphatidylinositol 3-kinase-Cdc42/Rac pathways play an important role in determining the size and shape of tooth germ.

    DOI: 10.1074/jbc.M509295200

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  • Perlecan, a Heparan Sulfate Proteoglycan, Is a Major Constituent of the Intraepithelial Stroma Functioning in Tooth Morphogenesis 査読

    Hiroko Ida-Yonemochi, Takashi Saku

    Journal of Oral Biosciences   48 ( 4 )   233 - 243   2006年

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)  

    Perlecan, a heparan sulfate proteoglycan, is one of the major basement membrane macromolecules and plays an important role in cellular growth, differentiation, adhesion, and motility by its interaction with growth factors and cytokines. Recently, perlecan has been localized within the epithelial space in various pathophysiological conditions. As the intraepithelial accumulation of perlecan results in widening of the intercellular space, the most characteristic example of such phenomena is the stellate reticulum of the enamel organ of tooth germs, whose structure and function have been largely unknown. Stellate reticulum-like structures are also found in pathological conditions such as ameloblastoma or oral epithelial dysplasia. The biosynthesis of perlecan has been demonstrated in those epithelial cells, and such peculiar stellate reticulum appearances are shown to be due to intercellular deposits of overexpressed perlecan. However, when perlecan is transgened into mouse epithelial tissue using the keratin 5 promoter, the tooth cannot be formed normally. Thus, a constant overexpression of perlecan interferes with normal development. The time schedule of the intraepithelial expression of perlecan seems to be controlled critically in the process of odontogenesis. In this review article, we address the current views on the structure and function of perlecan acting in the intraepithelial stromal space, with special attention to its role in tooth morphogenesis. © 2006, Japanese Association for Oral Biology. All rights reserved.

    DOI: 10.2330/joralbiosci.48.233

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  • Extracellular matrix remodeling in oral submucous fibrosis: its stage-specific modes revealed by immunohistochemistry and in situ hybridization. 査読 国際誌

    Hiroko Utsunomiya, Wanninayake M Tilakaratne, Kazufumi Oshiro, Satoshi Maruyama, Makoto Suzuki, Hiroko Ida-Yonemochi, Jun Cheng, Takashi Saku

    Journal of oral pathology & medicine : official publication of the International Association of Oral Pathologists and the American Academy of Oral Pathology   34 ( 8 )   498 - 507   2005年9月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:BLACKWELL PUBLISHING  

    BACKGROUND: Oral submucous fibrosis (OSF) is a chewing habit-related pre-cancerous condition of the oral mucosa affecting predominantly south Asians. It is histopathologically characterized by epithelial atrophy and fibrosis of the subepithelial connective tissue. Fibrosis extends all the way into the muscle layer, leading to difficulty in mouth opening. However, the dynamics of extracellular matrix (ECM) remodeling with OSF progression is largely unknown. METHODS: Forty biopsy specimens of OSF and 10 of normal buccal mucosa were examined for expression/deposition modes of eight ECM molecules by histochemistry, immunohistochemistry, and in situ hybridization. RESULTS: In the early stage of OSF, tenascin, perlecan, fibronectin, collagen type III were characteristically enhanced in the lamina propria and the submucosal layer. In the intermediate stage, the ECM molecules mentioned above and elastin were extensively and irregularly deposited around muscle fibers. In the advanced stage, such ECM depositions decreased and were entirely replaced with collagen type I only. Their gene expression levels varied with progression of fibrosis, but the mRNA signals were confirmed in fibroblasts in the submucosal fibrotic areas. CONCLUSIONS: The results indicate that the ECM remodeling steps in OSF are similar to each phase of usual granulation tissue formation. Restricted mouth opening may be a result of loss of variety of ECM molecules including elastin into the homogeneity of collagen type I replacing muscle fibers.

    DOI: 10.1111/j.1600-0714.2005.00339.x

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  • Vascular endothelial growth factor in salivary pleomorphic adenomas: one of the reasons for their poorly vascularized stroma. 査読 国際誌

    Wael Swelam, Hiroko Ida-Yonemochi, Satoshi Maruyama, Kazufumi Ohshiro, Jun Cheng, Takashi Saku

    Virchows Archiv : an international journal of pathology   446 ( 6 )   653 - 62   2005年6月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:SPRINGER  

    To better understand the poorly vascularized background of the stroma of pleomorphic adenomas, we attempted to determine the expression of molecules related to blood vessels and hypoxic conditions in pleomorphic adenoma. Surgical specimens and tumor cells in primary culture of salivary pleomorphic adenomas were used for immunohistochemistry for CD31, vascular endothelial growth factor (VEGF) and its receptors Flk-1 and Flt-1, as well as for hypoxia markers, such as hypoxia-inducible factor-1alpha (HIF-1alpha) and lactate dehydrogenase-1 (LDH). At the same time, alternative splicing modes of the VEGF gene and expression levels of the HIF-1alpha gene were analyzed in surgical specimens by means of reverse-transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) and direct sequencing of the PCR products. In addition to co-immunolocalization with CD31+ vascular endothelial cells, VEGF and its receptors were demonstrated in normal duct epithelial and myoepithelial cells as well as in tumor cells in ductal structures and in myxochondroid stromata. Immunolocalizations for HIF-1alpha and LDH were confirmed in the VEGF-positive area. Immunofluorescence signals for VEGF and others were confirmed in pleomorphic adenoma cells in culture. RT-PCR results showed that there were at least four splicing modes of the VEGF gene, among which VEGF(121) was most enhanced, and higher HIF-1alpha levels in pleomorphic adenomas. The results suggest that pleomorphic adenoma cells produce VEGF in several functional forms for their own proliferation or differentiation, and that the VEGF expression is controlled by hypoxic circumstances of poorly vascularized pleomorphic adenomas.

    DOI: 10.1007/s00428-005-1219-1

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  • Perlecan, a basement membrane-type heparan sulfate proteoglycan, in the enamel organ: its intraepithelial localization in the stellate reticulum. 査読 国際誌

    Hiroko Ida-Yonemochi, Kazufumi Ohshiro, Wael Swelam, Hamdy Metwaly, Takashi Saku

    The journal of histochemistry and cytochemistry : official journal of the Histochemistry Society   53 ( 6 )   763 - 72   2005年6月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:HISTOCHEMICAL SOC INC  

    The localization and biosynthesis of perlecan, a basement membrane-type heparan sulfate proteoglycan, were studied in developing tooth germs by using murine molars in neonatal and postnatal stages and primary cultured cells of the enamel organ and dental papilla to demonstrate the role of perlecan in normal odontogenesis. Perlecan was immunolocalized mainly in the intercellular spaces of the enamel organ as well as in the dental papilla/pulp or in the dental follicle. By in situ hybridization, mRNA signals for perlecan core protein were intensely demonstrated in the cytoplasm of stellate reticulum cells and in dental papilla/pulp cells, including odontoblasts and fibroblastic cells in the dental follicle. Furthermore, the in vitro biosyntheses of perlecan core protein by the enamel organ and dental papilla/pulp cells were confirmed by immunofluorescence, immunoprecipitation, and reverse transcriptase-polymerase chain reaction. The results indicate that perlecan is synthesized by the dental epithelial cells and is accumulated in their intercellular spaces to form the characteristic stellate reticulum, whose function is still unknown.

    DOI: 10.1369/jhc.4A6479.2005

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  • GD3 synthase gene found expressed in dental epithelium and shown to regulate cell proliferation. 査読 国際誌

    Aya Yamada, Emiko Fukumoto, Yoko Kamasaki, Hiroko Ida-Yonemochi, Takashi Saku, Taku Fujiwara, Satoshi Fukumoto

    Archives of oral biology   50 ( 4 )   393 - 9   2005年4月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:PERGAMON-ELSEVIER SCIENCE LTD  

    GD3 synthase is one of the key enzymes involved with ganglioside synthesis, and its activity regulates the main profile of ganglioside expression. We analyzed the expression of the GD3 synthase gene in laser-dissected teeth germs using RT-PCR. The GD3 synthase gene was found expressed in brain, thymus, and tooth germ tissues, however, not in liver or skin specimens. Further, it was highly expressed during the early stage of tooth germ development (embryonic day 14.5), especially in dental epithelia, which gradually reduced in the molar site until postnatal day 7, whereas it was not in dental mesenchyme tissues. In addition, dental epithelial cells transiently transfected with the GD3 synthase gene showed enhanced proliferation. These results indicate that the GD3 synthase gene may be involved in early tooth development, particularly in the proliferation of dental epithelium.

    DOI: 10.1016/j.archoralbio.2004.09.014

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  • Two-phase appearance of oral epithelial dysplasia resulting from focal proliferation of parabasal cells and apoptosis of prickle cells. 査読 国際誌

    Mei Syafriadi, Jun Cheng, Kai Yu Jen, Hiroko Ida-Yonemochi, Makoto Suzuki, Takashi Saku

    Journal of oral pathology & medicine : official publication of the International Association of Oral Pathologists and the American Academy of Oral Pathology   34 ( 3 )   140 - 9   2005年3月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:BLACKWELL MUNKSGAARD  

    BACKGROUND: One of the histologic characteristics of epithelial dysplasias of the oral mucosa is droplet-shaped rete processes resulting from a solid proliferation of basaloid cells. These basaloid cells are suddenly changed into an overlay of parakeratotic cells. However, it is unknown how this characteristic two-phase appearance is generated. METHODS: Formalin-fixed paraffin sections of the oral mucosal specimens with normal, hyperplastic, dysplastic epithelia and squamous cell carcinomas were examined for apoptosis by terminal deoxynucleotidyl transferase (TdT)-mediated dUTP nick-end labeling (TUNEL) method and for lymphoid cells by immunohistochemistry. RESULTS: Apoptotic cells were only located in the keratinized layer of normal/hyperplastic epithelia. However, in epithelial dysplasias, apoptotic cells were scattered in the middle or even in the lower parts of the epithelial layer with frequent vacuolation changes of epithelial cells. Within the epithelial layer of dysplasias, there were increased number of lymphocytes, which were immunopositive for CD45RO, CD8, and CD57- and CD68-immunopositive (+), S-100 protein-positive and major histocompatibility complex (MHC) class II-positive monocytic lineages. They increased in number with the severity of dysplastic degrees, and they were often located in the vicinity of apoptotic epithelial cells, but decreased in carcinomas in situ and invasive carcinomas, which contained fewer numbers of apoptotic figures. CONCLUSION: The findings indicate that intraepithelial infiltrations of both cytotoxic T cells and natural killer cells are closely related to the apoptotic phenomena of prickle cells, which may result in the characteristic 'two-phase appearance' of epithelial dysplasia.

    DOI: 10.1111/j.1600-0714.2004.00283.x

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  • Angiolipoma of the buccal mucosa: a possible role of mast cell-derived VEGF in its enhanced vascularity. 査読 国際誌

    Hiroko Ida-Yonemochi, Wael Swelam, Chikara Saito, Takashi Saku

    Journal of oral pathology & medicine : official publication of the International Association of Oral Pathologists and the American Academy of Oral Pathology   34 ( 1 )   59 - 61   2005年1月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:BLACKWELL MUNKSGAARD  

    A case of angiolipoma occurring in the buccal mucosa of a 69-year-old male is described. The patient had noticed a painless mass in his buccal mucosa for 2 years. The surgically removed tumor, measuring 9 mm in diameter, was mainly located in the submucosal layer with focal expansion into the muscle layer. Histologically, the tumor was well-demarcated and composed of proliferations of mature fat cells and fibrous connective tissue containing many small blood vessels, which were evenly distributed. There was diffuse infiltration of a large number of mast cells, which were immunopositive for vascular endothelial growth factor (VEGF) especially around blood vessels, suggesting that VEGF produced by mast cells in angiolipomas plays an important role in the vascular proliferation in this particular tumor.

    DOI: 10.1111/j.1600-0714.2004.00230.x

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  • Angiogenesis in mucous retention cyst: a human in vivo-like model of endothelial cell differentiation in mucous substrate. 査読 国際誌

    Wael Swelam, Hiroko Ida-Yonemochi, Takashi Saku

    Journal of oral pathology & medicine : official publication of the International Association of Oral Pathologists and the American Academy of Oral Pathology   34 ( 1 )   30 - 8   2005年1月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:BLACKWELL MUNKSGAARD  

    BACKGROUND: Mucous retention cysts contain a mucous pool in the lumina, in which pure angiogenic processes are occasionally observed. By using this unique human material, our aim was to understand the in vivo angiogenic process. METHODS: Fifteen surgical tissue samples of mucous retention cysts of the lip were examined for expression of vascular endothelial markers and extracellular matrix molecules by immunohistochemistry and in situ hybridization (ISH). RESULTS: Endothelial cells forming new vascular channels showed immunopositivities for CD31, CD34, vascular endothelial growth factor (VEGF), and von Willebrand factor (vWF). These newly formed capillaries were surrounded by tenascin-positive matrices and further by a dense infiltration of CD68-positive cells with foamy to epitheloid appearances. Some of these cells were simultaneously positive for CD34, VEGF, and one of its receptors, Flk-1, and they showed definite mRNA as well as protein signals for tenascin. In addition, these cells often tended to be aligned, which suggested tubule formation. CONCLUSION: The results suggest that monocyte/macrophage lineage cells are a major source for endothelial cells at least in mucous retention cysts and that tenascin produced by those cells plays an important role in differentiation of endothelial cells.

    DOI: 10.1111/j.1600-0714.2004.00282.x

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  • Recruitment of osteoclasts in the mandible of osteopetrotic (op/op) mice. 査読 国際誌

    Hiroko Ida-Yonemochi, Osamu Ishibashi, Hideaki Sakai, Takashi Saku

    European journal of oral sciences   112 ( 2 )   148 - 55   2004年4月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:BLACKWELL MUNKSGAARD  

    Osteoclasts in osteopetrotic (op/op) mice are substantially reduced by the absence of functional activities of macrophage colony-stimulating factor (M-CSF). However, it is known that osteoclasts appear in op/op skeletal bones with aging, although the molecular mechanism for this is unknown. In order to investigate osteoclastic recruitment in the jaw bones of op/op mice, osteoclastic distribution was analysed for 2 yr after birth by histochemistry for tartrate-resistant acid phosphatase activity and immunohistochemistry for cathepsin K. Osteoclasts in op/op mandibular bones decreased rapidly in number after birth and disappeared by 3 d, although there was no difference in the osteoclastic distribution between op/op and normal littermates at birth. At 2 wk, osteoclasts began to reappear around op/op tooth germs, where no apparent connective tissue layer intervened between tooth germs and bone trabeculae. They increased in number and were scattered over the mandible, reaching a maximum at 8 wk, when periodontal ligament-like structures were recognizable around incisor germs. Osteoclasts then again decreased gradually, and after 62 wk few osteoclasts were seen in op/op mandibular bones, whose marrow space disappeared. These findings suggest that osteoclasts are recruited in an M-CSF-independent manner in op/op mandibles, especially in areas around tooth germs.

    DOI: 10.1111/j.0909-8836.2004.00109.x

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  • Intraepithelial expression of perlecan, a basement membrane-type heparan sulfate proteoglycan reflects dysplastic changes of the oral mucosal epithelium. 査読 国際誌

    Terué Ikarashi, Hiroko Ida-Yonemochi, Kazufumi Ohshiro, Jun Cheng, Takashi Saku

    Journal of oral pathology & medicine : official publication of the International Association of Oral Pathologists and the American Academy of Oral Pathology   33 ( 2 )   87 - 95   2004年2月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:BLACKWELL MUNKSGAARD  

    BACKGROUND: Intercellular deposition of perlecan, a major heparan sulfate proteoglycan (HSPG) of the basement membrane, is known to result in characteristic stellate reticulum-like structures in ameloblastomas or tooth germs. Although enlargement of the intercellular space is one of the histological characteristics of epithelial dysplasia of oral mucosa, the mode of expression of perlecan is poorly understood in these epithelial lesions. METHODS: Eighty-two biopsy specimens consisting of normal and hyperplastic epithelium, epithelial dysplasia, and squamous cell carcinomas were examined for both perlecan core protein and heparan sulfate (HS) chains by immunohistochemistry and in situ hybridization. RESULTS: In normal and hyperplastic epithelium, perlecan core protein and HS chains were localized in the cell border of parabasal cells and lower prickle cells, and HS chains were also found in basal cells. With an increase in the severity of epithelial dysplasia, the core protein was heavily and extensively deposited in the interepithelial space as well as in the cytoplasm of epithelial cells from the basal to the surface layers. Its gene expression was confirmed in the cells around the protein deposits. On the other hand, HS chains were enhanced in mild dysplasia, but decreased in moderate and severe dysplasias. In squamous cell carcinomas, either the core protein or HS chains were found scarcely in tumor cells but abundantly in the stromal space. CONCLUSIONS: The findings indicate that perlecan is localized in the intercellular space of the oral epithelia, and that it is over-expressed in dysplastic epithelial cells and is deposited in their interepithelial space, which results in the histology of reduction of cellular cohesion.

    DOI: 10.1111/j.1600-0714.2004.00026.x

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  • Solitary fibrous tumor of the lower lip involving minor salivary gland components: Report of a case and review of the literature of salivary gland cases

    Wael Swelam, Hiroko Ida-Yonemochi, Satoshi Maruyama, Terué Ikarashi, Junichi Fukuda, Ritsuo Takagi, Takafumi Hayashi, Takashi Saku

    Oral Oncology Extra   40 ( 10 )   107 - 112   2004年

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    記述言語:英語   出版者・発行元:Elsevier BV  

    A case of solitary fibrous tumor of the Lip is described. A 65-year-old Japanese woman had a painless mass in her lower lip that gradually increased in size and finally ulcerated. Computed tomography revealed a well-demarcated submucosal mass. On the cut surface, the tumor was well-circumscribed, solid, and yellowish-white with small cystic spaces. Histopathologically, it was encapsulated and consisted of an interlacing proliferation of spindle-shaped cells immunopositive for CD34, vimentin, Bcl-2, and CD99, with scattered salivary glandular structures with irregular cellular arrangements. This is the first case report of solitary fibrous tumor of the lip with reactive hyperplasia of minor salivary gland components based on our review of the literature. © 2004 Elsevier Ltd. All rights reserved.

    DOI: 10.1016/j.ooe.2004.06.002

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  • Varieties of pericoronal hamartoma: the concept of the disease entity revisited. 査読 国際誌

    Hiroko Ida-Yonemochi, Takashi Saku

    Journal of oral pathology & medicine : official publication of the International Association of Oral Pathologists and the American Academy of Oral Pathology   32 ( 10 )   618 - 9   2003年11月

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    記述言語:英語   出版者・発行元:BLACKWELL MUNKSGAARD  

    DOI: 10.1034/j.1600-0714.2003.t01-1-00162.x

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  • Identification of potential biomarkers of lymph node metastasis in oral squamous cell carcinoma by cDNA microarray analysis 査読

    M Nagata, H Fujita, H Ida, H Hoshina, T Inoue, Y Seki, M Ohnishi, T Ohyama, S Shingaki, M Kaji, T Saku, R Takagi

    INTERNATIONAL JOURNAL OF CANCER   106 ( 5 )   683 - 689   2003年9月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:WILEY-LISS  

    We surveyed the expression of 557 cancer-related genes in 15 cases of well-differentiated OSCC by cDNA microarray analysis. To identify potential biomarkers for lymph node metastasis, all microarray data were compared by the Mann-Whitney test and the significance analysis of microarrays between OSCCs with and those without lymph node metastasis. The tissues of OSCCs with lymph node metastasis exhibited increased expression levels of MMP-1, MMP-3, uPA, integrin-alpha3, paxillin, tenascin C and IL-6 transcripts. All of these genes were included in common clusters on the Cluster/TreeView analysis, implying that functional gene, groups of proteolytic enzymes and integrin-related molecules are involved in cervical lymph node metastasis. The results of RTQ-PCR for differentially expressed genes were in accord with those of cDNA microarray analyses, suggesting that the data obtained by microarray gene expression analyses were valid. Consistent with cooperative expression patterns, immunohistochemical analyses demonstrated that products of MMP-1, MMP-3 and uPA were colocalized to components of the neoplastic stroma, particularly mononuclear inflammatory cells with well-developed eosinophilic cytoplasm. Our results suggest that expression levels of molecules involved in tissue remodeling and cell-ECM adhesion, especially MMP-1 and integrin-alpha3, can provide an accurate biomarker system for predicting the risk of cervical lymph node metastasis in OSCC. (C) 2003 Wiley-Liss, Inc.

