2024/04/20 更新

写真a

サトウ ノボル
佐藤 昇
SATO Noboru
所属
教育研究院 医歯学系 医学系列 教授
医学部 医学科 教授
医歯学総合研究科 生体機能調節医学専攻 教授
職名
教授
外部リンク

学位

  • 博士(医学) ( 1993年3月   筑波大学 )

研究分野

  • ライフサイエンス / 解剖学

  • ライフサイエンス / 神経形態学

経歴(researchmap)

  • 福島県立医科大学 医学部 医学科 医学部医学科 神経解剖・発生学講座   准教授

      詳細を見る

経歴

  • 新潟大学   医学部 医学科   教授

    2007年4月 - 現在

  • 新潟大学   医歯学総合研究科 生体機能調節医学専攻   教授

    2007年4月 - 現在

学歴

  • 筑波大学   医学研究科   形態系

    - 1993年

      詳細を見る

    国名: 日本国

    researchmap

  • 筑波大学   Graduate School, Division of Medicine

    - 1993年

      詳細を見る

  • 筑波大学   School of Medicine

    - 1989年

      詳細を見る

  • 筑波大学   医学専門学群

    - 1989年

      詳細を見る

    国名: 日本国

    researchmap

所属学協会

 

論文

  • Development of fin-innervating motor neurons after peripheral target removal in medaka fish 査読

    Akina Chiba, Kenichi Soma, Keisuke Watanabe, Hiroshi Nagashima, Noboru Sato

    Developmental Neurobiology   2020年12月

     詳細を見る

    担当区分:責任著者   記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)  

    researchmap

  • Novel concept for the epaxial/hypaxial boundary based on neuronal development. 査読 国際誌

    Hiroshi Nagashima, Daisuke Koga, Satoshi Kusumi, Katsuki Mukaigasa, Hiroyuki Yaginuma, Tatsuo Ushiki, Noboru Sato

    Journal of anatomy   237 ( 3 )   427 - 438   2020年8月

     詳細を見る

    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)  

    Trunk muscles in vertebrates are classified as either dorsal epaxial or ventral hypaxial muscles. Epaxial and hypaxial muscles are defined as muscles innervated by the dorsal and ventral rami of spinal nerves, respectively. Each cluster of spinal motor neurons passing through dorsal rami innervates epaxial muscles, whereas clusters traveling on the ventral rami innervate hypaxial muscles. Herein, we show that some motor neurons exhibiting molecular profiles for epaxial muscles follow a path in the ventral rami. Dorsal deep-shoulder muscles and some body wall muscles are defined as hypaxial due to innervation via the ventral rami, but a part of these ventral rami has the molecular profile of motor neurons that innervate epaxial muscles. Thus, the epaxial and hypaxial boundary cannot be determined simply by the ramification pattern of spinal nerves. We propose that, although muscle innervation occurs via the ventral rami, dorsal deep-shoulder muscles and some body wall muscles represent an intermediate group that lies between epaxial and hypaxial muscles.

    DOI: 10.1111/joa.13219

    PubMed

    researchmap

  • The fornix acts as a permissive corridor for septal neuron migration beyond the diencephalic-telencephalic boundary. 査読 国際誌

    Keisuke Watanabe, Hirohide Takebayashi, Noboru Sato

    Scientific reports   10 ( 1 )   8315 - 8315   2020年5月

     詳細を見る

    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)  

    Neuronal migration is essential for constructing functional neural networks. Two posterior septal (PS) nuclei, the triangular septal nucleus and bed nuclei of the anterior commissure, are involved in fear and anxiety. During development, glutamatergic PS neurons undergo long-distance rostrodorsal migration from the thalamic eminence (TE) of the diencephalon, then settle in the caudalmost telencephalon. However, the developmental behavior of PS neurons and the guidance structures facilitating their migration remain unknown. We previously demonstrated the migration of PS neurons along the fornix, a major efferent pathway from the hippocampal formation. Here, we show that the postcommissural fornix is essential for PS neuron migration which is largely confined to its axonal tract, which grows in the opposite direction as PS neuron migration. Fornical axons reach the TE prior to initiation of PS neuron rostrodorsal migration. Ectopic expression of Semaphorin 3 A in the dorsomedial cortex resulted in defective fornix formation. Furthermore, loss of the postcommissural fornix stalled PS neuron migration resulting in abnormal accumulation near their origin. This suggests that PS neurons utilize the postcommissural fornix as a permissive corridor during migration beyond the diencephalic-telencephalic boundary. This axonal support is essential for the functional organization of the heterogeneous septal nuclear complex.

    DOI: 10.1038/s41598-020-65284-7

    PubMed

    researchmap

  • Development of a mouse nerve-transfer model for brachial plexus injury. 査読

    Hanako Wakatsuki, Minoru Shibata, Ken Matsuda, Noboru Sato

    Biomedical research (Tokyo, Japan)   40 ( 3 )   115 - 123   2019年

     詳細を見る

    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)  

    Nerve transfer involves the use of a portion of a healthy nerve to repair an injured nerve, and the process has been used to alleviate traumatic brachial plexus injuries in humans. Study of the neural mechanisms that occur during nerve transfer, however, requires the establishment of reliable experimental models. In this study, we developed an ulnar-musculocutaneous nerve-transfer model wherein the biceps muscle of a mouse was re-innervated using a donor ulnar nerve. Similar muscle action potentials were detected in both the end-to-end suture of the transected nerve (correctrepair) group and the ulnar-musculocutaneous nerve-transfer group. Also, re-innervated acetylcholine receptor (AChR) clusters and muscle spindles were observed in both procedures. There were fewer re-innervated AChR clusters in the nerve transfer group than in the correct repair group at 4 weeks, but the numbers were equal at 24 weeks following surgery. Thus, our ulnar-musculocutaneous nerve-transfer model allowed physiological and morphological evaluation for re-innervation process in mice and revealed the delay of this process during nerve transfer procedure. This model will provide great opportunities to study regeneration, re-innervation, and functional recovery induced via nerve transfer procedures.