    DOI: 10.1002/ijc.11283

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  • Vascular endothelial cell participation in formation of lymphoepithelial lesions (epi-myoepithelial islands) in lymphoepithelial sialadenitis (benign lymphoepithelial lesion). 査読 国際誌

    Hamdy Metwaly, Jun Cheng, Hiroko Ida-Yonemochi, Kazufumi Ohshiro, Kai Yu Jen, Ai Ru Liu, Takashi Saku

    Virchows Archiv : an international journal of pathology   443 ( 1 )   17 - 27   2003年7月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:SPRINGER-VERLAG  

    Lymphoepithelial lesions (LELs, or epi-myoepithelial islands) in lymphoepithelial sialadenitis (LESA, or benign lymphoepithelial lesion) of the salivary gland are known to be mainly composed of duct epithelial cells. However, other constituent cells are poorly characterized. Formalin-fixed paraffin sections obtained from six surgical specimens of LESA were examined using immunohistochemistry for cytoskeletal proteins, inflammatory cells, vascular endothelial cells, and extracellular matrix (ECM) molecules as well as by in situ hybridization for ECM molecules. In addition to keratin-immunopositive (+) duct-like epithelial cells, there were CD31/CD34+ vascular endothelial cells-which were either scattered in a singular fashion, in formed sheets, or in tubular structures-, CD20+ B lymphocytes, CD45RO+ T lymphocytes, and CD68 macrophages in the LELs. ECM molecules, such as heparan sulfate proteoglycan and tenascin, were immunolocalized in hyaline materials in the LELs. Their mRNAs were demonstrated mainly in endothelial cells and, to a lesser extent, in lympho-monocytic cells around hyaline materials, but were not as evident in epithelial constituent cells of LELs. The results indicate that endothelial cells as well as inflammatory cells are important constituents of the LELs, and the hyaline ECM cores mainly result from the intra-LEL angiogenesis by endothelial cells with the assistance of inflammatory cells. This intra-LEL vasculature seems to support regeneration and proliferation of salivary epithelial remnant cells.

    DOI: 10.1007/s00428-003-0824-0

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  • Congenital defect of maxillary primary central incisor associated with exposed pulp and gingival [fibrosis]: case report. 査読 国際誌

    Tomiko Sano, Mieko Tomizawa, Hiroko Ida-Yonemochi, Yoshihiro Tanabe, Tadashi Noda

    The Journal of clinical pediatric dentistry   28 ( 1 )   39 - 42   2003年

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)  

    This report describes a rare case of hypoplastic primary incisor in which the pulp was exposed at the crown portion and covered by the gingiva in a 1-year-11-month-old boy. The patient was referred to us due to swelling of his labial cervical gingiva of the maxillary right primary central incisor, and on examination, extended to the hypoplastic labial surface. Radiographically, there was a round radiolucent area on the crown including the edge. Surgical removal of the swollen gingiva revealed a large defect of the labial aspect of the incisor, showing pulpal tissue inside. The tooth was treated by vital pulpotomy. Histopathologically, the removed gingival tissue contained many pieces of dysplastic tooth elements in the lamina propria portion which should have been connected to the exposed pulp. The findings suggested that pulp exposure resulted from focal dental hypoplasia not from resorption of the tooth.

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  • Precancerous foci in pleomorphic adenoma of the salivary gland: recognition of focal carcinoma and atypical tumor cells by P53 immunohistochemistry 査読

    S Ohtake, J Cheng, H Ida, M Suzuki, K Ohshiro, WG Zhang, T Saku

    JOURNAL OF ORAL PATHOLOGY & MEDICINE   31 ( 10 )   590 - 597   2002年11月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:BLACKWELL MUNKSGAARD  

    Background: It is still controversial if atypical tumor cells scattered in salivary pleomorphic adenomas are precancerous and how carcinoma arises in pleomorphic adenomas.
    Methods: We studied clinicopathologically the frequency and variation of cellular atypia among tumor cells and examined the expression status of p53 gene products as well as proliferating cell nuclear antigen (PCNA) in 101 surgical materials of pleomorphic adenomas.
    Results: Histopathologically, atypical tumor cells were found in 51% of the cases examined. Their mode of distribution was classified into three groups: focal (six cases, 6%) which could be identified as focal carcinoma, measuring less than 1 mm in diameter; sporadic (15 cases, 15%) and singular (30 cases, 30%). These atypical cells were located mainly within sheet-like nests of tumor cells but not in chondroid or fibro-hyaline foci. Immunohistochemically, most of the atypical cells were positive for p53 gene products and PCNA.
    Conclusion: The results indicated that atypical cells with p53 protein accumulation in their nuclei could be regarded as cells in a precancerous state not yet forming an apparent carcinomatous nest. Some cell population with these atypical cells are likely to form focal carcinomas and then to an apparent form of carcinoma in pleomorphic adenoma.

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  • The basement membrane-type heparan sulfate proteoglycan (perlecan) in ameloblastomas: its intercellular localization in stellate reticulum-like foci and biosynthesis by tumor cells in culture. 査読 国際誌

    Hiroko Ida-Yonemochi, Terué Ikarashi, Masaki Nagata, Hideyuki Hoshina, Ritsuo Takagi, Takashi Saku

    Virchows Archiv : an international journal of pathology   441 ( 2 )   165 - 73   2002年8月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:SPRINGER-VERLAG  

    The localization and biosynthesis of basement membrane-type heparan sulfate proteoglycan (HSPG), known as perlecan, were studied in ameloblastomas using surgical tissue sections and cells in primary culture to demonstrate the existence of extracellular matrix (ECM) molecules in the intercellular space of epithelial tissue. HSPG was immunolocalized in the intercellular spaces of stellate reticulum-like cells and small vacuolar structures between basal cells in tumor cell nests as well as in myxofibrous stroma. By means of in-situ hybridization, mRNA signals for the HSPG core were intensely demonstrated in the cytoplasm of basal and parabasal cells of parenchyma. Furthermore, the in-vitro biosynthesis of HSPG core protein by ameloblastoma cells was confirmed using immunofluorescence, immunoprecipitation, and reverse-transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR). The results indicated that ameloblastoma cells synthesize HSPG and deposit it in their intercellular space. The intercellular HSPG might act as a carrier for transport of nutrients to tumor cells within ameloblastomatous foci.

    DOI: 10.1007/s00428-001-0556-y

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  • Disturbed tooth eruption in osteopetrotic (op/op) mice: histopathogenesis of tooth malformation and odontomas. 査読 国際誌

    Hiroko Ida-Yonemochi, Tadashi Noda, Hitoyata Shimokawa, Takashi Saku

    Journal of oral pathology & medicine : official publication of the International Association of Oral Pathologists and the American Academy of Oral Pathology   31 ( 6 )   361 - 73   2002年7月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:BLACKWELL MUNKSGAARD  

    BACKGROUND: Odontoma-like structures are formed in the jaw bone of osteopetrotic (op/op) mice, which have a congenital deficiency in osteoclastic differentiation due to the absence of functional macrophage colony-stimulating factor (M-CSF). METHODS: To clarify the histopathogenesis of tooth malformation and odontoma-like structures, a 2-year postnatal process of development of the op/op mandibular incisor was examined radiologically and histologically. At the same time, extracellular matrix (ECM) remodeling around tooth germs was analyzed immunohistochemically. RESULTS: Abnormal forms of op/op tooth germ were noticeable even at 3 days after birth on a radiogram. Histologically, op/op mice were clearly distinguished by the disappearance of dental follicular space at 3 days. With aging, bone trabeculae, which were not remodeled, penetrated into op/op tooth germs and divided them into several daughter germs, which were recognized as odontomas. In mandibular incisor bodies, the immature ECM components, such as heparan sulfate proteoglycan and tenascin, were preserved diffusely in the dental papilla/pulp, which indicates that maturation of the stroma does not take place in op/op mandibular incisors. CONCLUSION: The observation suggests that the disturbed morphogenesis of op/op tooth germs is functionally explained by the disordered immunolocalization of ECM molecules, and that the dental follicular space is essential for normal tooth development because it prevents bone penetration into the tooth germs.

    DOI: 10.1034/j.1600-0714.2002.00087.x

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  • No developmental failure of cultured tooth germs from osteopetrotic (op/op) mice. 査読 国際誌

    Hiroko Ida-Yonemochi, Takashi Saku

    Journal of oral pathology & medicine : official publication of the International Association of Oral Pathologists and the American Academy of Oral Pathology   31 ( 6 )   374 - 8   2002年7月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:BLACKWELL MUNKSGAARD  

    BACKGROUND: Incisor tooth germs of osteopetrotic (op/op) mice are known to fail to erupt, but form odontomas in their root apices instead, due to invasion of alveolar bone trabeculae into the tooth germs. The purpose of this study is to determine if the tooth developmental failures in op/op mice are intrinsic or secondarily arise as a result of the defective bone metabolism due to lack of macrophage colony-stimulating factor (M-CSF). METHODS: We isolated mandibular first molar tooth germs from normal and op/op mice and cultured them under conditions with or without bone tissues which had been formed around tooth germs. RESULTS: Tooth germs from normal mice, cultured for a week, showed almost the same developmental features as those of mice with the corresponding age. They were surrounded with dental follicular tissues and were never invaded by bone trabeculae. On the other hand, op/op tooth germs cultured in the presence of bone components were invaded by alveolar bone trabeculae around tooth germs in the same manner as shown in vivo. When cultured without bone, they developed without any interruptions. CONCLUSIONS: These findings indicated that op/op tooth germs had potential for normal development and that their abnormal development was a secondary phenomenon caused by lack of bone remodeling in the early phase of odontogenesis.

    DOI: 10.1034/j.1600-0714.2002.00138.x

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  • Enhanced expression of basement-membrane-type heparan sulfate proteoglycan in tumor fibro-myxoid stroma of intrahepatic cholangiocarcinoma

    H Sabit, K Tsuneyama, T Shimonishi, K Harada, J Cheng, H Ida, T Saku, K Saito, Y Nakanuma

    PATHOLOGY INTERNATIONAL   51 ( 4 )   248 - 256   2001年4月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:BLACKWELL SCIENCE ASIA  

    To investigate the molecular mechanism for enhanced fibrous stroma formation in intrahepatic cholangiocarcinoma (ICC), we surveyed the expression pattern of basement-membrane-type heparan sulfate proteoglycan (HSPG; also known as perlecan) at the core protein and the mRNA level in ICC as well as in other liver neoplasms and reactive hepatic diseases. Immunohistochemistry of paraffin-embedded liver sections with hyaluronidase pretreatment showed that HSPG was present in small amounts in normal liver around the bile ducts and the blood vessels within the portal area. There was no evident expression within the hepatic lobules, Intense immunoexpression of HSPG was seen in the tumor-specific fibro-myxoid stroma of ICC and metastatic liver cancer originating from the colon. However, tumor-specific stroma of hepatocellular carcinomas showed little or no expression of HSPG, At the mRNA level, signals for HSPG were found in tumor cells of cholangiocarcinoma and metastatic colonic carcinomas, and in myofibroblasts in the tumor fibro-myxoid-specific stroma, From immunoprecipitation and reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR) analyses, a cultured human intrahepatic cholangiocarcinoma cell line (CCKS1), was found to express high levels of HSPG core protein and mRNA, These findings suggest that biliary and metastatic colon carcinoma cells as well as stromal myofibroblasts have a potential for HSPG production. In order to investigate the growth, invasion and metastatic ability of ICC, further study of the 'self-made' stromal component of ICC may provide a new approach.

    DOI: 10.1046/j.1440-1827.2001.01201.x

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    CiNii Article

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  • Perlecan (heparan sulfate proteoglycan) gene expression reflected in the characteristic histological architecture of salivary adenoid cystic carcinoma

    S Kimura, J Cheng, H Ida, N Hao, Y Fujimori, T Saku

    VIRCHOWS ARCHIV-AN INTERNATIONAL JOURNAL OF PATHOLOGY   437 ( 2 )   122 - 128   2000年8月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:SPRINGER-VERLAG  

    In order to determine the role of the basement membrane-type heparan sulfate proteoglycan (HSPG), known as perlecan, in the formation of the characteristic cribriform structures of salivary adenoid cystic carcinomas, the mode of expression of mRNA for the core protein of HSPG was investigated by using in situ hybridization (ISH) both in surgical specimens and in a cell system (ACC3) of adenoid cystic carcinomas. In the surgical specimens, the mRNA for the HSPG core was more intensely expressed in solid tumor cell nests, especially in smaller ones. Within the nests, the signals were detected almost exclusively in cuboidal cells forming small pseudocysts. In contrast, signals were absent in flat cells forming large pseudocysts or in carcinoma cell nests attaching to the peripheral nerves or blood vessels. In normal salivary gland tissues, myoepithelial cells expressed the mRNA at a high level, but acinar and duct epithelial cells did not. In the time-course experiment of ACC3 cells, signals for HSPG core increased with time and reached the maximum on day 4, decreasing thereafter in a culture condition in which cells reached confluence in a week. The results indicate that HSPG is biosynthesized by adenoid cystic carcinoma cells which are in the proliferation phase, and that tumor cells producing HSPG tend to form initial structures of stromal pseudocysts.

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  • Melanotic neuroectodermal tumor of infancy in the mandible: report of a case. 査読 国際誌

    Y Hoshina, Y Hamamoto, I Suzuki, T Nakajima, H Ida-Yonemochi, T Saku

    Oral surgery, oral medicine, oral pathology, oral radiology, and endodontics   89 ( 5 )   594 - 9   2000年5月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:MOSBY-YEAR BOOK INC  

    A case of melanotic neuroectodermal tumor of infancy occurring in the mandible is described. The patient was a 1-month-old boy with a rapidly growing tumor of the mandible. Computed tomography showed 2 well-defined osteolytic lesions in the right mandible. Histopathologic diagnosis of a biopsy specimen was melanotic neuroectodermal tumor of infancy. The tumor was excised with removal of the surrounding bone, but 1(1/2) months later it recurred, and segmental mandibulectomy and reconstruction of the defect with a titanium miniplate was performed. Retrospectively, evidence of recurrence was noted on computed tomography taken on the tenth postoperative day. The recurrence was caused by incomplete removal of the tumor. Histopathologically, the tumor cells of the recurrent lesion were dispersed extensively in the bone marrow, and bone remodeling was active. The surgical procedure may have stimulated tumor cell proliferation and reactive bone formation. The patient was followed for 2 years with no evidence of recurrence or metastasis.

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MISC

  • モルモット臼歯における上皮幹細胞ニッチを含む形成端上皮コンパートメントの三次元立体構築 査読

    清野 雄多, 依田 浩子, 大島 勇人

    新潟歯学会雑誌   49 ( 2 )   85 - 85   2019年12月

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    記述言語:日本語   出版者・発行元:新潟歯学会  

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  • 歯胚上皮及び歯髄幹細胞・象牙芽細胞維持に関わるShh-Ptch-Gliシグナル経路 査読

    石川 裕子, 依田 浩子, 斎藤 浩太郎, 中富 満城, 大島 勇人

    Journal of Oral Biosciences Supplement   2019   368 - 368   2019年10月

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    記述言語:日本語   出版者・発行元:(一社)歯科基礎医学会  

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  • 肥満型2型糖尿病モデルTSODマウスにおける口腔組織の経時的変化 査読

    依田 浩子, 大島 勇人

    Journal of Oral Biosciences Supplement   2019   169 - 169   2019年10月

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    記述言語:日本語   出版者・発行元:(一社)歯科基礎医学会  

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  • マウス歯肉接合上皮細胞の由来と動態について

    斎藤 浩太郎, 依田 浩子, 大島 邦子, 大島 勇人

    Journal of Oral Biosciences Supplement   2018   278 - 278   2018年9月

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    記述言語:日本語   出版者・発行元:(一社)歯科基礎医学会  

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  • マウス切歯・臼歯の静的幹細胞維持に関わるShhシグナルの役割

    石川 裕子, 依田 浩子, 斎藤 浩太郎, 中富 満城, 大島 勇人

    Journal of Oral Biosciences Supplement   2018   176 - 176   2018年9月

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    記述言語:日本語   出版者・発行元:(一社)歯科基礎医学会  

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  • 組織連続切片三次元構築法とBrdUラベリングを用いたモルモット臼歯apical budにおける歯胚上皮幹細胞と一過性増殖細胞分布の観察

    清野 雄多, 中富 満城, 依田 浩子, 大島 勇人

    Journal of Oral Biosciences Supplement   2018   291 - 291   2018年9月

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    記述言語:日本語   出版者・発行元:(一社)歯科基礎医学会  

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  • 他家歯胚移植におけるドナー・ホスト相互作用 歯周組織に着目して

    中木 哲朗, 大島 邦子, 石川 裕子, 斎藤 浩太郎, 依田 浩子, 大島 勇人

    新潟歯学会雑誌   47 ( 2 )   121 - 121   2017年12月

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    記述言語:日本語   出版者・発行元:新潟歯学会  

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  • 酸素濃度依存的Sox2-RhoAシグナルによるエナメル上皮幹細胞制御機構

    大津 圭史, 依田 浩子, 藤原 尚樹, 大島 勇人, 原田 英光

    生命科学系学会合同年次大会   2017年度   [4P2T16 - 0815)]   2017年12月

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    記述言語:日本語   出版者・発行元:生命科学系学会合同年次大会運営事務局  

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  • 歯の形成過程におけるAMP-activated protein kinase(AMPK)の発現と機能

    依田 浩子, 大津 圭史, 原田 英光, 大島 勇人

    Journal of Oral Biosciences Supplement   2017   432 - 432   2017年9月

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    記述言語:日本語   出版者・発行元:(一社)歯科基礎医学会  

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  • 組織連続切片三次元構築法とBrdUラベリングによるモルモット臼歯apical budの観察 査読

    清野 雄多, 中富 満城, 依田 浩子, 大島 勇人

    Journal of Oral Biosciences Supplement   2017   222 - 222   2017年9月

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    記述言語:日本語   出版者・発行元:(一社)歯科基礎医学会  

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  • コンドロイチン硫酸は頭蓋顔面形態形成を制御している

    依田 浩子, 森田 航, 柴田 俊一, 大島 勇人, 武内 恒成

    Journal of Oral Biosciences Supplement   2016   466 - 466   2016年9月

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    記述言語:日本語   出版者・発行元:(一社)歯科基礎医学会  

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  • 象牙芽細胞におけるNestin遺伝子の発現制御機構

    中富 満城, Quispe-Salcedo Angela, 依田 浩子, 大島 勇人, 岡野 栄之

    Journal of Oral Biosciences Supplement   2016   471 - 471   2016年9月

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    記述言語:日本語   出版者・発行元:(一社)歯科基礎医学会  

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  • エナメル質の高度石灰化の謎 成熟期エナメル芽細胞の理解への挑戦 成熟期エナメル芽細胞でのV-ATPaseの機能と高度石灰化との関連

    原田 英光, 依田 浩子, 佐原 資謹, 大島 勇人, 藤原 尚樹, 大津 圭史, 松元 奈緒美, 中西 真弓[松井]

    Journal of Oral Biosciences Supplement   2016   80 - 80   2016年9月

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    記述言語:日本語   出版者・発行元:(一社)歯科基礎医学会  

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  • 歯髄幹細胞においてホメオボックス型転写因子MSX1はコレステロール合成関連遺伝子の発現を制御する

    五藤 紀子, 藤本 勝巳, 藤井 紗貴子, 依田 浩子, 持, 大島 勇人, 河本 健, 能城 光秀, 宿南 知佐, 香西 克之, 加藤 幸夫

    日本生化学会大会・日本分子生物学会年会合同大会講演要旨集   88回・38回   [2P1015] - [2P1015]   2015年12月

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    記述言語:日本語   出版者・発行元:(公社)日本生化学会  

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  • Aktシグナルがグルコース代謝を促進しエナメル芽細胞分化を誘導する

    依田 浩子[米持], 大津 圭史, 大島 勇人, 原田 英光

    日本生化学会大会・日本分子生物学会年会合同大会講演要旨集   88回・38回   [1P0940] - [1P0940]   2015年12月

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    記述言語:日本語   出版者・発行元:(公社)日本生化学会  

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  • 実験的歯の移動におけるラット臼歯歯髄内prostaglandin I2合成酵素と受容体の発現解析

    大倉 麻里子, 大倉 直人, 吉羽 永子, 吉羽 邦彦, 依田 浩子, 大島 勇人, 齋藤 功, 興地 隆史

    新潟歯学会雑誌   45 ( 2 )   97 - 98   2015年12月

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    記述言語:日本語   出版者・発行元:新潟歯学会  

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  • ラット臼歯歯髄断髄後のProstaglandin Transporterに対する免疫組織学的局在解析

    大倉 直人, 枝並 直樹, 吉羽 永子, 吉羽 邦彦, 依田 浩子, 大島 勇人, 興地 隆史

    Journal of Oral Biosciences Supplement   2015   367 - 367   2015年9月

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    記述言語:日本語   出版者・発行元:(一社)歯科基礎医学会  

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  • Dentin Sialophosphoprotein(DSPP)を形態と機能から考える 象牙芽細胞分化過程におけるDsppの機能的意義

    斎藤 浩太郎, 中富 満城, 依田 浩子, 大島 勇人

    Journal of Oral Biosciences Supplement   2015   128 - 128   2015年9月

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    記述言語:日本語   出版者・発行元:(一社)歯科基礎医学会  

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  • エナメル芽細胞分化過程におけるナトリウム依存性グルコース輸送体の局在と機能

    依田 浩子, 大島 勇人

    Journal of Oral Biosciences Supplement   2015   179 - 179   2015年9月

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    記述言語:日本語   出版者・発行元:(一社)歯科基礎医学会  

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  • ホメオボックス型転写因子MSX1による歯髄幹細胞の象牙芽細胞/骨芽細胞分化制御

    五藤 紀子, 藤本 勝巳, 依田 浩子, 大島 勇人, 河本 健, 能城 光秀, 宿南 知佐, 香西 克之, 加藤 幸夫

    日本生化学会大会プログラム・講演要旨集   87回   [4P - 345]   2014年10月

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    記述言語:日本語   出版者・発行元:(公社)日本生化学会  

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  • ヒト歯髄におけるプロスタグランジンE2輸送担体および特異的レセプターの免疫組織化学的局在解析

    大倉 直人, 大倉 麻里子, 吉羽 永子, 吉羽 邦彦, 小田 陽平, 依田 浩子, 大島 勇人, 興地 隆史

    Journal of Oral Biosciences Supplement   2014   183 - 183   2014年9月

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    記述言語:日本語   出版者・発行元:(一社)歯科基礎医学会  

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  • マウスMsx2遺伝子は外エナメル上皮の角化重層扁平上皮化を抑制する

    中富 満城, 依田 浩子, 大島 勇人

    Journal of Oral Biosciences Supplement   2014   196 - 196   2014年9月

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    記述言語:日本語   出版者・発行元:(一社)歯科基礎医学会  

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  • マウス臼歯歯胚移植後の歯髄発生過程におけるホスト・ドナー相互作用について

    斎藤 浩太郎, 依田 浩子, 大島 勇人

    Journal of Oral Biosciences Supplement   2014   140 - 140   2014年9月

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    記述言語:日本語   出版者・発行元:(一社)歯科基礎医学会  

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  • マウスのエナメル芽細胞の極性維持に関するMsx2遺伝子の機能

    中富 満城, 依田 浩子, 大島 勇人

    Journal of Oral Biosciences Supplement   2013   118 - 118   2013年9月

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    記述言語:日本語   出版者・発行元:(一社)歯科基礎医学会  

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  • マウスの意図的に遅延した歯の生え替わり後の治癒過程に対する酵素的に合成したグリコーゲン(ESG)の有効性(Effectiveness of Enzymatically Synthesized Glycogen (ESG) on the healing process following intentionally-delayed tooth replantation in mice)

    Quispe-Salcedo Angela, 依田 浩子, 大島 勇人

    Journal of Oral Biosciences Supplement   2013   123 - 123   2013年9月

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    記述言語:英語   出版者・発行元:(一社)歯科基礎医学会  

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  • AKTシグナルがグリコーゲン代謝を促進しエナメル芽細胞分化を誘導する

    依田 浩子, 大島 勇人, 原田 英光

    Journal of Oral Biosciences Supplement   2013   191 - 191   2013年9月

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    記述言語:日本語   出版者・発行元:(一社)歯科基礎医学会  

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  • マウス歯胚他家移植後の歯髄構成細胞集団の生後変化

    中木 哲朗, 斎藤 浩太郎, 中川 英蔵, 依田 浩子, 大島 勇人

    新潟歯学会雑誌   42 ( 2 )   133 - 134   2012年12月

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    記述言語:日本語   出版者・発行元:新潟歯学会  

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  • 意図的に遅延した歯の再植後の歯髄の治癒過程における抗菌薬の有効性(Effectiveness of antimicrobials in the pulpal healing process following intentionally delayed tooth replantation)

    Quispe-Salcedo Angela, 依田 浩子, 大島 勇人

    Journal of Oral Biosciences Supplement   2012   85 - 85   2012年9月

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    記述言語:英語   出版者・発行元:(一社)歯科基礎医学会  

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  • マウス切歯のエナメル質形成過程におけるMsx2遺伝子の機能

    中富 満城, 依田 浩子, 大島 勇人

    Journal of Oral Biosciences Supplement   2012   122 - 122   2012年9月

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    記述言語:日本語   出版者・発行元:(一社)歯科基礎医学会  

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  • マウス唾液腺分化過程におけるグリコーゲン代謝の役割

    依田 浩子, 中川 英蔵, 大島 勇人

    Journal of Oral Biosciences Supplement   2012   89 - 89   2012年9月

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    記述言語:日本語   出版者・発行元:(一社)歯科基礎医学会  

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  • マウス歯胚他家移植実験を用いた歯髄構成細胞集団の生後変化の解明

    大島 勇人, 中木 哲朗, 斎藤 浩太郎, 中川 英蔵, 依田 浩子

    Journal of Oral Biosciences Supplement   2012   84 - 84   2012年9月

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    記述言語:日本語   出版者・発行元:(一社)歯科基礎医学会  

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  • ラット象牙芽細胞の分化過程および再生過程におけるLef1遺伝子の発現

    中富 満城, 依田 浩子, 大島 勇人

    Journal of Oral Biosciences   53 ( Suppl. )   127 - 127   2011年9月

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    記述言語:日本語   出版者・発行元:(一社)歯科基礎医学会  

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  • 酵素合成グリコーゲンはin vitroおよびin vivoで骨形成を促進する

    依田 浩子, 監物 新一, 織田 公光, 大島 勇人

    Journal of Oral Biosciences   53 ( Suppl. )   191 - 191   2011年9月

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    記述言語:日本語   出版者・発行元:(一社)歯科基礎医学会  

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  • マウス他家移植後の歯髄治癒過程における歯髄組織幹細胞の分化能および細胞増殖とアポトーシスとの関連

    斎藤 浩太郎, 依田 浩子, 中富 満城, 大島 勇人

    Journal of Oral Biosciences   53 ( Suppl. )   128 - 128   2011年9月

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    記述言語:日本語   出版者・発行元:(一社)歯科基礎医学会  

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  • 象牙質形成時と加齢時のnestinとdentin sialoprotein発現パターンの評価(Assessment of nestin and dentin sialoprotein expression patterns during dentinogenesis and aging)

    Quispe Salcedo Angela, 依田 浩子, 中富 満城, 大島 勇人

    Journal of Oral Biosciences   53 ( Suppl. )   150 - 150   2011年9月

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    記述言語:英語   出版者・発行元:(一社)歯科基礎医学会  

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  • マウス臼歯他家移植後の象牙芽細胞分化過程における免疫細胞によるGM-CSFおよびオステオポンチンの発現

    斎藤 浩太郎, 中富 満城, 依田 浩子, 大島 勇人

    新潟歯学会雑誌   41 ( 1 )   52 - 52   2011年6月

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    記述言語:日本語   出版者・発行元:新潟歯学会  

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  • Bcl11b点変異アリルとKOアリルを持つマウスに認められる切歯発育異常

    安樂 純子, 葛城 美徳, 中富 満城, 依田 浩子[米持], 西川 敦, 児玉 泰光, 大島 勇人, 木南 凌, 高木 律男

    日本口腔科学会雑誌   60 ( 1 )   124 - 124   2011年1月

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    記述言語:日本語   出版者・発行元:(NPO)日本口腔科学会  

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  • マウス臼歯他家移植後の象牙芽細胞分化過程における免疫細胞によるGM-CSFとオステオポンチンの発現

    斎藤 浩太郎, 中富 満城, 依田 浩子, 大島 勇人

    Journal of Oral Biosciences   52 ( Suppl )   121 - 121   2010年9月

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    記述言語:日本語   出版者・発行元:(一社)歯科基礎医学会  

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  • 象牙質・歯髄複合体培養法による歯髄再生モデルの確立と歯髄組織幹細胞の動態

    依田 浩子, 中富 満城, 大島 勇人

    Journal of Oral Biosciences   52 ( Suppl )   122 - 122   2010年9月

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    記述言語:日本語   出版者・発行元:(一社)歯科基礎医学会  

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  • Bcl11b点変異アリルとKOアリルを持つマウスに認められる切歯発育異常

    安樂 純子, 葛城 美徳, 中富 満城, 依田 浩子[米持], 西川 敦, 児玉 泰光, 大島 勇人, 木南 凌, 高木 律男

    新潟歯学会雑誌   40 ( 1 )   97 - 97   2010年6月

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    記述言語:日本語   出版者・発行元:新潟歯学会  

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  • マウス歯胚発育におけるグルコース輸送体の局在と機能

    依田 浩子, 中富 満城, 中川 英蔵, 大島 勇人

    解剖学雑誌   85 ( Suppl. )   175 - 175   2010年3月

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    記述言語:日本語   出版者・発行元:(一社)日本解剖学会  

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  • ラット切歯歯髄象牙芽細胞層内樹状細胞の防御機能について

    塩生 有希, 依田 浩子, 大島 勇人

    解剖学雑誌   85 ( Suppl. )   202 - 202   2010年3月

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    記述言語:日本語   出版者・発行元:(一社)日本解剖学会  

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  • ラット臼歯象牙質形成における歯髄毛細血管と基質形成・石灰化との相関について

    大島 勇人, 中富 満城, 中川 英蔵, 石川 裕子, 監物 新一, 依田 浩子

    解剖学雑誌   85 ( Suppl. )   110 - 110   2010年3月

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    記述言語:日本語   出版者・発行元:(一社)日本解剖学会  

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  • マウス臼歯発生過程における歯髄組織幹細胞の局在

    石川 裕子, 依田 浩子, 大島 邦子, 本田 雅規, 大島 勇人

    Journal of Oral Biosciences   51 ( Suppl. )   75 - 75   2009年8月

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    記述言語:日本語   出版者・発行元:(一社)歯科基礎医学会  

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  • マウス臼歯再植・移植後の歯髄治癒過程におけるGM-CSFおよびオステオポンチンの役割について

    斎藤 浩太郎, 依田 浩子, 石川 裕子, 大島 勇人

    Journal of Oral Biosciences   51 ( Suppl. )   97 - 97   2009年8月

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    記述言語:日本語   出版者・発行元:(一社)歯科基礎医学会  

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  • マウス顎骨への歯の他家移植後の歯髄・歯周組織再生過程における組織幹細胞の動態について

    武藤 徳子, 中川 英蔵, 依田 浩子, 石井 信之, 大島 勇人

    Journal of Oral Biosciences   51 ( Suppl. )   98 - 98   2009年8月

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    記述言語:日本語   出版者・発行元:(一社)歯科基礎医学会  

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  • マウス臼歯再植・移植後の歯髄治癒過程におけるGM-CSFおよびオステオポンチンの役割について

    斎藤 浩太郎, 依田 浩子, 石川 裕子, 大島 勇人

    Journal of Oral Biosciences   51 ( Suppl. )   90 - 90   2009年8月

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    記述言語:日本語   出版者・発行元:(一社)歯科基礎医学会  

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  • マウス顎骨への歯胚他家移植後の歯周組織形成過程について

    中川 英蔵, 依田 浩子, 吉江 弘正, 大島 勇人

    Journal of Oral Biosciences   51 ( Suppl. )   91 - 91   2009年8月

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    記述言語:日本語   出版者・発行元:(一社)歯科基礎医学会  

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  • マウス顎骨への歯の他家移植後の歯髄・歯周組織再生過程における組織幹細胞の動態について

    武藤 徳子, 中川 英蔵, 依田 浩子, 石井 信之, 大島 勇人

    Journal of Oral Biosciences   51 ( Suppl. )   75 - 75   2009年8月

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    記述言語:日本語   出版者・発行元:(一社)歯科基礎医学会  

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  • マウス歯胚発育過程におけるグリコーゲンおよびグルコース輸送体の局在

    依田 浩子, 中川 英蔵, 馬場 麻人, 織田 公光, 寺島 達夫, 大島 勇人

    Journal of Oral Biosciences   51 ( Suppl. )   90 - 90   2009年8月

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    記述言語:日本語   出版者・発行元:(一社)歯科基礎医学会  

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  • マウス舌下部への臼歯および歯冠部の他家移植後の歯髄組織幹細胞の動態と硬組織形成能について

    大島 勇人, 石川 裕子, 鈴木 啓展, 依田 浩子, 監物 新一, 大島 邦子

    解剖学雑誌   84 ( Suppl. )   140 - 140   2009年3月

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    記述言語:日本語   出版者・発行元:(一社)日本解剖学会  

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  • 下顎骨に生じた中心性巨細胞肉芽腫の1例

    小山 貴寛, 高木 律男, 永田 昌毅, 飯田 明彦, 児玉 泰光, 林 孝文, 依田 浩子, 朔 敬

    日本口腔外科学会雑誌   54 ( Suppl. )   96 - 96   2008年9月

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    記述言語:日本語   出版者・発行元:(公社)日本口腔外科学会  

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  • CK17と14‐3‐3σの共発現が口腔粘膜扁平上皮癌で強調される

    三上俊彦, CHENG Jun, 丸山智, 小林孝憲, 依田浩子, 新垣晋, 齊藤力, 朔敬

    日本臨床口腔病理学会総会・学術大会プログラム・抄録集   19th   69   2008年8月

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    記述言語:日本語  

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  • 口腔粘膜扁平上皮癌・上皮内癌の再発に関する臨床病理学的検討

    小林 孝憲, 依田 浩子, 丸山 智, 程 くん, 齊藤 力, 高木 律男, 朔 敬

    日本病理学会会誌   97 ( 1 )   320 - 320   2008年3月

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    記述言語:日本語   出版者・発行元:(一社)日本病理学会  

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  • 口腔粘膜上皮悪性境界病変におけるいわゆる幹細胞マーカ分子の発現様式

    小林 孝憲, 依田 浩子, 船山 昭典, 丸山 智, 程 君, 高木 律男, 朔 敬

    日本病理学会会誌   95 ( 1 )   288 - 288   2006年4月

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    記述言語:日本語   出版者・発行元:(一社)日本病理学会  

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  • 口腔粘膜悪性境界病変の病理組織学的診断根拠としての機能性分子発現様式の解析

    小林 孝憲, 依田 浩子, 丸山 智, 程 くん, 高木 律男, 朔 敬

    新潟歯学会雑誌   35 ( 2 )   247 - 247   2006年1月

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    記述言語:日本語   出版者・発行元:新潟歯学会  

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  • 歯原性角化嚢胞モデルとしてのMsx2ノックアウトマウス顎骨嚢胞

    朔 敬, 板垣 真奈美, 依田 浩子, 丸山 智, 程 君, 大島 勇人, 里方 一郎

    Journal of Oral Biosciences   47 ( Suppl. )   96 - 96   2005年9月

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    記述言語:日本語   出版者・発行元:(一社)歯科基礎医学会  

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  • 口腔粘膜扁平上皮癌の浸潤とは腫瘍間質が誘導されることと同義である

    小林 孝憲, 依田 浩子, 程 君, 高木 律男, 朔 敬

    日本病理学会会誌   94 ( 1 )   249 - 249   2005年3月

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    記述言語:日本語   出版者・発行元:(一社)日本病理学会  

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  • 歯肉接合上皮層内には細胞外基質が存在する

    板垣 真奈美, 依田 浩子, 朔 敬

    Journal of oral biosciences   46 ( 5 )   455 - 455   2004年9月

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    記述言語:日本語   出版者・発行元:歯科基礎医学会  

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  • パールカンは歯胚エナメル器の発育分化を制御している : 過剰発現系トランスジェニックマウスによる解析

    依田 浩子, 里方 一郎, 朔 敬

    Journal of oral biosciences   46 ( 5 )   452 - 452   2004年9月

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    記述言語:日本語   出版者・発行元:歯科基礎医学会  

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  • ラミニンによる咬頭形成の分子メカニズムの解明

    福本 敏, 依田 浩子, 藤原 卓

    小児歯科学雑誌   42 ( 2 )   190 - 190   2004年

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    記述言語:日本語   出版者・発行元:The Japanese Society of Pediatric Dentistry  

    DOI: 10.11411/jspd1963.42.2_190

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  • Lymphoid cells and carcinoma cells contribute to the formation of fibrous stroma in salivary gland lymphoepithelial carcinomas

    Jen KaiYu, 程 王君, 依田 浩子, 大城 和文, 朔 敬

    歯科基礎医学会雑誌   45 ( 5 )   317 - 317   2003年9月

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    記述言語:英語   出版者・発行元:歯科基礎医学会  

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  • マウス歯胚歯乳頭由来血管内皮前駆細胞

    依田 浩子, 朔 敬

    歯科基礎医学会雑誌   45 ( 5 )   296 - 296   2003年9月

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    記述言語:日本語   出版者・発行元:歯科基礎医学会  

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  • 口腔扁平上皮癌のリンパ節転移予測因子としてのMMP-1遺伝子発現定量

    永田 昌毅, 星名 秀行, 藤田 一, 関 雪絵, 長島 克弘, 小玉 直樹, 大西 真, 新垣 晋, 斎藤 力, 依田 浩子, 朔 敬, 高木 律男

    新潟歯学会雑誌   33 ( 1 )   74 - 74   2003年7月

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    記述言語:日本語   出版者・発行元:新潟歯学会  

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  • Carcinoma in-situ of the oral mucosa has a definite tendency towards keratinization

    Syafriadi M, Ida-Yonemochi H, Ikarashi T, Maruyama S, Jen KY, Cheng J, Hoshina H, Takagi R, Saku T

    Oral Med Pathol   8 ( 2 )   43 - 44   2003年

  • マウス歯胚発育過程における基底膜型ヘパラン硫酸プロテオグリカンの局在

    依田 浩子

    歯科基礎医学会雑誌   44 ( 5 )   416 - 416   2002年9月

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    記述言語:日本語   出版者・発行元:歯科基礎医学会  

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  • 粘膜下線維症の進行と細胞外基質分子の動態

    宇都宮 宏子, 依田 浩子, 大城 和文, ティラカラトゥネ ワンニンヤケ, 朔 敬

    歯科基礎医学会雑誌   44 ( 5 )   479 - 479   2002年9月

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    記述言語:日本語   出版者・発行元:歯科基礎医学会  

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  • Apoptosis is the reason for characteristic two-phase appearance of oral mucosal epithelial dysplasia

    Mei Syafriadi, 程 桾, 依田 浩子, 朔 敬

    歯科基礎医学会雑誌   44 ( 5 )   496 - 496   2002年9月

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    記述言語:英語   出版者・発行元:歯科基礎医学会  

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  • 口腔扁平上皮癌の遺伝子発現様相に基づくリンパ節転移予測因子の検討

    永田 昌毅, 藤田 一, 依田 浩子, 星名 秀行, 井上 達夫, 長島 克弘, 関 雪絵, 大西 真, 大山 登喜男, 新垣 晋, 朔 敬, 高木 律男

    新潟歯学会雑誌   32 ( 1 )   120 - 120   2002年7月

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    記述言語:日本語   出版者・発行元:新潟歯学会  

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  • 4 マイクロアレイを用いた遺伝子発現解析に基づく口腔扁平上皮癌の病態と予後因子に関する検討(I. 一般演題)(第 61 回新潟癌治療研究会)

    永田 昌毅, 藤田 一, 星名 秀行, 井上 達夫, 関 雪絵, 高木 律男, 新垣 晋, 依田 浩子, 朔 敬, 大西 真, 大山 登喜男

    新潟医学会雑誌 = 新潟医学会雑誌   116 ( 1 )   50 - 51   2002年1月

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    記述言語:日本語   出版者・発行元:新潟医学会  

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    その他リンク: http://search.jamas.or.jp/link/ui/2003003825

  • Stromal characteristics of squamous cell carcinoma of the tongue compared between well and poorly-differentiated foci: an immunohistochemical study

    Jen kai Yu, 君 程, 依田 浩子, 八木 稔, 朔 敬

    歯科基礎医学会雑誌   43 ( 5 )   632 - 632   2001年8月

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    記述言語:英語   出版者・発行元:歯科基礎医学会  

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  • 歯の萌出障害機構の病理学的背景

    衣田 浩子

    新潟歯学会雑誌 = 新潟歯学会雑誌   31 ( 1 )   45 - 46   2001年7月

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    記述言語:日本語   出版者・発行元:新潟歯学会  

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  • 口腔粘膜扁平上皮細胞間基質としての基底膜型ヘパラン硫酸プロテオグリカン

    五十嵐 輝江, 依田 浩子, 木村 信, 朔 敬

    歯科基礎医学会雑誌   42 ( 5 )   442 - 442   2000年8月

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    記述言語:日本語   出版者・発行元:歯科基礎医学会  

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  • [第18回] 上顎癌

    依田 浩子, 中条 智恵, 林 孝文

    新潟歯学会雑誌 = 新潟歯学会雑誌   30 ( 1 )   65 - 68   2000年7月

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    記述言語:日本語   出版者・発行元:新潟歯学会  

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    その他リンク: http://search.jamas.or.jp/link/ui/2001034633

  • 上唇毛包腫の1例

    宇都宮 宏子, 依田 浩子, 鈴木 一郎[他]

    新潟歯学会雑誌 = 新潟歯学会雑誌   30 ( 1 )   57 - 60   2000年7月

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    記述言語:日本語   出版者・発行元:新潟歯学会  

    左側上唇部に生じた毛包腫の一例を経験した。患者は48歳男性で、15年程前より左側上唇部に小腫瘤が出現し、7年前より腫瘤の増大と圧迫による白色泥状の内容物の排出を繰り返していた。初診時、腫瘤は12×11×11mmで半球状を呈し、表面皮膚には瘻孔開口部様を呈する陥凹がみられた。アテロ-ムの臨床診断のもとに腫瘍摘出術がおこなわれた。腫瘤表面には線維性被膜が認められ、周囲組織とは完全に隔てられていた。病理組織学的には、細胞密度の高い線維性結合組織中に多数の毛包、皮脂腺組織の増生が認められ、毛包腫と診断された。毛包腫の発生は類縁疾患の類皮嚢胞と比較して極めて稀であり、本症例は歯科領域からの報告としては第2例目である。

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    その他リンク: http://search.jamas.or.jp/link/ui/2001031618

  • 骨形成過程における基底膜型ヘパラン硫酸プロテオグリカンの発現

    羽尾 奈津子, 程 君, 木村 信, 依田 浩子, 坂井 英昭, 織田 公光, 高木 律男, 朔 敬

    日本病理学会会誌   89 ( 1 )   332 - 332   2000年3月

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    記述言語:日本語   出版者・発行元:(一社)日本病理学会  

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  • 唾液腺腺様嚢胞癌における偽嚢胞の成立機序 基底膜関連分子産生担当細胞の同定

    藤森 行彦, 程 君, 木村 信, 依田 浩子, 豊島 公栄, 高木 律男, 朔 敬

    日本病理学会会誌   89 ( 1 )   252 - 252   2000年3月

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    記述言語:日本語   出版者・発行元:(一社)日本病理学会  

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  • 病的骨新生における基底膜型ヘパラン硫酸プロテオグリカン

    羽尾 奈津子, 依田 浩子, 木村 信, 小林 泰浩, 坂井 英昭, 高木 律男, 織田 公光, 朔敬

    歯科基礎医学会雑誌   41 ( 5 )   456 - 456   1999年8月

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    記述言語:日本語   出版者・発行元:歯科基礎医学会  

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  • マウス歯胚エナメル器における基底膜型ヘパラン硫酸プロテオグリカンの局在

    依田 浩子, 織田 公光, 朔敬

    歯科基礎医学会雑誌   41 ( 5 )   441 - 441   1999年8月

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    記述言語:日本語   出版者・発行元:歯科基礎医学会  

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  • Xanthomatous Lesion of the Gingiva : A possible cause of delayed tooth eruption

    Hiroko Ida-Yonemochi, Tadashi Noda, Yukiko Ono, Takashi Saku

    Oral Med. Pathol.   4 ( 2 )   79 - 84   1999年

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講演・口頭発表等

  • 歯胚上皮及び歯髄幹細胞・象牙芽細胞維持に関わる Shh-Ptch-Gli シグナル経路

    石川裕子,依田浩子,斎藤浩太郎,中富満城,大島勇人

    第61回歯科基礎医学会学術大会 

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    開催年月日: 2019年10月

    記述言語:日本語   会議種別:ポスター発表  

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  • 肥満型 2 型糖尿病モデル TSOD マウスにおける口腔組織の経時的変化

    依田浩子,大島勇人

    第61回歯科基礎医学会学術大会 

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    開催年月日: 2019年10月

    記述言語:日本語   会議種別:口頭発表(一般)  

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  • 酸素濃度依存的RhoA-actomyosin-YAP/TAZシグナルによるエナメル上皮幹細胞制御機構

    大津圭史,依田浩子,大島勇人,原田英光

    第124回日本解剖学会総会・全国学術集会 

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    開催年月日: 2019年3月

    記述言語:日本語   会議種別:ポスター発表  

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  • 糖代謝異常がマウス歯髄組織へ及ぼす影響

    依田浩子;大島勇人

    第125回日本解剖学会総会・全国学術集会  2020年3月 

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    記述言語:日本語   会議種別:ポスター発表  

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  • Loss of autophagy in chondrocytes causes severe growth retardation.

    Horigome Y, Ida-Yonemochi H, Waguri S, Shibata S, Komatsu M

    Orthopedic Research Society 2020 Annual Meeting  2020年2月 

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    記述言語:英語   会議種別:ポスター発表  

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  • モルモット臼歯における上皮幹細胞ニッチを含む形成端上皮コンパートメントの三次元立体構築

    清野雄多,依田浩子,大島勇人

    令和元年度新潟歯学会第2回例会  2019年11月 

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    記述言語:日本語   会議種別:口頭発表(一般)  

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  • Craniofacial abnormality with connective tissue disorder in mice lacking chondroitin sulfate N-acetylgalactosaminyltransferase-1.

    Ida-Yonemochi H, Morita W, Sugiura N, Kawakami R, Watanabe H, Imamura T, Igarashi M, Ohshima H, Takeuchi K

    11th International Conference on Proteoglycans.  2019年10月 

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    記述言語:英語   会議種別:ポスター発表  

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  • コンドロイチン硫酸合成酵素KOマウスの皮膚と顎顔面異常とコラーゲン発現形成異常

    依田浩子,笹倉寛之,川上良介,今村健志,柴田俊一,大島勇人,武内恒成

    第38回日本糖質学会年会  2019年8月 

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    記述言語:日本語   会議種別:口頭発表(一般)  

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  • マウス臼歯切削後の象牙芽細胞再生過程における象牙芽細胞下層の役割

    今井千尋;佐野拓人;斎藤浩太郎;中富満城;依田浩子;岡野栄之;大島勇人

    第124回日本解剖学会総会・全国学術集会  2019年3月 

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    記述言語:日本語   会議種別:ポスター発表  

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  • 肥満型糖尿病モデルTSODマウスにおける口腔組織の経時的変化

    依田浩子,監物新一,大島勇人

    第124回日本解剖学会総会・全国学術集会  2019年3月 

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    記述言語:日本語   会議種別:口頭発表(一般)  

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  • 歯の形態形成におけるエネルギー代謝調節機構 招待

    依田 浩子

    第60回歯科基礎医学会学術大会  2018年9月 

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    記述言語:英語   会議種別:シンポジウム・ワークショップ パネル(公募)  

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  • マウス歯髄発生・再生過程におけるグリコーゲン代謝機構

    依田浩子, 滝澤 舞, 大島勇人

    第123回日本解剖学会総会・全国学術集会  2018年3月 

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    記述言語:日本語   会議種別:ポスター発表  

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  • 歯の形成過程におけるAMP-activated protein kinase (AMPK) の発現と機 能

    依田浩子, 大津圭史, 原田英光, 大島勇人

    第59回歯科基礎医学会学術大会  2017年9月 

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    記述言語:日本語   会議種別:ポスター発表  

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  • コンドロイチン硫酸は頭蓋顔面形態形成を制御している

    依田浩子, 森田航, 柴田俊一, 大島勇人

    第58回歯科 基礎医学会学術大会  2016年8月 

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    記述言語:日本語   会議種別:ポスター発表  

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  • 成熟期エナメル芽細胞の分化制御と糖代謝の役割 招待

    依田 浩子

    第58回歯科基礎医学会学術大会  2016年8月 

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    記述言語:日本語   会議種別:シンポジウム・ワークショップ パネル(公募)  

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  • Functional significance of sodium-dependent glucose transporters during murine ameloblast differentiation. 国際会議

    依田 浩子

    12th International Conference on Tooth Morphogenesis and Differentiation (TMD) 2016  2016年6月 

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    記述言語:英語   会議種別:口頭発表(一般)  

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  • エナメル芽細胞分化過程におけるAMP-activated protein kinase (AMPK) の発現と機能

    依田浩子, 大津圭史, 原田英光, 大島勇人

    第122回日本解剖学会総会・全国学術集会  2016年3月 

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    記述言語:日本語   会議種別:ポスター発表  

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  • コンドロイチン硫酸合成酵素遺 伝子欠損マウスに生じる顎顔面発育異常

    依田浩子, 森田 航, 柴田俊一, 和田芳野, 五十嵐道弘, 武内恒成, 大島勇人

    第121回日本解剖学会総会・全国学術集会  2016年3月 

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    記述言語:日本語   会議種別:口頭発表(一般)  

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産業財産権

  • グリコーゲンを含有する骨形成促進剤

    依田 浩子, 大島勇人, 中川英蔵, 田中みか子, 高田洋樹

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    出願番号:特願2012-533869 

    発行日:2016年1月

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共同研究・競争的資金等の研究

  • 他家歯胚移植実験を用いた接合上皮の由来・維持機構の解明と接合上皮幹細胞の同定

    研究課題/領域番号:20K21672  2020年7月 - 2022年3月

    日本学術振興会  科学研究費助成事業 挑戦的研究(萌芽)  挑戦的研究(萌芽)

    大島 勇人, 常木 雅之, 依田 浩子, 原田 英光

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    配分額:6370000円 ( 直接経費:4900000円 、 間接経費:1470000円 )

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  • 下顎頭軟骨初期形成を制御する因子の探求

    研究課題/領域番号:18K06820  2018年4月 - 2021年3月

    日本学術振興会  科学研究費助成事業 基盤研究(C)  基盤研究(C)

    柴田 俊一, 船戸 紀子, 依田 浩子, 藤川 芳織

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    資金種別:競争的資金

    配分額:4550000円 ( 直接経費:3500000円 、 間接経費:1050000円 )

    2018年度はまず研究の骨子として申請書にある「初期下顎頭軟骨形成を制御する候補分子の網羅的検索」を行うため、マイクロアレイ解析を行った。マウス下顎頭軟骨形成に関連するSox9発現前のE13.0日と発現後のE14.0の下顎頭軟骨原基からTotal RNAを抽出し、GeneArray Mouse 2.0STを用いてE14.0で2倍以上発現している遺伝子、1/2以下に減少している遺伝子をそれぞれ同定した。
    ピックアップした遺伝子のうち特に成長因子やそのレセプターに関係するもの、骨、軟骨形成に関与するもの、あるいは細胞外基質成分に相当するものに焦点を当て候補分子の絞り込みを行った。その結果IGFBP famiryの一分子や、カルシトニン関連タンパクあるいはMMP-9等など6分子がE14.0で2倍以上発現している事が明らかとなり、これらを候補遺伝子として次年時以降さらなる解析を行う事とした。
    また候補分子としてもピックアップされたMMP-9を含む数種のMMPおよびそのインヒビターであるTIMP-1,-2,-3の初期下顎頭軟骨形成部位における発現を in situ hybridizationおよびReal Time PCRで検討したところ、MMP-2とTIMP-2が下顎頭軟骨の軟骨膜の外層、MMP-14とTIMP-1はその内層に強く発現する事がわかり、これらの分子が初期化学等軟骨形成に深く関連している事が明らかになった。またMMP-9はおもに破骨細胞に発現が認められ、軟骨形成後のモデリングに関連する事が分かった。これらの結果は大学院生の学位論文として投稿、一部改定後出版された。

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  • エナメル上皮細胞の動態を制御するストレス応答性糖代謝調節機構の解明

    研究課題/領域番号:18K09505  2018年4月 - 2021年3月

    日本学術振興会  科学研究費助成事業 基盤研究(C)  基盤研究(C)

    依田 浩子, 原田 英光, 入江 太朗

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    担当区分:研究代表者  資金種別:競争的資金

    配分額:4550000円 ( 直接経費:3500000円 、 間接経費:1050000円 )

    本課題の目的は、エナメル上皮幹細胞からエナメル芽細胞までの分化過程における「オートファジーを介した糖代謝調節機構」について遺伝子改変マウスを用いて明らかにすることである。本年度は以下の研究を行なった。
    <BR>
    1.エナメル上皮細胞分化過程におけるストレス環境の全容把握: エナメル上皮細胞の幹細胞―増殖期―形成期―成熟期の時期特異的なストレス状況(低酸素・低栄養・酸化ストレス)を把握するために、マウス上顎切歯について免疫組織化学的手法を用いて各種ストレス応答性分子の局在について検索した。その結果、低酸素マーカーのHIF-1および低栄養マーカーのAMPKは基質形成期および成熟期エナメル芽細胞に発現していた。従って、エナメル基質の分泌および石灰化の時期にエナメル芽細胞には多くのストレス負荷が生じていることが推察された。オートファジーマーカーのLC3およびAtg7は成熟期の乳頭層細胞に強発現していた。
    <BR>
    2. 糖尿病モデルマウスにおける歯の発育異常の検索: ストレプトゾシン(STZ)誘発性I型糖尿病マウス、およびII型糖尿病マウス(TSODマウス)の歯の異常について、形態学的解析を開始した。その結果、I型糖尿病マウスにはエナメル質形成不全と成熟期エナメル芽細胞のオートファジー関連分子の異常蓄積が確認されている。一方、II型糖尿病マウスでは明らかなエナメル質形成異常は確認されていないが、セメント質および象牙質に変化が生じていた。

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  • プロテオミクス解析を応用した歯髄前駆細胞/静的幹細胞の恒常性維持と活性化の解明

    研究課題/領域番号:17H04366  2017年4月 - 2020年3月

    日本学術振興会  科学研究費助成事業 基盤研究(B)  基盤研究(B)

    大島 勇人, 下村 淳子, 山本 格, 依田 浩子, 大津 圭史

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    資金種別:競争的資金

    配分額:17030000円 ( 直接経費:13100000円 、 間接経費:3930000円 )

    我々は、「象牙芽細胞下層と歯髄中央部の血管周囲に前駆細胞/静的幹細胞(長期ラベル細胞:LRCs)が配置しており、歯髄の恒常性を維持している」という仮説を提唱した。本研究課題では、ドキシサイクリン(Dox)投与ですべての細胞をGFPでラベルした後、細胞分裂回数に応じて細胞ラベルが減弱するノックインマウス(TetOP-H2B-GFPマウス)を用いた。歯の損傷実験には、上顎第一臼歯の歯冠部が舌下部に移植および歯の再植実験を行った。歯髄中央部および象牙芽細胞下層の細胞は生後4週にIGFBP5/Igfbp5強陽性を示した。H2B-GFPラベル維持細胞(LRC)は歯髄中央部に加え象牙芽細胞下層に分布していた。歯の損傷後3~7日で、LRCは歯髄に維持されており、核にIGFBP5強陽性を示し、TUNEL陰性であった。RT-PCRおよびISHは歯髄におけるIgfbp5発現を確証した。以上より、IGFBP5は歯の発生および歯の損傷後の歯髄治癒過程において歯髄幹細胞の生存とアポトーシスの制御因子として重用な役割を果たすことが示唆された。最近我々は、Nestin-EGFP遺伝子改変マウスを用いて、生後の歯髄Nestin mRNAとタンパク質発現は象牙芽細胞に、GFP陽性発現は象牙芽細胞下層に限局し、象牙芽細胞下層細胞と象牙芽細胞との相違が伺われた。歯の切削後1日で損傷を受けた象牙芽細胞が変性しNestin反応を消失したが、術後3~5日にNestin陽性象牙芽細胞様細胞が歯髄・象牙質界面に配列し、修復象牙質形成を開始した。GFP陽性細胞が象牙芽細胞様細胞にコミットされており、静的状態でNestinタンパク発現が抑制されていた象牙芽細胞下層細胞が外的侵襲によりNestinタンパクを発現し象牙芽細胞様細胞に分化することが明らかになった。

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  • 歯の発生過程におけるShhシグナルによる静的幹細胞維持機構の解明

    研究課題/領域番号:17K11730  2017年4月 - 2020年3月

    日本学術振興会  科学研究費助成事業 基盤研究(C)  基盤研究(C)

    石川 裕子, 大島 勇人, 中富 満城, 斎藤 浩太郎, 依田 浩子

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    資金種別:競争的資金

    配分額:4550000円 ( 直接経費:3500000円 、 間接経費:1050000円 )

    本研究は、歯の発生過程におけるShhシグナルと静的幹細胞維持機構、エナメル芽細胞分化との関係ならびにShhシグナルの役割を解明することを目的とする。
    平成30年度では、以下の研究結果が得られた。
    1.TetOP-H2B-GFPマウス(胎生14.5日または15.5日にドキシサイクリン投与)を用いたin vivo実験:生後1日~5週齢の上顎第一臼歯・生後3週齢の切歯パラフィン切片を作製して、蛍光観察及び免疫組織化学的解析を行った。その結果、生後1日から1週では、GFP陽性細胞が歯髄全体に分布していたが、3週になると、強い蛍光のdense LRCが象牙芽細胞層及び象牙芽細胞下層に局在し、歯髄中央部のLRCの蛍光が減弱していた。Gli1陽性細胞は生後1日から5週まで髄角部に局在していた。切歯では、歯乳頭と形成端の外エナメル上皮側に多くのGFP強陽性細胞が局在し、Gli1は形成端全体に発現していた。In situハイブリダイゼーション法によるShhおよびPtch1のmRNA発現分布については、現在、解析中である。
    2.in vitro実験1:昨年度からの追加実験として、生後2日B6マウスの下顎切歯を取り出しTrowell法にてShh阻害剤である5E1を培地に4日間添加(26μg/ml)器官培養を行い、パラフィン切片を作成し免疫組織化学的に検索した。その結果、5EIによりShh陽性細胞は内エナメル上皮側でコントロール群より有意に減少することが明らかとなった。
    3.in vitro実験2:生後2日TetOP-H2B-GFP仔マウスの下顎切歯を取り出しTrowell法にてShh阻害剤である5E1を培地に4日間添加(26μg/ml)・器官培養を行い、パラフィン切片を作製した。現在、静的幹細胞と考えられるGFP陽性細胞とSox2陽性細胞について蛍光観察・免疫組織化学的に解析中である。

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  • 歯胚形成におけるヒアルロン酸の発現と機能に関する研究

    研究課題/領域番号:15K11005  2015年4月 - 2018年3月

    日本学術振興会  科学研究費助成事業 基盤研究(C)  基盤研究(C)

    柴田 俊一, 田巻 玉器, 依田 浩子

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    資金種別:競争的資金

    配分額:4680000円 ( 直接経費:3600000円 、 間接経費:1080000円 )

    HA合成酵素 (Has)のマウス歯胚発育過程における遺伝子発現パターンを検索した。Has2 mRNAは歯胚周囲の間葉組織, Has3 mRNAはエナメル器, HERS, Apical Bud等の上皮組織に特異的に発現が認められた。したがってHas3が歯胚の発育や構造維持に関与している可能性が示された。
    Has3の機能を抑制するために, siRNAを器官培養系に添加し構造変化を検索したところ, 歯胚におけるHas3 mRNAの発現は4割ほど減少したが、組織学的観察では大きな変化は認められなかった。よって、Has3の歯胚発育に関する作用は他のHas分子などで代償される可能性が考えられた。

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  • 下顎骨の骨粗鬆症診断:組織から画像へのインタープリテーション

    研究課題/領域番号:15K11070  2015年4月 - 2016年3月

    日本学術振興会  科学研究費助成事業 基盤研究(C)  基盤研究(C)

    田中 礼, 依田 浩子, 林 孝文, 田中 みか子

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    配分額:4680000円 ( 直接経費:3600000円 、 間接経費:1080000円 )

    卵巣摘出後のラットで、骨粗鬆症の下顎骨における病態を明らかにし、組織学的所見と画像所見とを対比させ、組織学的な骨変化が画像にどのように反映されるかを検討することを目的とした。すなわち、下顎骨の経時的な骨吸収形態の観察、骨吸収部での骨代謝の特徴、骨吸収部と骨髄部の組織・細胞の特徴を、形態学的、免疫組織化学的に検討することとした。
    平成27年度は、1)実験動物を用いた研究のための環境整備、2)閉経後骨粗鬆症モデル作成、3)卵巣摘出後3か月および6か月のラットの、(i)軟X線、(ii)マイクロCT、(iii)組織切片、(iv)血清CRPおよびアデイポネクチン値についてのデータ収集・観察・評価を計画した。
    実際には、環境整備を行い、動物実験倫理委員会の審査承認(5月)を得た。また、卵巣摘出術式の確認および訓練のためラット2頭を購入し、研究分担者2名と術式に沿って実際に卵巣摘出モデルを作成した(6月)。研究代表者に海外転出の可能性が生じたため、動物実験を中断した。その間、Journal of Medical Casesに顎骨壊死の症例を報告し掲載された(9月)。

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  • プロテオグリカンを介した歯胚細胞外環境の構築機序の解明と新規歯胚組織再生法の確立

    研究課題/領域番号:26462777  2014年4月 - 2017年3月

    日本学術振興会  科学研究費助成事業 基盤研究(C)  基盤研究(C)

    依田 浩子, 大島 勇人, 柴田 俊一, 武内 恒成

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    担当区分:研究代表者  資金種別:競争的資金

    配分額:4940000円 ( 直接経費:3800000円 、 間接経費:1140000円 )

    本研究課題では歯胚発育・再生過程におけるコンドロイチン硫酸プロテオグリカン(CSPG)の局在と機能を明らかにし、CS鎖の歯胚組織再生法への応用の可能性について検討した。正常歯胚では、CS鎖は幼若歯乳頭、神経・骨・軟骨周囲の間葉に強く発現し、歯髄組織の成熟とともに歯根先端部に限局したことより、歯髄の神経誘導と歯髄幹細胞ニッチの形成に関与している可能性が示された。また、CS合成酵素ノックアウト (CSKO)マウスでは、顎顔面奇形、頭蓋骨の形態変化と骨・軟骨の低形成、歯髄再生の変化が確認された。以上より、CSPGは歯ならびに頭蓋顔面の発生・再生を調節する重要な分子であることが示された。

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  • 脊髄損傷修復に向けた再生阻害機構制御‐コンドロイチン硫酸を制御する新素材開発‐

    研究課題/領域番号:26462232  2014年4月 - 2017年3月

    日本学術振興会  科学研究費助成事業 基盤研究(C)  基盤研究(C)

    武内 恒成, 玉田 靖, 依田 浩子, 鈴木 宏昌

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    資金種別:競争的資金

    配分額:4940000円 ( 直接経費:3800000円 、 間接経費:1140000円 )

    脊髄損傷治療に関しては根本治療法がない。そのためにiPS細胞移植等による臨床治療が示されている。しかし損傷された神経の周辺領域ではコンドロイチン硫酸が再生阻害因子として機能し、神経再生を阻害する。そのため損傷部周囲の環境を整え、コンドロイチン硫酸の発現を制御することが重要となる。我々は新しいバイオマテリアルを用い、かつ核酸医薬をデリバリーすることで、再生環境を維持しマウスモデルにおける生理的機能回復につなげることを可能とした。さらにこの方法はiPS細胞移植時にも移植細胞と移植細胞周辺環境の制御と併用した治療方向性につなげることが出来た。

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  • 末梢神経損傷による骨破壊現象の物質基盤の解明

    研究課題/領域番号:25670854  2013年4月 - 2016年3月

    日本学術振興会  科学研究費助成事業 挑戦的萌芽研究  挑戦的萌芽研究

    瀬尾 憲司, 前田 健康, 依田 浩子, 藤原 直士

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    資金種別:競争的資金

    配分額:3770000円 ( 直接経費:2900000円 、 間接経費:870000円 )

    脳由来神経栄養因子(BDNF)は損傷した神経の治癒を促進する効果を有するが、その一方で周囲の骨硬化をもたらす可能性があることが知られている。私たちは今までに末梢神経損傷が局所にBDNFの産生をもたらすことを報告してきた。そこで本研究では、局所のBDNFが骨形成に対しての影響を検討した。その結果、BDNFは前骨芽細胞株において、細胞増殖をさせずOsteocalcinとOsteopontinのmRNAの発現させた。この分化促進はtrkBを介していた。新生骨では破骨細胞、骨細胞や骨芽細胞が関与したリモデリングが進行していた。したがって下歯槽神経損傷は下顎骨内での骨硬化をもたらすことが認められた。

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  • 歯髄幹細胞/前駆細胞のサブポピュレーションの解明:分化能・由来・微小環境との関連

    研究課題/領域番号:25293371  2013年4月 - 2016年3月

    日本学術振興会  科学研究費助成事業 基盤研究(B)  基盤研究(B)

    大島 勇人, 辻極 秀次, 本田 雅規, 依田 浩子, 中富 満城, 斎藤 浩太郎

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    配分額:17550000円 ( 直接経費:13500000円 、 間接経費:4050000円 )

    ドキシサイクリンですべての細胞がGFP陽性を示すTetOP-H2B-GFPマウスを用いて、歯髄中央部血管周囲に加え、象牙芽細胞下層に非対称分裂する長期ラベル細胞LRCsが存在する事実を発見した。さらに、拒絶反応の有無に関わらず歯の他家移植後に静的歯髄幹細胞がアポトーシスを起こすという現象を発見し、マイクロアレイによる網羅的解析と免疫組織化学によりインスリン様成長因子結合タンパク質5が前駆細胞および静的歯髄幹細胞維持に重要な役割を果たすことが推察された。また、静的歯髄幹細胞が転写因子Gli1および受容体Patched1を発現しており、これらの細胞がShhシグナルで維持されていると考えられた。

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  • グリコーゲンの新たな機能の解明ー歯胚・骨形成促進剤としての臨床応用に向けてー

    研究課題/領域番号:24659810  2012年4月 - 2015年3月

    日本学術振興会  科学研究費助成事業 挑戦的萌芽研究  挑戦的萌芽研究

    依田 浩子, 田中 みか子, 中富 満城, 大島 勇人

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    担当区分:研究代表者  資金種別:競争的資金

    配分額:3640000円 ( 直接経費:2800000円 、 間接経費:840000円 )

    歯胚発育過程におけるグリコーゲン代謝調節機構およびその役割を解明し、さらに酵素合成グリコーゲン(ESG) が歯胚形成に及ぼす影響とその作用メカニズムを明らかにし、ESGを歯胚・歯槽骨形成促進剤として臨床応用することを目指した。マウス歯胚発育過程において、グリコーゲン代謝関連分子が時期特異的に厳密に発現調節されており、グリコーゲン代謝が歯胚細胞の増殖および分化を制御していることが示された。さらに、細胞外から投与した酵素合成グリコーゲン(ESG)が歯胚細胞のグリコーゲン代謝を促進することにより、歯胚再生を促進することが明らかとなり、ESGの歯科再生医療への応用の可能性が示唆された。

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  • エナメル器星状網細胞の上皮間葉転換は血管新生の誘導メカニズムになり得るか?

    2012年4月 - 2015年3月

    日本学術振興会  挑戦的萌芽研究 

    原田英光

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    資金種別:競争的資金

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  • エナメル器星状網細胞の上皮間葉転換は血管新生の誘導メカニズムになり得るか?

    研究課題/領域番号:24659818  2012年4月 - 2014年3月

    日本学術振興会  科学研究費助成事業 挑戦的萌芽研究  挑戦的萌芽研究

    原田 英光, 原田 英光, 依田 浩子, 大津 圭史, 井関 祥子

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    配分額:3640000円 ( 直接経費:2800000円 、 間接経費:840000円 )

    歯の発生後期には,エナメル器(上皮)に血管が複雑に入り込んだ構造をとるので,この過程から新規血管新生のメカニズムの解明を考えた。上皮特異的にβ-gal を発現する遺伝子改変マウスを用いて,上皮間葉転換とそれに関わる因子の検索を行った。またFlk1(VEGF2R)―GFPマウスによって血管構築を観察した。その結果,星状網の細胞は内エナメル上皮細胞の増殖によって中間層細胞を経由して発生すること,星状網の血管構築には低酸素反応因子Hif1の発現から酸素濃度の変化とHif1の発現が深く関わっていること,を明らかにした。また血管網はエナメル基質の石灰化のためにエナメル芽細胞の分化との関連も示唆された。

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  • 歯槽骨の骨構造変化を指標とした骨粗鬆症診断法の開発 —歯科臨床からのアプローチ—

    2011年4月 - 2015年3月

    日本学術振興会  基盤研究C 

    田中みか子

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    資金種別:競争的資金

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  • 歯槽骨の骨構造変化を指標とした骨粗鬆症診断法の開発 ―歯科臨床からのアプローチ―

    研究課題/領域番号:23592839  2011年4月 - 2015年3月

    日本学術振興会  科学研究費助成事業 基盤研究(C)  基盤研究(C)

    田中 みか子, 江尻 貞一, 依田 浩子, 田中 礼, 山田 一穂, 野村 修一, 櫻井 直樹, 山本 智章, 林 孝文, 三上 絵美

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    配分額:5200000円 ( 直接経費:4000000円 、 間接経費:1200000円 )

    下顎片側臼歯部が欠損している高齢女性の下顎骨を歯科用コーンビームCTで撮像し、海綿骨の形態計測データと踵骨骨密度および血液中の骨代謝マーカーの間に関連性があるかどうかを検索した。下顎骨骨梁構造の骨梁形態に関係するパラメータは、踵骨の骨密度と有意な強い相関を示した。また下顎骨のデータのうち、下顎骨の骨梁表面積、骨梁数、骨梁交点数、骨梁末端数が、骨吸収マーカーであるTRACP-5bとの有意な相関性を示した。以上より、下顎骨の海綿骨骨梁の形態は踵骨骨密度と、骨梁の連結性は骨吸収マーカーと呼応していることが示された。下顎骨の骨梁構造の骨形態計測データを用いた骨粗鬆症診断が実現可能であることが示された。

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  • Dual Energy CTイメージングによる顎骨骨髄微小循環描出の試み

    2011年4月 - 2014年3月

    日本学術振興会  基盤研究C 

    田中 礼

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    資金種別:競争的資金

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  • Dual Energy CTイメージングによる顎骨骨髄微小循環描出の試み

    研究課題/領域番号:23592760  2011年 - 2013年

    日本学術振興会  科学研究費助成事業 基盤研究(C)  基盤研究(C)

    田中 礼, 林 孝文, 依田 浩子, 池 真樹子, 大島 勇人, 丸山 智

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    配分額:4940000円 ( 直接経費:3800000円 、 間接経費:1140000円 )

    Dual Energy CT Imaging(DEI)を用いて下顎骨骨髄の微小血管分布を画像化することを目的に、病変切除のため下顎骨区域切除術が施行された患者の顎骨病理標本、および当該部位のCT画像を対象とし、組織切片上で骨髄の一定範囲内の微小血管分布を主観的に評価した。下顎骨切除術前のCT画像データからMPR画像を構築し組織像と照合した。評価対象の骨髄部は非常に小さく、かつ脂肪細胞の占める割合が圧倒的に大きく、至適CT画像生成方法の確立には至らなかった。組織切片上の微小血管の分布から、下顎骨骨髄の微小血管の割合は、CT画像に何らかの濃度変化を引き起こすほどには大きくないと思われた。

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  • 歯髄再生に関わる歯髄幹細胞と骨髄由来細胞の相互作用の解明と臨床的意義 研究課題

    2010年4月 - 2013年3月

    日本学術振興会  基盤研究B 

    大島勇人

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    資金種別:競争的資金

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  • 歯髄再生に関わる歯髄幹細胞と骨髄由来細胞の相互作用の解明と臨床的意義

    研究課題/領域番号:22390341  2010年 - 2012年

    日本学術振興会  科学研究費助成事業 基盤研究(B)  基盤研究(B)

    大島 勇人, 本田 雅規, 原田 英光, 依田 浩子, 中富 満城, 渡辺 信和, 武藤 徳子

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    配分額:17030000円 ( 直接経費:13100000円 、 間接経費:3930000円 )

    歯の移植後の歯髄治癒過程において、歯髄幹細胞は増殖能および象牙芽細胞への分化能を維持しており、またドナー細胞とホスト細胞との相互作用が歯髄組織の再構築に重要な役割を果たすことが示唆された。また、本研究で確立した象牙質・歯髄複合体器官培養系はin vivoでの歯の移植・再植実験における損傷後の歯髄再生現象を再現しており、歯髄幹細胞の象牙芽細胞への分化過程を検索するのに有用な器官培養系であることが示された。

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  • 歯胚エナメル器星状網形成におけるパールカンシグナル伝達機構の解明

    2009年4月 - 2012年3月

    日本学術振興会  基盤研究C 

    依田浩子

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    担当区分:研究代表者  資金種別:競争的資金

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  • 歯胚エナメル器星状網形成におけるパールカンシグナル伝達機構の解明

    研究課題/領域番号:21592321  2009年 - 2011年

    日本学術振興会  科学研究費助成事業 基盤研究(C)  基盤研究(C)

    依田 浩子, 大島 勇人, 朔 敬

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    配分額:4680000円 ( 直接経費:3600000円 、 間接経費:1080000円 )

    基底膜型へパラン硫酸プロテオグリカン・パールカンがエナメル器形成にどのように関与しているかを解明するために、パールカン上皮細胞過剰発現系トランスジェニックマウスおよびノックアウトマウスを用いて、星状網形成からエナメル器退縮までの全過程にけるパールカンおよびパールカン関連シグナル分子の経時的変化について検索した。胎生期歯胚では星状網の形成に伴い、パールカンおよびパールカン関連分子が細胞間隙に沈着し、星状網細胞によるパールカン生合成はエナメル器の成長ならびに退縮にあわせて時期特異的に厳密に制御されていた。従って、パールカンは巧妙に時間的発現調節がなされながら、歯の発育を制御する重要なシグナル分子と相互作用を示し、エナメル器形態形成に必要な時空間特異的な細胞外環境を形成していることが示唆された。

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  • 東アジア地域における口腔粘膜表在性癌に関する比較分子病理疫学的研究

    2008年4月 - 2012年3月

    日本学術振興会  基盤研究B 

    程くん

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    資金種別:競争的資金

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  • 外傷歯の歯髄再生療法の基盤となる歯髄細胞の分化誘導法の確立

    2008年4月 - 2010年3月

    日本学術振興会  挑戦的萌芽研究 

    大島勇人

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    資金種別:競争的資金

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  • 東アジア地域における口腔粘膜表在性癌に関する比較分子病理疫学的研究

    研究課題/領域番号:20406029  2008年 - 2011年

    日本学術振興会  科学研究費助成事業 基盤研究(B)  基盤研究(B)

    程 ?, 丸山 智, 朔 敬, 依田 浩子, 山崎 山崎

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    配分額:16770000円 ( 直接経費:12900000円 、 間接経費:3870000円 )

    わが国をはじめ高齢化社会への移行にともなって口腔癌が増加しているが、その一因は口腔粘膜内多発・再発性の表在性癌の増加による。その発生背景を明らかにするため、東アジア諸国とわが国の表在性癌症例を比較検討した結果、地域差・病因の相違に関わらず、表在性癌が上皮内癌を中心として異型上皮から微小浸潤癌までを包括する病変複合体であることを明確にし、その認識のためには上皮内癌の病理診断を科学的・客観的に実践する必要があるので、その手立てを確立した。

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  • 外傷歯の歯髄再生療法の基盤となる歯髄細胞の分化誘導法の確立

    研究課題/領域番号:20659296  2008年 - 2009年

    日本学術振興会  科学研究費助成事業 挑戦的萌芽研究  挑戦的萌芽研究

    大島 勇人, 大島 邦子, 重谷 佳見, 依田 浩子, 鈴木 啓展

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    配分額:3200000円 ( 直接経費:3200000円 )

    【目的】歯の損傷後の歯髄治癒過程における象牙芽細胞分化機構ならびに胎生期ラベリング法によりマウス歯髄組織幹細胞をブロモデオキシウリジン(BrdU)によりラベルし、歯髄におけるBrdU label-retaining cells(LRCs)の分化能を解明することを目的に、歯の移植後の顆粒球マクロファージコロニー刺激因子(GM-CSF)およびオステオポンチン(OPN)の反応、LRCsの分化能を免疫細胞化学的に検索した。
    【方法】妊娠後期ICRマウスに3~4日間BrdUを腹腔内投与し、生後3週後に深麻酔下で上顎第一臼歯抜去後に歯冠部を舌下部へ他家移植した。術後1日~2週後にアルデヒド系固定液で灌流固定し、EDTA脱灰後、パラフィン切片を作製し、抗GM-CSF・抗OPN・抗ネスチン抗体・抗BrdU鼎を用いた免疫染色を行った。なお無処置群の左側臼歯を対照群とした。
    【結果と考察】対照群歯髄では、歯髄中央部血管周囲にLRCsが局在し、咬頭頂領域を中心に歯髄・象牙質界面に弱いオズテオポンチン陽性反応が見られ、象牙芽細胞はネスチン強陽性を示したが、歯髄内はGM-CSFは陰性であった。術後に歯髄のネスチン免疫陽性反応が消失したが、3~7日後に、GM-CSF陽性細胞、OPN陽性細胞の出現に引き続き、ネスチン陽性象牙芽細胞様細胞が歯髄・象牙質界面に再配列した。14日後には歯髄腔に骨組織形成が惹起されたが、骨芽細胞がOPN陽性反応を示した。GM-CSF陽性反応産物は象牙細管内にも見られ、既存の象牙質と再生象牙質の界面にOPN陽性反応が観察された。さらに、in situ hybridizationによりOPN遺伝子発現を検索ると、免疫反応とほぼ同じ発現パターンを示した。また、LRCsは再生象牙芽細胞にコミットされていた。以上より、歯の移植後の歯髄治癒過程における象牙芽細胞の分化には、GM-CSF発現とOPN発現が重要な役割を果たし、LRCsが象牙芽細胞に分化することが明らかとなった。

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  • アジアから東アフリカまで広がる噛みタバコ習慣による口腔がん発症機構

    2007年4月 - 2011年3月

    日本学術振興会  海外学術 

    朔 敬

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    資金種別:競争的資金

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  • 歯髄組織幹細胞の局在と分化能の解明

    2007年4月 - 2010年3月

    日本学術振興会  基盤研究B 

    大島勇人

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    資金種別:競争的資金

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  • 口腔粘膜・皮膚の付属器におけるパールカンの役割-上皮過剰発現系マウスによる解析-

    2007年4月 - 2009年3月

    日本学術振興会  基盤研究C 

    依田浩子

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    担当区分:研究代表者  資金種別:競争的資金

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  • アジアから東アフリカまで広がる噛みタバコ習慣による口腔がん発症機構

    研究課題/領域番号:19406030  2007年 - 2010年

    日本学術振興会  科学研究費助成事業 基盤研究(B)  基盤研究(B)

    朔 敬, 程 〓, 丸山 智, 依田 浩子, 山崎 学

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    配分額:16640000円 ( 直接経費:12800000円 、 間接経費:3840000円 )

    口腔がんの発生要因として特定されてきたアジア・アラビア・東アフリカに普遍的な噛みタバコ習慣による発癌と、発生要因の特定しえないわが国の口腔がんの発癌とを疫学的調査と分子病理学的解析で比較検討した。その結果、口腔粘膜下線維症が被覆上皮の悪性転化の背景となる組織構築を検討し、表在性癌の組織学的特異性、そのなかでも異型上皮と上皮内癌,微小浸潤癌の病理診断基準を実用的レベルでほぼ確立することができた。

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  • 歯髄組織幹細胞の局在と分化能の解明

    研究課題/領域番号:19390462  2007年 - 2009年

    日本学術振興会  科学研究費助成事業 基盤研究(B)  基盤研究(B)

    大島 勇人, 大島 邦子, 本田 雅規, 依田 浩子, 鈴木 啓展

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    配分額:17420000円 ( 直接経費:13400000円 、 間接経費:4020000円 )

    胎生期ラベリング法により歯髄組織幹細胞をチミジン類似体であるBrdUによりラベルすることに成功し、歯の発生過程での幹細胞の局在と歯の損傷後の幹細胞の分化能を検索した。成熟歯髄において、ラベル細胞は間葉系幹細胞マーカーであるSTRO-1、CD146との共陽性を示し、歯髄中央部血管周囲に密に局在していたことから、同部に歯髄幹細胞ニッチの存在が示唆された。また、歯の損傷後に歯髄組織幹細胞が象牙芽細胞に分化することも明らかとなった。

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  • 口腔粘膜・皮膚の付属器におけるパールカンの役割-上皮過剰発現系マウスによる解析-

    研究課題/領域番号:19592105  2007年 - 2008年

    日本学術振興会  科学研究費助成事業 基盤研究(C)  基盤研究(C)

    依田 浩子, 丸山 智, 程 〓, 朔 敬

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    配分額:4550000円 ( 直接経費:3500000円 、 間接経費:1050000円 )

    上皮組織構築とくに口腔粘膜、皮膚付属器における基底膜型へパラン硫酸プロテオグリカン・パールカンの役割を解明する目的で、パールカン上皮細胞過剰発現系トランスジェニック(Tg)マウスにおけるin vivoでの上皮組織の病的変化について、口腔粘膜および毛包をはじめとする皮膚付属器に着目して組織学的に検索した。その結果、毛包発育過程に乱れが生じ、上皮細胞の分化および毛包発育に関与する増殖因子ならびに転写因子に発現レベルの変化がみられた。したがって、パールカンの持続的発現により上皮細胞分化および皮膚付属器、とくに毛包発育にかかわるシグナル伝達経路が障害され、分化の乱れを生じる可能性が示唆された。
    さらに、パールカンTgマウスにおける口腔粘膜・皮膚創傷治癒実験では、表皮再生が促進されており、パールカンがケラチノサイトの増殖および分化を制御している可能性がしめされた。したがって、上皮細胞の産生するパールカンが上皮組織構築に重要な役割を果たしていることが明らかとなった。

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  • 口腔癌細胞浸潤にともなう間質誘導スイッチング機構の分子病理学的解析

    2006年4月 - 2009年3月

    日本学術振興会  基盤研究B 

    朔 敬

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    資金種別:競争的資金

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  • 口腔癌細胞浸潤にともなう間質誘導スイッチング機構の分子病理学的解析

    研究課題/領域番号:18390486  2006年 - 2008年

    日本学術振興会  科学研究費助成事業 基盤研究(B)  基盤研究(B)

    朔 敬, 程 〓, 丸山 智, 鈴木 誠, 依田 浩子

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    配分額:18450000円 ( 直接経費:15300000円 、 間接経費:3150000円 )

    扁平上皮癌の腫瘍性間質誘導が、浸潤を契機に実質細胞から間質細胞に移管される(スイッチング)のではないかという仮説をたて、これを証明するために扁平上皮癌細胞と線維芽細胞の共培養系を作製して、細胞外基質分子代謝を軸に検討し、口腔癌組織の結果と照合した.その結果、上皮内癌に相当する分離共培養では癌細胞側に、浸潤癌に相当する混合共培養では、線維芽細胞側にECM 産生の主体があり、間質誘導が扁平上皮癌浸潤によって開始することを証明し、この概念を病理診断の理論的背景として適用することに成功した.この結果、非浸潤性腫瘍の腫瘍細胞間隙の細胞外基質を腫瘍細胞によって産生される上皮内基質という概念でとらえることを提唱することになった.

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  • 上皮組織における基底膜型ヘパラン硫酸プロテオグリカン・パールカンの役割

    2005年4月 - 2007年3月

    日本学術振興会  基盤研究C 

    依田 浩子

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    担当区分:研究代表者  資金種別:競争的資金

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  • 上皮組織における基底膜型ヘパラン硫酸プロテオグリカン・パールカンの役割

    研究課題/領域番号:17591902  2005年 - 2006年

    日本学術振興会  科学研究費助成事業 基盤研究(C)  基盤研究(C)

    依田 浩子, 丸山 智, 佐藤 俊哉, 程 くん, 朔 敬, 鈴木 誠

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    配分額:3600000円 ( 直接経費:3600000円 )

    上皮組織とくに歯胚および口腔粘膜の上皮構築における基底膜型ヘパラン硫酸プロテオグリカン・パールカンの役割を解明する目的で、パールカン上皮細胞過剰発現系トランスジェニックマウスを作製し、歯胚組織および口腔粘膜における病的変化について、組織学的および分子生物学的に検索した。さらに歯胚エナメル器を分離後、星状網様細胞の初代培養をおこない、パールカン過剰発現の有無による細胞形態の変化について解析をおこなった。その結果、歯胚組織においては、胎生期Tgマウス臼歯でエナメル器星状網の細胞間隙が著明に拡大し、エナメル器形態の変化とともにエナメル器内の細胞分化にも乱れが生じていた。生後臼歯では、歯冠形態が鈍縁化し、同時に歯根離開も観察された。さらに、Tgマウス歯胚組織の遺伝子発現の解析結果より、出生前後で線維芽細胞増殖因子をはじめとする各種成長因子やMsx-2などの転写因子の遺伝子発現上昇が確認された。したがって、パールカンはエナメル器内の成長因子や転写因子の発現調節に関わり、歯胚エナメル器細胞の分化と、歯冠および歯根形態の誘導を制御していることが示された。さらに、口腔粘膜上皮では、基底細胞の配列の乱れおよび多層化が観察され、上皮過形成ないしは異形成等の口腔粘膜疾患の発症過程において、上皮細胞間へのパールカン過剰沈着が関与している可能性が示唆された。
    以上、本研究結果より、上皮細胞が産生する細胞外基質としてのパールカンが、歯胚組織および口腔粘膜上皮の形態形成を調節していることがあきらかとなり、他の上皮組織(皮膚、皮膚付属器、唾液腺等)の恒常性維持にも重要な役割を果たしていることが推察された。したがって、上皮内基質が上皮組織の構築を制御しているという新たな観点から、今後の上皮再生医療の発展に貢献が期待される研究展望がえられた。

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  • 唾液腺リンパ上皮性癌に特異的にEBウィルス感染の分子病理学的解析

    研究課題/領域番号:16406033  2004年 - 2006年

    日本学術振興会  科学研究費助成事業 基盤研究(B)  基盤研究(B)

    程 クン, 丸山 智, 朔 敬, 依田 浩子, 大城 和文

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    配分額:11300000円 ( 直接経費:11300000円 )

    本研究実施によって、唾液腺リンパ上皮性癌(LEC)におけるEBVはLMP-1遺伝子を軸に初めて明らかにし得た。唾液腺LEC由来EBVには少なくとも二系統の地埋的変異が存在し、同遺伝子プロモータを含む多様な変異が腫瘍厳正に関与する可能性が示唆された。唾液腺LEC由来の単離遺伝子を再構成して試験管内でその他の由来LMP1遺伝子と比較したところ、顕著な差異がみいだされなかったものの、明らかにNFκB転写因子活性増加作用が確認されたので、同遺伝子の腫瘍細胞活性化に関与していることが証明された。しかし、同時に細胞増殖抑制も出現することが判明したので、この点はさらに検討中である。
    中国各地の施設と手術材料からのLEC細胞の単離をこころみてきた。細胞の維持は困難であったが、選択的リンパ球除去法とコラゲナーゼ細胞分散法とをとりいれることで、他種細胞の混入なしにLEC細胞を調整する方法を検討したところ、現在までに細胞単離後初期培養には成功して、LMP1およびLMP2A等のEBV遺伝子の発現と唾液腺導管上皮ならびに筋上皮細胞性格を確認できたが、株化までには至っていない。
    さらに、LECの背景病変としての可能性を検討するために、類似良性病変のリンパ上皮性嚢胞と良性リンパ上皮性病変症例をさらに収集して病埋組織学的ならびに免疫組織化学的、ウィルス学的な検討をおこなった。しかし、いずれの病変にもEBVの積極的な関与はなかった。したがって、LECの基礎疾患として、唾液腺炎を経過して発がんする経路は否定された。

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  • 良性口腔腫瘍の二次的悪性転化機構に関する分子病理学的検討

    研究課題/領域番号:16591821  2004年 - 2005年

    日本学術振興会  科学研究費助成事業 基盤研究(C)  基盤研究(C)

    程 くん, 丸山 智, 朔 敬, 依田 浩子, 大城 和文

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    配分額:3600000円 ( 直接経費:3600000円 )

    本研究では、唾液腺に発生する良性腫瘍・多形性腺腫の二次的悪性転化を中心に検討し、良性腫瘍から悪性腫瘍が発生する機序について考察した。多形性腺腫内には異型細胞が出現する頻度が高く、巣状癌が二次的に悪性化する可能性を提言してきたからである。
    まず、ヒト耳下腺多形性腺腫組織から不死化細胞を単離し、6株の細胞系SMAPを樹立し、これら細胞について種々の検討をおこなった。SMAP1-3は導管上皮、SMAP4-6は筋上皮への分化性格が有していた。これらの細胞は平均107本の染色体、核型5nの異数倍性、さらに第13番染色体q12と第9番染色体p13の相互転座が共通してみいだされ、同部より遠位の遺伝子座欠失で同位のp16遺伝子など癌化関連遺伝子の機能喪失が示唆された。またp53遺伝子異常も発見された。したがって、以上のような遺伝子レベルでの異常をもとに悪性形質が獲得されていくことが示唆された。
    また、多形性腺腫における被膜浸潤と脈管侵襲の発生頻度を検討したところ、被膜浸潤は検討症例ほぼ全例ときわめて高頻度で、被膜外進展も約20%の症例でみられた。さらに静脈侵襲事例は約15%であった。侵襲部位の組織学的特徴は粘液様間質で乏血管性の特徴があった。その乏血管分布性の背景にはVEGFと特徴的スプライシング様式とHIF-1α高発現の関連があった。したがって、多形性腺腫の悪性形質獲得には、これらの生物学的態度も重要な貢献をしている可能性が示唆された。
    ついで、ヒト顎骨に発生した黒色プロゴノーマ由来細胞株も作製し、その染色体に、SMAP細胞同様、第9-第13染色体の相互転座がみられ、良性腫瘍の悪性転化の解析に重要な変化とみなされ、今後の検討方向が示された。

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  • 胚エナメル器における基底膜型ヘパラン硫酸プロテオグリカン・パールカンの役割

    2003年4月 - 2005年3月

    日本学術振興会  若手研究B 

    依田 浩子

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    担当区分:研究代表者  資金種別:競争的資金

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  • アジアに広がる〈噛みたばこ習慣〉による口腔がん発症機構の分子病理学的解析

    研究課題/領域番号:15256005  2003年 - 2006年

    日本学術振興会  科学研究費助成事業 基盤研究(A)  基盤研究(A)

    朔 敬, 程 クン, 丸山 智, 依田 浩子, 宮崎 秀夫, 長尾 徹, 浅川 義範, 鈴木 誠, 大城 和文

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    配分額:34060000円 ( 直接経費:26200000円 、 間接経費:7860000円 )

    (1)症例収集ならびに疫学調査:噛みたばこ習慣の有無のほか口腔癌患者の臨床的事項および腫瘍病理組織型や粘膜下線維症を検討した。台湾、インド、バングラデッシュ、スリランカ、イエメン、マダガスカル、ミャンマーを踏査し、習慣と口腔癌発生頻度の関連を検討した。
    (2)口腔粘膜前がん病変の診断と上皮内基質:免疫組織化学的解析結果を応用して新たに口腔粘膜前がん病変の病理組織学的概念を発展させた。すなわち、二層性異型上皮の認識が腫瘍性異型上皮の診断に有用であること、上皮内に沈着するパールカンほかの細胞外基質を証明して上皮内基質という概念を提案し、それが前がん病変診断に有用であることを明らかにした。
    (3)口腔粘膜下線維症の解析:噛みたばこ地域から収集した粘膜下線維症(OSF)症例によって、その進行度分類を提案し、それが細胞外基質の沈清様式と関連があることをしめした。線維症の進展に脈管分布が関連し、局所の低酸素状態が口腔発がん背景となる基礎データをえた。
    (4)扁平上皮癌のがん関連遺伝子:収集した口腔粘膜扁平上皮癌、上皮内癌、異型上皮症例について、組織化学、微小切り出し、RT-PCRによる解析をすすめた結果、噛みたばこ背景の有無にかかわらず共通するp53遺伝し変異様式を明らかにした。
    (5)噛みたばこ成分の解析:噛みたばこ材料について有機化学的に精密分析をおこない、その成分は地域をこえて基本的には同様の構成であることが判明した。
    (6)総括:以上のとおり、噛みたばこ習慣による口腔癌の多面的な検討により、わが国の口腔癌との類似点を明らかにできたので、わが国の口腔癌発症機構を検討していくために重要な示唆がえられるとともに、病理組織診断精度を格段に向上させることができた。

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  • 口腔粘膜上皮層内の細胞外基質配置に関する分子病理学的解析

    研究課題/領域番号:15591993  2003年 - 2004年

    日本学術振興会  科学研究費助成事業 基盤研究(C)  基盤研究(C)

    鈴木 誠, 程 くん, 依田 浩子, 大城 和文, 朔 敬

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    配分額:3500000円 ( 直接経費:3500000円 )

    1)口腔粘膜上皮異型上皮-扁平上皮癌における組織学的検討:過形成上皮から異型上皮、上皮内癌、浸潤癌の症例で、細胞外基質分子パールカンの局在と遺伝子発現を、免疫およびハイブリッド組織化学で検索したところ、上皮異型性が高度になるにつれて上皮細胞のパールカン遺伝子発現レベルが増強し、細胞間にパールカンが蓄積したが、浸潤癌では癌細胞間隙の沈着は消失して間質に移動した。よって、上皮細胞増殖にはパールカンが必要とされ、上皮内病変では上皮細胞が自給し、浸潤後は間質細胞に依存することが判明した。
    2)パールカントランスジェニックマウスをもちいた遺伝子過剰発現系での解析:パールカン上皮細胞過剰発現系トランスジェニックマウス(TG)の口腔粘膜および歯胚の上皮組織につい発育分化,形態形成について観察したところ、口腔粘膜上皮はやや肥厚して基底膜も強調され、皮膚付属器の密度が上昇する傾向があった。歯肉接合上皮の創傷治癒実験を試みたところ、TGでは、潰瘍部の上皮化が対照に比較して早く、厚く再生される傾向があった。よって、パールカンが上皮性組織の発育再生に重要な調節因子としての役割をはたしていることが示唆された。
    3)上皮層内リンパ球遊走の細胞間基質配置の関連に関する解析:ヒト末梢血リンパ球をPHA刺激で幼若化させると、CD3+CD4+CD8+リンパ球がパールカンほかの細胞外基質およびインテグリン分子の遺伝子発現と蛋白質産生が確認された。したがって、上皮内遊走細胞としてのT細胞には上皮細胞間隙の上皮由来細胞外基質とともに自らの産生する細胞外基質を利用して上皮層内を遊走する可能性が示唆された。
    [総括]、口腔粘膜上皮層内には扁平上皮細胞由来の細胞外基質が細胞間に配置され、発癌または再生あるいは炎症細胞遊走などに上皮組織の生命現象において重要な役割をはたしている可能性がしめされたので、今後は上皮内細胞外基質分子の機能的解析をすすめ、上皮内基質の概念の確立にむけて研究を展開していきたい。

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  • 免疫担当細胞による細胞外基質分子の生合成とその意義-リンパ球・マクロファージの遊走機構基盤と間質改造現象への貢献-

    研究課題/領域番号:15659434  2003年 - 2004年

    日本学術振興会  科学研究費助成事業 萌芽研究  萌芽研究

    朔 敬, 程 くん, 依田 浩子, 大城 和文

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    配分額:3000000円 ( 直接経費:3000000円 )

    1)RT-PCRによる細胞外基質蛋白質の遺伝子発現レベルの検討:培養末梢血リンパ球cDNA試料を、PCR法によって、パールカン、テネイシン、ファイブロネクチン、I・III・IV型コラゲン、ラミニンほか計8種の細胞外基質分子遺伝子を増幅し、アガロースゲル泳動法によって産物を検討した。その結果、PHAほかの活性化刺激によって、正常末梢血リンパ球に細胞外基質分子産生能が誘導されることが判明した。
    2)リンパ球サブタイプにおける細胞外基質分子遺伝子発現:末梢血試料では、T細胞・B細胞に分離して、ECM分子の発現レベルをRT-PCR法と蛍光抗体法で決定したところ、ECM産生細胞は主としてCD3+で、CD4+およびCD8+をふくんでいた。
    3)リンパ球およびマクロファージによる細胞外基質分子産生の蛋白質レベルの検討:培養リンパ球・マクロファージをS35-メチオニンで標識し、上記の各ECM分子とインテグリン各鎖の抗体によって免疫沈降し、SDS-PAGE-フルオログラフィ法または免疫ブロット法で各分子の生合成を経時的に決定したところ、ECM分子は大部分が細胞内に局在し、一部細胞表面に捕捉されていた。
    4)ヒト各種病変におけるリンパ球による細胞外基質発現:ヒト口腔粘膜病変と悪性リンパ腫の病理検査試料をもちいて免疫組織化学法とISH法をおこない、病的環境におけるリンパ球系細胞においてもECM分子の発現されていることを明らかにした。
    5)実験結果評価と研究総括:以上の結果より、リンパ球・マクロファージに細胞外基質産生能があることが明らかになり、遊走ならびに肉芽組織あるいは腫瘍間質の基質合成への関与かの可能性が示唆された。今後は、リンパ球系細胞による細胞外基質産生の機能的な側面を詳細に検討し、免疫機構実現のためのインフラストラクチャを解明していきたい。

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  • 歯胚エナメル器における基底膜型ヘパラン硫酸プロテオグリカン・パールカンの役割

    研究課題/領域番号:15791038  2003年 - 2004年

    日本学術振興会  科学研究費助成事業 若手研究(B)  若手研究(B)

    依田 浩子

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    配分額:3600000円 ( 直接経費:3600000円 )

    今年度は、前年度に作製したパールカン上皮細胞過剰発現系トランスジェニックマウス(Tg)の歯胚組織について、とくにエナメル器に着目して組織学的変化を検索した。まず、胎生期から生後の各歯胚発育段階の野生型マウスおよびTg頭部組織のPFA固定パラフィン連続切片を作製し、パールカンおよび各種細胞外基質と増殖因子の免疫組織化学的検索をおこなった。その結果、パールカン蛋白質はケラチン5に一致した局在をしめし、発現鐘状期(胎生18日)のTg臼歯歯胚エナメル器では、歯堤上皮索の肥大と星状網の細胞間隙の拡大が著明で、同部にはパールカンが高度に沈着していた。さらに歯乳頭細胞密度も減少していた。歯冠形成期(生後1日)では、エナメル器内への血管侵入が減少して星状網容積が保持されており、歯冠形態の鈍縁化をきたし、象牙芽細胞の不整列も確認された。したがって、パールカンは歯胚エナメル器細胞の分化と歯冠部形態の誘導に重要な役割をはたし、さらに象牙芽細胞の分化にも関与していることが示唆された。次に、胎生18日、生後1日および生後7日の下顎第一臼歯歯胚組織よりRNAを抽出し、RT-PCR法にて発現遺伝子の差異について検索した。その結果、生後1日齢歯胚において、塩基性線維芽細胞増殖因子(bFGF)、トランスフォーミング成長因子β1(TGF-β1)などの各種増殖因子の軽度発現上昇が確認された。したがって、パールカンはこれら増殖因子を時期特異的に発現調節することによって、歯胚エナメル器の構築ならびに歯胚形成に重要な役割を果たしていることがあきらかとなった(裏面研究発表1,5)。
    以上、前年度および今年度の研究結果より、上皮細胞が産生する細胞外基質分子・パールカンが、歯胚ならびに各種上皮組織(毛、皮膚、唾液腺等)の形態形成や恒常性維持に果たす役割の一部が解明され、今後の再生医療の発展にも新たな研究展望がえられた。

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  • 口腔癌細胞-間質細胞の相互応答による腫瘍間質誘導の分子機構

    研究課題/領域番号:14370581  2002年 - 2004年

    日本学術振興会  科学研究費助成事業 基盤研究(B)  基盤研究(B)

    朔 敬, 程 くん, 依田 浩子, 大城 和文, 鈴木 誠

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    配分額:15000000円 ( 直接経費:15000000円 )

    口腔癌浸潤にともなう間質誘導の分子機構は未解明であったので、間質の主要構造である細胞外基質(ECM)分子を基軸に実質癌細胞と間質線維芽細胞との間での遺伝子発現から蛋白質生合成までを試験管内および生体組織内で比較検討した。
    ヒト口腔扁平上皮癌由来細胞系ZK-1およびヒト間質線維芽細胞OF-1との間接および直性共培養法の条件で、それぞれの細胞のECM分子産生レベルをRT-PCR法および蛍光抗体法により、遺伝子ならびに蛋白質レベルで確認した。直接共培養実験では、マイクロディセクション法により二種の細胞を選択的に分離した。その結果、共培養実験では、1)総体的にECM分子産生量が上昇すること、2)ZK-1細胞はOF-1細胞との共培養によりそのECM産生レベルが低下することがしめされた。したがって、癌浸潤によって誘導される腫瘍性間質は間質在住の線維芽細胞により産生されることが明らかとなった。
    つぎに、生体内で上皮内癌のように浸潤性を獲得していない段階から浸潤癌に変化する過程で、ECMの産生はどのように変化するのかを病理組織標本上で、パールカンほかのECM分子に対する抗体を用いた酵素抗体法、RNAプローブによるin-situハイブリダイゼーションを実施したところ、ECM分子は浸潤前は上皮層内に、浸潤後は間質空間にそれぞれ局在し、その産生担当細胞も浸潤開始の前後で癌細胞から線維芽細胞へと転換することが判明し、試験管内実験の結果に対応していた。
    そこで、癌の浸潤とは間質誘導と同意語であるという概念を提唱するとともに、実質細胞から間質細胞に間質誘導の役割が転換する現象を間質誘導のスイッチング現象と名付けた。この概念は今後その詳細な遺伝子発現制御機序を解析する作業の仮説となるとともに、病理組織学的診断においても上皮内癌と浸潤癌の鑑別にもきわめて重要となった。

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  • 口腔癌における転移形質の特定とその遺伝子発現の多様性

    研究課題/領域番号:14571728  2002年 - 2003年

    日本学術振興会  科学研究費助成事業 基盤研究(C)  基盤研究(C)

    程 くん, 朔 敬, 大城 和文, 依田 浩子, 鈴木 誠

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    配分額:3000000円 ( 直接経費:3000000円 )

    1)DNAチップマイクロアレイ法による転移性細胞に特異的遺伝子発現様式の解析:ヒト唾液腺腺様嚢胞癌細胞ACC2、ACC3細胞、および高転移能を有するACCM細胞、舌扁平上皮癌細胞ZK-1、ZK-2細胞、および高転移能を有するMK-1細胞について、それらの発現する遺伝子を解析するため、それぞれ、周密化直前の段階で、全RNAを抽出し、mRNAを得た。これを試料としてDNAマイクロアレイチップによって解析をおこなった。その結果、高転移性細胞株には特異的にIV型コラゲン等の細胞外基質(ECM)分子およびインテグリン等のECM膜受容体分子の両遺伝子発現が低下し、そのかわりMMP、FGF7等のECM分解酵素ならびに細胞増殖細胞周期に関わる遺伝子発現が亢進していた。したがって、癌細胞の転移活動性は遺伝子レベルで制御されていることが示唆された。さらに、これらが蛋白質レベルでも発現低下・上昇してしているかどうかを蛍光抗体法で検討したところ、同様の傾向がえられた。
    2)転移能の異なる口腔癌培養細胞系におけるECM分子とその分解酵素の経時的発現変動の比較検討:上記1)項の結果から、転移能を規定する重要な遺伝子が細胞外基質代謝に関することもあることが判明したので、上記ACC2、ACCM細胞について、経時的にそれらの遺伝子発現を、蛍光抗体法とRT-PCR法、さらにISH法によって検討し、酵素については免疫ブロット法とザイモグラフィ法によって蛋白質発現と活性を検討した。その結果、高転移性細胞ではファイブロネクチン等の細胞外基質は概して高発現し、MMP9/MMP1が特異的に亢進していた。一方低転移性細胞ではMMP2/MMP7の発現が上昇しており、細胞外基質代謝はその分子種特異性が高いことが示唆された。
    3)免疫・ハイブリッド組織細胞化学的実験:上記解析によって特定された遺伝子について、組織切片上でも特定された遺伝子およびその産物がそれぞれの細胞で対照的発現をしているかどうかを免疫組織化学とISH法によって検討したところ、蛋白質レベルでも遺伝子と同様の発現変動が確認された。
    4)転移形質として決定された遺伝子の発現調整による転移能の制御:特定された遺伝子について、高発現細胞にはRNAi法で遺伝子発現抑制試験をおこなっているが、この実験については今後さらに方法の検討が必要である。
    以上の結果より、口腔癌の転移を制御する遺伝子群は、大略細胞外基質とその代謝、アポトーシスと細胞増殖、さらに細胞骨格に関与するものであることが判明し、これらの遺伝子の発現調節によって口腔癌転移阻止にむけて今後の研究展望が開けたと考えられる。

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  • 遺伝子発現様相に基づく口腔扁平上皮癌の転移性診断法の開発と臨床応用の検討

    研究課題/領域番号:14370664  2002年 - 2003年

    日本学術振興会  科学研究費助成事業 基盤研究(B)  基盤研究(B)

    高木 律男, 永田 昌毅, 星名 秀行, 朔 敬, 藤田 一, 衣田 浩子

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    配分額:12500000円 ( 直接経費:12500000円 )

    これまでに行ったcDNAマイクロアレイによる15症例の結果をU検定、SAM法により解析した。MMP遺伝子群とインテグリン遺伝子群の発現が転移性を反映することが示唆された。国内外の研究協力者とともに口腔扁平上皮癌(OSCC)の臨床検体を収集した。現時点で約140症例の検体が集まり、口腔内の原発部位に分類し解析に用いている。解析法は定量的リアルタイムPCR(R-PCR)による遺伝子発現解析を行っている。これまでにMMPファミリーおよびインヒビター、計14遺伝子の癌組織内発現をR-PCRにより定量し、頚部リンパ節転移のバイオマーカーとしての有用性を検討した。リンパ節転移を有する20例と有しない20例からなる舌扁平上皮癌40症例を用いた比較の結果、MMP-1、MMP-7、MMP-11、MMP-13の遺伝子発現レベル(ACTB比)がリンパ節転移陽性群で有意に高値を示した(Mann-Whitney test, p<0.05)。さらに実用性の高いバイオマーカーを検索するため、MMP/MMPインヒビター比(MMPs/TIMPs or RECK)について検討した。この方式では有意差はMMP-1 or MMP-7/TIMP1 or TIMP2に検出されたのみであったが、臨床的に高転移性と予後不良症例においてこれらが高値を示した。さまざまな細胞から構成されている全腫瘍組織の遺伝子発現定量では採取条件により結果が変動するが、MMP-1、MMP-7遺伝子が示した安定した有意性はそれらの遺伝子のリンパ節転移バイオマーカーとしての臨床的実用性を示唆している。

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  • アジア民族の表在型口腔粘膜癌の発生に関する病理疫学的研究

    研究課題/領域番号:14031208  2002年

    日本学術振興会  科学研究費助成事業 特定領域研究  特定領域研究

    程 クン, 鈴木 誠, 大城 和文, 依田 浩子(米持), 朔 敬

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    配分額:3000000円 ( 直接経費:3000000円 )

    わが国(新潟県、本学の病理検査台帳から)500例以上の口腔粘膜癌を抽出し、その中から、前癌病変としての異型上皮をともなう増殖が基本的に表在性に限局される扁平上皮癌46例を検鏡のうえ抽出した。それと同時に、韓国・中国・東南アジア地域のそれぞれの共同研究者に依頼し、各施設から460例の口腔粘膜癌症例が収集した。各国から生検および手術材料のHE染色標本について共同で再検討し、59例が同様の表在性癌に相当する症例として診断を確定した。また、これら症例について、年齢、性、住所、民族、初診時期、口腔診査、症状、経過、処置、予後、とくに歯科補綴処置について、疫学調査を施行した。その結果、従来異型上皮ないしは上皮内癌あるいは初期浸潤癌までを同一病変内に包含する表在性の扁平上皮癌の存在を確認することができた。それらの表在性癌は辺縁部にかならず特徴的な二相性異型上皮をともない、癌部は特徴的な棘細胞型、基底細胞型、疣贅型の三種の組織型に分類できる基本的には上皮内にとどまる扁平上皮癌であった。この病変は、日本人患者の場合、歯科治療歴との密接な関連があり、女性に多いことが特徴的であったが、対照的に東南アジアの患者は、歯科治療歴との関連はなく、噛みたばこ習慣を有し、男性に多いことが判明した。がん抑制遺伝子P53などの免疫組織化学的には、表在性癌と判断される病変内の異なる異型度の上皮内病変は、浸潤性は獲得していないものの、すでに機能的には癌とみなすべき病変であることが示唆された。したがって、口腔粘膜の表在性癌は他臓器とは異なり高分化で従来は診断困難でみのがされてきていることが示唆され、本研究によって口腔粘膜扁平上皮癌の病理組織学的診断基準を新たにする展望がえられた。マイクロディセクション法による遺伝子解析は現在進行中である。

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  • 歯胚発育障害における基底膜型ヘパラン硫酸プロテオグリカンの役割

    2001年4月 - 2003年3月

    日本学術振興会  若手研究B 

    依田 浩子

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    担当区分:研究代表者  資金種別:競争的資金

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  • 東アジア地域の口腔癌における癌関連遺伝子の多様性解析

    研究課題/領域番号:13576025  2001年 - 2003年

    日本学術振興会  科学研究費助成事業 基盤研究(B)  基盤研究(B)

    程 くん, 大城 和文, 鈴木 誠, 朔 敬, 宮崎 秀夫, 依田 浩子

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    配分額:13500000円 ( 直接経費:13500000円 )

    (1)症例収集:
    口腔癌およびその前癌病変症例を、中国上海第二医科大学、四川大学、スリランカ、バングラデェシュおよびインドの複数の協力者によってそれぞれの地域の症例が抽出された。これらの症例については、組織学的に800例の扁平上皮癌のなかに128例の非浸潤性表在性扁平上皮癌をみいだした。日本人患者症例では、本学の扁平上皮癌680例のなかに82例の表在性癌をみいだした。
    (2)臨床病理学的検討:
    口腔癌の患者の臨床的事項、歯科補綴処置および嗜好習慣について調査した。表在性癌は日本人症例では、高齢の女性、舌・歯肉・頬粘膜と多発性で、補綴治療との関連が示唆された。アジア諸国の患者では、逆に男性に多く、年齢に性差はなく、噛みタバコ習慣を有するもので、主に頬粘膜、歯肉に発生していた。病理組織学的には、特徴的な二層性異型上皮をともなう表在性癌が地域に依存せず共通して存在することが明らかになった。
    (3)口腔粘膜表在癌ワークショップの開催:
    平成14年8月にシンガポールで第11回国際口腔病理学会が開催されたのに合わせて、同学会に集まった海外の共同研究者のほか、英国ロンドン大学のモーガン教授、オデル教授ら世界の指導的口腔病理学者によびかけて口腔粘膜表在性癌に関するワークショップを実施し、研究者相互の表在性癌の共通認識がえられるように努力した。
    (4)組織化学的実験:
    各国で収集しえた症例のパラフィンブロックより、連続切片を作製して、免疫およびハイブリッド粗織化学によって検索し、上皮中間層アポトーシスによって二層性が生じ、上皮内浸潤リンパ球のアポトーシス関連分画優位とアポトーシス関連分子の上皮細胞内発現が確認された。さらに口腔癌の背景としての口腔粘膜下線維症の進行と細胞外基質分子発現を対応させた。
    (5)分子生物学的実験:
    同様にパラフィン切片から、マイクロディセクション法により上皮組織を切り出し、DNA抽出・PCR増幅により主としてp53遺伝子を検索したところ、コドン249ほかの特徴的点突然変異が上皮内癌に症例をこえて共通にみられることが判明した。リンパ上皮性癌ではEBVのLMP1遺伝子に症例間で共通した変異があることが判明したので、その転写活性を検討した。
    したがって、表在性癌は民族地域習慣をこえて、共通の遺伝子変化がその発症に寄与している可能性があることが示唆された。

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  • 口腔癌細胞と細胞外基質分子のクロストーク制御による新しい抗がん戦略

    研究課題/領域番号:13557157  2001年 - 2003年

    日本学術振興会  科学研究費助成事業 基盤研究(B)  基盤研究(B)

    朔 敬, 程 くん, 依田 浩子, 大城 和文, 鈴木 誠, 中島 元夫

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    配分額:14100000円 ( 直接経費:14100000円 )

    (1)細胞培養:
    ヒト舌扁平上皮癌由来ZK-1細胞・MK-1細胞(高転移性)、あるいは唾液腺腺様嚢胞癌由来ACC3細胞およびACCM細胞(高転移性)、さらにヒトプロゴノーマ組織由来間質線維芽細胞OF-1を維持して、細胞外基質ECMの細胞認識機構阻害の抗がん効果への可能性を検討するために以下の実験をおこなった。
    (2)スラミンによるヒト由来口腔癌細胞の抑制効果:
    そのシグナルスラミン存在下で上記癌細胞を培養して、メタボリックラベリング法で検討したところ、インテグリン分子の細胞膜発現がFAK分子発現低下によって阻害されることライソゾーム酵素阻害によって、細胞外基質合成が見かけ上上昇するが、これは細胞によるECM捕捉障害で、このために細胞抑制が生じていることが判明した。
    (3)口腔癌細胞と間質細胞との共培養実験:
    上記細胞に間質線維芽細胞をくわえて間接・直接接触環境下で共培養をおこなった。間接共培養ではトランスウェルで分取し、直接共培養ではレーザユニットを装着した顕微鏡下で二種細胞群の選択的に回収して、RT-PCR法によって遺伝子発現レベルの経時的変化を決定した。共培養下では扁平上皮癌細胞の増殖は強調され、ECM生合成が間質細胞で増強される傾向が明らかとなった。
    (4)スラミンによるヒト由来口腔癌細胞の抑制効果:
    スラミン存在下で上記癌細胞を培養して、メタボリックラベリング法で検討したところ、インテグリン分子の細胞膜発現がFAK分子発現低下によって阻害されることライソゾーム酵素阻害によって、細胞外基質合成が見かけ上上昇するが、これは細胞によるECM捕捉障害で、このために細胞抑制が生じていることが判明した。
    (5)DNAマイクロアレイ実験:
    スラミン添加条件でマイクロアレイ法をおこない、遺伝子発現の差異を検討したところ、高転移性細胞では、細胞外基質分子産生が少なく、その受容体発現も低レベルであった。さらに細胞外基質分解酵素群が高いのに対し同酵素阻害因子は低い傾向があり、アポトーシス関連遺伝子は概ね高発現していた。スラミン添加群で有意にリン酸化関連遺伝子群の発現抑制がみとめられ、細胞内刺激伝達経路の障害もスラミンによる接着抑制現象に関与することが示唆された。
    以上の結果より、口腔癌細胞の増殖には細胞外基質とのクロストークが重要で、その阻害は抗癌作用となることが判明したので、細胞外基質を機軸とした臨床応用の展望がひらかれた。

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  • 歯胚発育障害における基底膜型ヘパラン硫酸プロテオグリカンの役割

    研究課題/領域番号:13771071  2001年 - 2002年

    日本学術振興会  科学研究費助成事業 若手研究(B)  若手研究(B)

    依田 浩子

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    配分額:2000000円 ( 直接経費:2000000円 )

    今年度は前年に引き続き、正常歯胚組織の発育過程におけるin vivoでの基底膜型ヘパラン硫酸プロテオグリカン・パールカン(HSPG)の局在を明らかにする目的で,各歯胚発育段階のマウス下顎第一臼歯歯胚(胎生11,13,15,17日齢,生後1,6,10,12,28日齢)について,パラフィン連続切片をもちいて,HSPGコア蛋白質の局在およびHSPG遺伝子発現を免疫組織化学的およびin-situハイブリダイゼーション法にて検索した。その結果,HSPGコア蛋白質は,エナメル器および歯乳頭組織に局在し,とくに,エナメル髄星状網細胞の細胞間隙にきわめて豊富であった。鐘状期歯胚では,エナメル基質形成開始期に限局して,内エナメル芽細胞の細胞基底側および側面の細胞間隙にHSPG免疫陽性の小胞状拡張が出現し,周囲の内エナメル髄細胞にHSPG遺伝子発現がみられた。同時に,象牙芽細胞にもHSPG遺伝子発現が強く認められた。したがって,HSPGがそれらの細胞分化あるいはエナメル髄内の拡散による物質輸送の担体としてエナメル質・象牙質基質合成に関与している可能性が示唆された(裏面研究発表2-4)。
    また,歯胚組織由来とされるエナメル上皮腫においても,エナメル髄様の腫瘍胞巣内にHSPGが特異的高濃度に局在するとともに,腫瘍胞巣浸潤先端部でとくに遺伝子発現が強調されたので,上皮性腫瘍細胞の増殖や浸潤を制御している可能性が示唆された(研究発表1)。
    ついで,歯胚の各構成細胞でのHSPGコア蛋白質の生合成を確認する目的で,歯小嚢・歯乳頭・エナメル髄細胞の初代培養システムを確立し,蛍光抗体法および免疫沈降法,さらにRT-PCR法によって検討したところ,すべての細胞種においてHSPGの蛋白質およびmRNAレベルでの発現が確認された(研究発表4)。
    最後にHSPGの関与する歯胚発育障害機構を解明する目的で,アンチセンスHSPGオリゴヌクレオチド添加・非添加下にて歯胚器官培養をおこなった。アンチセンス添加群の培養歯胚紐織では,エナメル器の発育および象牙芽細胞分化が不良であることが確認されており,HSPGがエナメル芽細胞および象牙芽細胞分化に重要な役割をはたしていることがin vitroでも明らかになった。

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  • 口腔粘膜上皮層内に細胞外基質は存在するか

    研究課題/領域番号:13877303  2001年 - 2002年

    日本学術振興会  科学研究費助成事業 萌芽研究  萌芽研究

    朔 敬, 大城 和文, 依田 浩子(米持), 程 くん

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    配分額:1700000円 ( 直接経費:1700000円 )

    (1)正常口腔粘膜ならびに口腔粘膜異型上皮・扁平上皮癌病変における細胞外基質発現:病理組織学的に上皮の形態を正常、過形成上皮、異型上皮、口腔粘膜癌に区分し、ついで、免疫組織化学とハイブリッド組織化学によって基底膜型ヘパラン硫酸プロテオグリカンを中心に、テネイシン、ファイブロネクチン等の細胞外基質およびヘパラン硫酸鎖の局在と遺伝子発現を検討したところ、各分子が上皮層内に発現していることを確認した。正常では、傍基底細胞層を中心に限局していたのが、異型上皮では基底細胞から棘細胞上層まで発現が広がった。しかし、浸潤性癌胞巣内には発現が減弱して間質優位に発現の場が変換したので、浸潤性を獲得しない段階では間質の誘導が不可能なため腫瘍実質細胞自身が間質としての細胞外基質分子を産生沈着し、物質輸送の担体として供している可能性が示唆された。ヘパラン硫酸鎖は、ヘパラン硫酸プロテオグリカンのパールカンコア蛋白質とは異なり、異型上皮から浸潤癌ではその局在が消失したので、両者が同様な代謝経過をとらないことが判明した。
    (2)口腔粘膜病変におけるヘパラナーゼの発現:上記(1)項でヘパラン硫酸鎖とヘパラン硫酸プロテオグリカンのパールカンコア蛋白質とは異なる代謝経過をとることが判明したので、その機序をさぐるために、ヘパラナーゼの発現を検討したところ、ヘパラナーゼは異型上皮の程度が上昇するのと同期してその発現が亢進したので、上皮細胞自身がヘパラン硫酸プロテオグリカンのヘパラン硫酸鎖を消化してコア蛋白質のみを細胞間に沈着している可能性が明らかとなった。
    (3)リンパ球による細胞外基質発現:ヒト末梢血リンパ球をパーコール法によって分離し、PHA刺激により幼若化させたのちに、PCR法、蛍光抗体法、免役沈降法により、パールカンをはじめとする細胞外基質の発現について各分子の発現を確認しえた。したがって、リンパ球は細胞一般の遊走機構と同様にこれらの細胞外基質をみずから産生してそれを遊走のよりどころとしている可能性がしめされた。昨年までに明らかになった上皮層内の浸潤リンパ球の細胞外基質発現現象を合わせ考察すると、非異型上皮性病変では、上皮内を遊走するリンパ球は基質をみずから産生しながら移動を可能としていることが示唆された。

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  • 歯胚発育障害における基底膜型ヘパラン硫酸プロテオグリカンの役割

    2000年4月 - 2001年3月

    日本学術振興会  奨励研究A 

    依田 浩子

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    担当区分:研究代表者  資金種別:競争的資金

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  • EBウイルス関連唾液腺リンパ上皮腫細胞に関する分子病理学的研究

    研究課題/領域番号:12576024  2000年 - 2002年

    日本学術振興会  科学研究費助成事業 基盤研究(B)  基盤研究(B)

    朔 敬, 鈴木 誠, 大城 和文, 程 くん, 依田 浩子

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    配分額:15200000円 ( 直接経費:15200000円 )

    (1)症例収集・EBV遺伝子発現検定実験:中国・韓国・ロシアより収集しえた唾液腺リンパ上皮性癌(LEC)症例は合計180例の組織切片について、免疫組織学的にEBVの遺伝子のひとつLMP-1の発現を検討した結果、約50%の症例で陽性反応がえられ、組織保存性からほぼ全例での同遺伝子発現が推定された。
    (2)ウィルス解析実験:(1)項のDNA標品をPCR法によってLMP-1遺伝子を増幅し、40例についてはC末端、12例については全領域の塩基配列を決定した。その結果、従来強調されたC末端の30塩基欠失は同遺伝子の地理的な多様性のひとつに過ぎず、むしろ細胞膜貫通領域ほかに新たにみいだされた変異ないしは多様性が発癌機構に関与している可能性がしめされた。さらに、20例についてはLMP-1遺伝子のプロモータ領域の塩基配列を決定した。その結果、鼻咽頭LEC由来のCAO系と67%が類似する34種の変異が全例に共通してみられた。これらの変異は転写因子認識部位でみられたので、プロモータ機能の低下が生じていることも示唆された。
    (3)EBVのリンパ上皮腫細胞への感染経路の解析実験:マイクロディセクション法とPCR法をもちいて、リンパ上皮腫組織上でウィルス感染経路を検討し、CD21の関与のないこと、SC-lgAのトランスサイトーシスは否定できないこと、マクロファージがその感染と代謝に関与していることがしめされた。
    (4)NFkB活性化定量実験:(2)でえたLMP1全長塩基配列を発現ベクターにくみこみ、293細胞にトランスフェクトしてNFkB活性を検定したところ著明な増強がみられたが、同時に細胞増殖抑制もしめした。プロトタイプB95-8やCAOも同様であったので、LMP1変異の発癌性に関してはさらに検討が必要である。
    (5)培養細胞による実験:中国側共同研究者の上海第二医科大学病院で外科的に切除された唾液腺リンパ上皮腫5症例から培養系に移すことを試みてきたが、3年の研究期間後に初代培養をへて増殖を続ける細胞の単離に成功した。これらの細胞にはEBV遺伝子および同遺伝子産物を確認し、EBV感染が維持されていることが判明した。今後も培養方法を改良して株化につとめる計画である。
    総括:以上の結果、唾液腺リンパ上皮性癌に感染したEBV側の遺伝子変異情報には大きな新知見がえられた。今後LEC感染EBVのがん原遺伝子の機能的解析をすすめることによって、同癌腫の発癌機構に関して新たな研究が展開されうる可能性が開かれたことはきわめて有意義であった。

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  • DNAマイクロアレイ法を用いた遺伝子発現解析による新しい口腔癌の診断法の開発

    研究課題/領域番号:12671929  2000年 - 2001年

    日本学術振興会  科学研究費助成事業 基盤研究(C)  基盤研究(C)

    永田 昌毅, 星名 秀行, 朔 敬, 高木 律男, 藤田 一, 依田 浩子(米持 浩子)

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    配分額:3500000円 ( 直接経費:3500000円 )

    口腔扁平上皮癌(OSCC)の分子診断技術の閉発を目的に、約500種の癌関連遺伝子を載せたマイクロアレイによる遺伝子発現解析を行った。癌組織間あるいは計測間の偏りを排除するために、分析した全15腫瘍において正常粘膜に対する発現量比が減少または増加した遺伝子を選定した。遺伝子発現の一様な減少はRetinoic acid receptor gamma、ケラチンfamily分子とdesmosome構成分子群などにみられた。一方で増加はMMPs, uPAなど細胞外基質分解酵素系とTenascin C, Fibronectin1などの細胞外基質(ECM)、MIG、IP-10、STAT1、BIGH3など増殖因子の刺激伝達に関係する遺伝子に見出された。クラスター解析の結果でもこれらの遺伝子産物には発現様式の類似性が見出された。概して、OSCCは上皮構造の喪失、盛んな組織破壊と癌間質形成、細胞刺激伝達系の乱れを示していた。リンパ節転移の有無による群間比較では、転移を有する腫瘍でMMPs、uPA、CD44、Integrin a3、Paxillinの発現増加とCD9、IGFBP2の発現減少がみいだされ、リンパ節転移形成にECM分解酵素群とともに細胞-ECM接着を介した刺激伝達の関与が示唆された。免疫組織学的染色においてMMP1、MMP3、uPAは腫瘍間質内の炎症性細胞、脈管内皮細胞、ECMに局在した。特に炎症性細胞浸潤内のエオジン好性単核紬胞にそれらの強い陽性所見がみられ、その周囲でコラーゲン繊維の破壊像と脈管の新生像が確認された。この組織学的所見は遺伝子発現解析で予想された分子間の共調的発現と機能的共役性を裏付けている。特にMMP1はリンパ節転移形成と強い相関(U=0、p=0.001)を示し、単独でリンパ節転移の鋭敏なマーカーになり得ることが示唆された。今回の雑多な細胞成分からなる、OSCC全組織の遺伝子発現様相を対象にしたが、共通の発現傾向の抽出、クラスター解析、臨床所見と関連性および分子の組織内局在の検討によって、診断学的に有用な遺伝子発現の変化を同定できた。

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  • 唾液腺腫瘍に共通するp53遺伝子変異様式の決定とその意義

    研究課題/領域番号:12671766  2000年 - 2001年

    日本学術振興会  科学研究費助成事業 基盤研究(C)  基盤研究(C)

    程 くん, 依田 浩子(米持 浩子), 朔 敬, 大城 和文

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    配分額:3500000円 ( 直接経費:3500000円 )

    われわれは、唾液腺の悪性リンパ上皮腫にきわめて特異的にEBVの感染があることをみいだした。そこで、EBV感染がこの癌腫発生のどの段階に関与しているのかを検索するために、癌関連遺伝子変異状況を解析したいと考え、まずもっともヒト腫瘍で検索データの蓄積されているp53遺伝子について検索することを計画した。同時に、放射線被爆との関連性が明らかにされた粘表皮癌やワルチン腫瘍その他の唾液腺腫瘍についても同様に検索し、腫瘍間の異同につて検討することにした。
    具体的には、これまでわれわれが収集してきた唾液腺腫瘍外科摘出材料のパラフィン包埋切片よりDNAを抽出して、p53遺伝子のホットスポットの集中するエクソン5〜7をPCR法で増幅し、直接シークエンス法による変異様式を解析することを計画したのである。この着想には、われわれが世界に例のない極めて多数のリンパ上皮腫症例のパラフィン包埋組織切片よりDNAを抽出して、ウィルス感染をPCR法増幅により検知可能にする研究技法を開発してきたところにあった。これらの技術を応用することによって、p53遺伝子についても解析が可能という展望がえられたわけである。その結果、リンパ上皮腫ではもっともp53遺伝子の広範かつ重篤な突然変異が症例間で共通した部位に生じていることが判明した。そのほかの腫瘍ではp53遺伝子変異頻度は少なくその程度も軽微であったものの、腫瘍種によって症例をこえて変異点が共通であることに注目された。さらに、それらの変異の一部は腫瘍種をこえて共通する部位に生ずる傾向があったことも新知見であった。
    以上の結果より、唾液腺腫瘍の発癌にはp53遺伝子の特定領域の変異が何らかの関与をしていること、したがって、ウィルス感染、放射線被曝、あるいはそれ以外の未知の要因による唾液腺腫瘍発生機序のいずれでも同遺伝子変異が重要な役割を果たしていることが明らかとなった。今後はこれら変異の生成機序またはその変異による遺伝子カスケードがどのように変化するかを検討していく予定である。

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  • 歯胚発育障害における基底膜型ヘパラン硫酸プロテオグリカンの役割

    研究課題/領域番号:12771080  2000年

    日本学術振興会  科学研究費助成事業 奨励研究(A)  奨励研究(A)

    依田 浩子

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    配分額:1400000円 ( 直接経費:1400000円 )

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  • 唾液腺前癌病変の分子病理学的研究

    研究課題/領域番号:11671864  1999年 - 2000年

    日本学術振興会  科学研究費助成事業 基盤研究(C)  基盤研究(C)

    鈴木 誠, 依田 浩子, 大城 和文, 程 くん, 木村 信, 朔 敬

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    配分額:3700000円 ( 直接経費:3700000円 )

    唾液腺癌腫では口腔粘膜癌と異なり、前癌病変があることは考慮されることはなかった。そこで、本研究では唾液腺腫瘍の発生要因の解明のために、唾液腺前癌病変の疾患概念を明確にすることを目的とした。
    はじめに、もっとも高頻度な唾液腺良性腫瘍の多形性腺腫に注目して種々の検討を行なった。まず、多形性腺腫の適切な診断を下すための条件として、口蓋生検部位と診断成功率を検索した結果、腫瘍の後方・口蓋正中側からの生検は失敗率が高く、前方・歯肉側からのアプローチで的確に腫瘍組織を採取できていることが判明した。
    つぎに、多形性腺腫の被膜浸潤様式を病理組織学的に検討した結果、被膜侵襲にはその程度が軽度な局所膨張型から浸潤性の高い被膜内浸潤型、ならびに被膜断裂型の三型があり、検索したすべての症例においてこれら三型のいずれかの被膜侵襲をともなっていることが判明した。したがって、多形性腺腫は増殖は比較的緩慢で良性腫瘍とみなされているものの、被膜侵襲や乏血管性基質等の特異的性格から、準悪性あるいは前癌性の病変として臨床的に対応する必要があるとかんがえられた。
    さらに、多形性腺腫内に顕性癌の前段階とみなすべき病巣、すなわち大型異型細胞集族を巣状癌と判断し、巣状癌を中心にp53遺伝子のエクソン5-7について塩基配列を解析したところ、多形性腺腫症例に共通する明らかな遺伝子変異はみいだされなかった。しかし、免疫組織化学的にはp53遺伝子産物の過剰発現が確認されたことより、さらにパラフィン切片から異型細胞を選択的してDNAを抽出するなど感度を向上させる必要が示唆された。
    つぎに粘表皮癌およびワルチン腫瘍において同様に検索したところ、ワルチン腫瘍ではp53遺伝子蛋白質陽性およびその異常はみとめられなかった。粘表皮癌では、異型細胞ほどp53遺伝子産物の過剰発現傾向があり、p53遺伝子の変異も高頻度にみられた。以上の結果により、良性腫瘍とされているものの多形性腺腫には粘表皮癌同様の異型細胞においてp53遺伝子異常が存在することが明らかとなった。
    したがって、多形性腺腫は前癌病変として、あるいは腺腫-腺癌シークエンスによる唾液腺癌の発生機序として重要な病変であることが判明した。

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  • 唾液腺多形性腺腫の血管に乏しい間質の分子病理学的特性とCT造影性

    研究課題/領域番号:11877330  1999年

    日本学術振興会  科学研究費助成事業 萌芽的研究  萌芽的研究

    朔 敬, 林 孝文, 木村 信, 程 くん, 依田 浩子, 開 祐司

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    配分額:2000000円 ( 直接経費:2000000円 )

    唾液腺多形性腺腫の間質はきわめて多彩であるが、その特徴的な軟骨様・粘液様間質には血管分布が乏しい。その間質の病理組織学的特性と画像診断学上の特性とを対比検討するために以下の実験ならびに臨床データの解析をおこなった。
    唾液腺多形性腺腫70症例、筋上皮腫30症例のフォルマリン固定パラフィン切片とPAP法によってUEA-Iレクチン結合および血管内皮細胞マーカCD31の免疫組織化学的局在から腫瘤の間質および血管分布様式を定量的に対比した。また、軟骨基質の血管新生抑制因子コンドロモデュリン-I(ChM-I)の蛋白質レベルの局在を免疫組織化学的に、遺伝子レベルの発現状況をin-situハイブリダイゼーション(ISH)ならびにRT-PCRによって、腫瘍組織および多形性腺腫由来初代培養細胞について検討した。さらに、高速らせん型CT装置によるCT血管造影像を経時的に撮影し、造影強度計測した。
    この結果、多形性腺腫では、腫瘍の実質細胞によって生合成されたいわゆる軟骨様・粘液様間質は本来の支持組織としての脈管神経をいれた線維性結合組織ではなく、血管分布がきわめて乏しいことが示された。いっぽう、筋上皮腫では、基本的組織構築として、血管豊富な支持組織としての線維性間質が存在し、両腫瘍の血管分布密度には大きな相違があった。これを裏づけるように、多形性腺腫のCT造影は、血管より遅れて開始し、血管消退後もより長く持続し、その造影像は不均一であるのに対し、筋上皮腫は、血管と同調した造影の推移を示した。さらに、多形性腺腫の粘液様あるいは軟骨様間質にはChM-Iが腫瘍細胞とともに基質に局在し、同部の腫瘍細胞にはChM-I遺伝子の発現がみられた。また、多形性腺腫由来の初代培養細胞でも、ChM-Iの発現が蛋白質ならびに遺伝子レベルで確定できた。
    以上の結果より、多形性腺腫の間質には血管新生を抑制する環境があり、乏血管性間質はCT造影性にも反映し、血管分布を多形性腺腫鑑別診断の指標としうることが明らかになった。

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  • 口腔癌細胞の細胞外基質接着阻害による抗腫瘍効果に関する基礎的研究

    研究課題/領域番号:10557170  1998年 - 2000年

    日本学術振興会  科学研究費助成事業 基盤研究(B)  基盤研究(B)

    朔 敬, 鈴木 誠, 依田 浩子(米持 浩子), 程 くん, 中島 元夫, 大城 和文, 木村 信

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    配分額:13700000円 ( 直接経費:13700000円 )

    本研究課題では、細胞接着抑制によって抗腫瘍効果があるかどうかを検討した。ポリスルホン酸化合物スラミンが細胞外基質分子(ECM)とその受容体との相互作用にどのような分子機構で関与するのか、ヒト唾液腺癌由来ACC3細胞について検討することが主たる計画であった。ACC3細胞は種々の細胞外基質を産生するが、なかんずくヘパラン硫酸プロテオグリカン等の基底膜構成成分やファイブロネクチンなどの生合成能が高いことがしられるので、この細胞系にスラミンを添加して培養をおこない、その受容体インテグリン(INT)の発現動態について、免疫沈降法と競合的RT-PCR法で蛋白質およびmRNA発現への影響を検討した。
    その結果、100μMスラミンによってACC3細胞は培養上清中に多量のECM分子を放出した。200μM添加では、細胞の接着・増殖は明らかに阻害されが、RGDペプチド添加によって接着阻害は2.5倍に増強された。1週までの培養では、ACC3細胞は対照群より以上に細胞増殖をつづけ、三層程度まで重層した。蛍光抗体法では、ECMならびにINT分子群は細胞外あるいは細胞表面には局在せず細胞質内にとどまっていたので、分泌されたECM分子はINT不在のため細胞表面すなわち細胞眉に沈着できず、上清中に放出されることが判明した。したがって、スラミンはINT依存性の細胞接着過程のいずれかの段階を阻害するものと示唆された。そこで、免疫ブロット法と競合的RT-PCR法等によってをもちいて検討したところ、INT各分子と共沈する分子量120KDのバンドが欠失することが判明した。そこで、この分子を特定するために、類似の分子量を有する細胞膜裏打ち蛋白質の抗体をもちいて、免疫沈降法ならびにウェスタンブロッティングをおこなった。その結果、この120KDの分子は焦点接触キナーゼ(FAK)であることが特定できた。したがって、FAK不在のためにINT機能抑制が生じ、細胞接着が阻害されている分子機構を解明することができた。
    以上より、スラミンにような薬剤によって細胞膜上の細胞外基質受容体を阻害する機序を解明できたので、その科学的根拠にもとづいて細胞接着抑制による口腔癌細胞増殖抑制という抗腫瘍効果の臨床応用への展望をひらくことができた。

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  • 口腔癌における細胞外基質-細胞膜受容体クロストークの多様性

    研究課題/領域番号:10470379  1998年 - 2000年

    日本学術振興会  科学研究費助成事業 基盤研究(B)  基盤研究(B)

    朔 敬, 依田 浩子, 大城 和文, 程 くん, 木村 信, 織田 公光

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    配分額:12700000円 ( 直接経費:12700000円 )

    ヒト口腔癌由来細胞ACC3、ZK-1ほかの産生するファイブロネクチン(FN)の分子量が血清ならびに線維芽細胞FNに比べて大型であることから、その分子解析をしたところ、選択的スプライシングによってED-B/ED-A/IIICS領域が組み込まれた蛋白質であること、さらにN-およびO-結合型オリゴ糖鎖付加が大きくまたシアル酸添加もあるためということが判明した。
    この口腔癌型FNに対して、これらの口腔癌細胞は血清FNにくらべてより高い接着性をしめした。そこで、FNに対する細胞膜受容体であるインテグリン(INT)についても検討したところ、少なくともN-結合型オリゴ糖鎖の添加量が大きいことが判明した。したがって、口腔癌細胞は自ら産生する細胞外基質により強力に接着する細胞生活環境を整えて増殖性を制御していることが示唆された。
    さらに、ヒトHSPGコア蛋白質遺伝子の全領域をカバーするプライマーを設計して、ACC3細胞ほかについてRT-PCR増幅をおこない、選択的スプライシング領域を検出するためにスクリーニングをおこなった。多数の候補遺伝子断片がスクリーニングされたが、現在までのところ確定的な領域を決定できておらず、なお検討中である。
    つぎに、各口腔腫瘍におけるHSPGならびにFN遺伝子の特定領域の発現を組織学的に検索したところ、HSPGおよびFNは腫瘍実質細胞のみならず間質線維芽細胞にも広範に発現していることが判明した。扁平上皮癌と腺様嚢胞癌では、とくにFNのED-B領域は実質細胞に、ED-A領域は間質線維芽細胞にそれぞれ特異的に発現しており、実質間質の役割分担があることが示唆された。腺様嚢胞癌の実質胞巣では小型導管様構造構成細胞にHSPGならびにFNのED-B領域の発現が顕著で大型偽嚢胞構成細胞では減弱しており、偽嚢胞の起源と発育経過が解明された。また、過誤腫では、HSPGおよびFNの局在パタンから真の腫瘍と鑑別できること、炎症性病変では、間質あるいは肉芽組織線維芽細胞とともに再生実質細胞によるHSPGの発現が顕著であった。
    以上の結果から、腫瘍実質の成長とこれにともなって誘導される間質の双方にHSPGおよびFNの発現が重要であること、とくに実質胞巣の形態形成に主導的役割をはたしていること、腫瘍細胞の浸潤性性格にこれらの分子の発現が伴っていることなどが明らかで、これらの分子を介した細胞間クロストーク様式が腫瘍の生物学的性格を規定している可能性さらに肉芽組織形成に大きな役割を果たしていることが示唆された。

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担当経験のある授業科目(researchmap)

  • 人体のしくみ

    機関名:新潟大学

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  • 骨筋学

    機関名:新潟大学

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  • 中枢神経学

    機関名:新潟大学

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  • 人体解剖学実習

    機関名:新潟大学

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  • 基礎科学演習

    機関名:新潟大学

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  • 人体のしくみ

    機関名:新潟大学

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  • 骨筋学

    機関名:新潟大学

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  • 神経解剖学

    機関名:新潟大学

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  • 人体解剖学実習

    機関名:新潟大学

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  • 基礎科学演習

    機関名:新潟大学

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  • 骨筋学

    機関名:新潟大学

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  • 中枢神経学

    機関名:新潟大学

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  • 人体解剖学実習

    機関名:新潟大学

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  • 基礎科学演習

    機関名:新潟大学

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  • 人体のしくみ

    機関名:新潟大学

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担当経験のある授業科目

  • 人体解剖学Ⅱ

    2018年
    -
    現在
    機関名:新潟大学

  • 人体解剖学Ⅰ

    2017年
    -
    現在
    機関名:新潟大学

  • 硬組織形態学演習ⅡB

    2017年
    機関名:新潟大学

  • 硬組織形態学演習ⅠB

    2017年
    機関名:新潟大学

  • 硬組織形態学演習ⅡA

    2017年
    機関名:新潟大学

  • 硬組織形態学演習ⅠA

    2017年
    機関名:新潟大学

  • 中枢神経学

    2012年
    -
    2017年
    機関名:新潟大学

  • 人体のしくみ

    2010年
    -
    現在
    機関名:新潟大学

  • 骨筋学

    2010年
    -
    2017年
    機関名:新潟大学

  • 神経解剖学

    2010年
    -
    2011年
    機関名:新潟大学

  • 人体解剖学実習

    2009年
    -
    現在
    機関名:新潟大学

  • 人体発生学

    2009年
    機関名:新潟大学

  • 基礎歯学コースワーク(歯胚研究入門)

    2009年
    機関名:新潟大学

  • 細胞生物学4

    2009年
    機関名:新潟大学

  • 硬組織微細構築学演習

    2009年
    機関名:新潟大学

  • 口腔組織発生学

    2009年
    機関名:新潟大学

  • 基礎科学演習

    2008年
    -
    2016年
    機関名:新潟大学

  • 病理学総論

    2008年
    機関名:新潟大学

  • 口腔病理学

    2008年
    機関名:新潟大学

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