    DOI: 10.2220/biomedres.40.115

    PubMed

    researchmap

  • Diencephalic progenitors contribute to the posterior septum through rostral migration along the hippocampal axonal pathway. 査読 国際誌

    Keisuke Watanabe, Koichiro Irie, Carina Hanashima, Hirohide Takebayashi, Noboru Sato

    Scientific reports   8 ( 1 )   11728 - 11728   2018年8月

     詳細を見る

    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)  

    Septal nuclei are telencephalic structures associated with a variety of brain functions as part of the limbic system. The two posterior septal nuclei, the triangular septal nucleus (TS) and the bed nuclei of the anterior commissure (BAC), are involved in fear and anxiety through their projections to the medial habenular nucleus. However, the development of both the TS and BAC remains unclear. Here, we found a novel caudal origin and putative migratory stream of mouse posterior septal neurons arising from the thalamic eminence (TE), a transient developmental structure at the rostral end of the rodent diencephalon. TE-derived cells, which have glutamatergic identity, migrated rostrally and entered the telencephalic territory by passing beneath the third ventricle. Subsequently, they turned dorsally toward the posterior septum. We also observed that TS and BAC neurons in the postnatal septum were labeled with GFP by in utero electroporation into the TE, suggesting a shared origin. Furthermore, TE-derived septal neurons migrated along the fornix, an efferent pathway from the hippocampus. These results demonstrate that posterior septal neurons have a distinct extratelencephalic origin from other septal nuclei. This heterogeneous origin may contribute to neuronal diversity of the septal nuclear complex.

    DOI: 10.1038/s41598-018-30020-9

    Web of Science

    PubMed

    researchmap

  • Motor neurons with limb-innervating character in the cervical spinal cord are sculpted by apoptosis based on the Hox code in chick embryo. 査読 国際誌

    Katsuki Mukaigasa, Chie Sakuma, Tomoaki Okada, Shunsaku Homma, Takako Shimada, Keiji Nishiyama, Noboru Sato, Hiroyuki Yaginuma

    Development (Cambridge, England)   144 ( 24 )   4645 - 4657   2017年12月

     詳細を見る

    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:COMPANY OF BIOLOGISTS LTD  

    In the developing chick embryo, a certain population of motor neurons (MNs) in the non-limb-innervating cervical spinal cord undergoes apoptosis between embryonic days 4 and 5. However, the characteristics of these apoptotic MNs remain undefined. Here, by examining the spatiotemporal profiles of apoptosis and MN subtype marker expression in normal or apoptosis-inhibited chick embryos, we found that this apoptotic population is distinguishable by Foxp1 expression. When apoptosis was inhibited, the Foxp1+ MNs survived and showed characteristics of lateral motor column (LMC) neurons, which are of a limb-innervating subtype, suggesting that cervical Foxp1+ MNs are the rostral continuation of the LMC. Knockdown and misexpression of Foxp1 did not affect apoptosis progression, but revealed the role of Foxp1 in conferring LMC identity on the cervical MNs. Furthermore, ectopic expression of Hox genes that are normally expressed in the brachial region prevented apoptosis, and directed Foxp1+ MNs to LMC neurons at the cervical level. These results indicate that apoptosis in the cervical spinal cord plays a role in sculpting Foxp1+ MNs committed to LMC neurons, depending on the Hox expression pattern.

    DOI: 10.1242/dev.158873

    Web of Science

    PubMed

    researchmap

  • Developmental origin of the clavicle, and its implications for the evolution of the neck and the paired appendages in vertebrates. 査読 国際誌

    Hiroshi Nagashima, Fumiaki Sugahara, Keisuke Watanabe, Masahiro Shibata, Akina Chiba, Noboru Sato

    Journal of anatomy   229 ( 4 )   536 - 48   2016年10月

     詳細を見る

    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:WILEY  

    In fish, the pectoral appendage is adjacent to the head, but during vertebrate evolution a long neck region emerged via caudal relocation of the pectoral appendage. The pectoral appendage is comprised of endochondral portions, such as the humerus and the scapula, and a dermal portion, such as the clavicle, that contributes to the shoulder girdle. In the search for clues to the mechanism of the caudal relocation of the pectoral appendage, the cell lineage of the rostral lateral plate mesoderm was analyzed in chickens. It was found that, despite the long neck region in chickens, the origin of the clavicle attached to the head mesoderm ranged between 1 and 14 somite levels. Because the pectoral limb bud and the endochondral pectoral appendage developed on 15-20 and 15-24 somite levels, respectively, the clavicle-forming region corresponds to the embryonic neck, which suggests that the relocation would have been executed by the expansion of the source of the clavicle. The rostral portion of the clavicle-forming region overlaps the source of the cucullaris muscle, embraces the pharyngeal arches caudally, and can be experimentally replaced with the head mesoderm to form the cucullaris muscle, which implies that the mesodermal portion could have been the head mesoderm and that the clavicle would have developed at the head/trunk boundary. The link between the head mesoderm and the presumptive clavicle appears to have been the developmental constraint needed to create the evolutionarily conserved musculoskeletal connectivities characterizing the gnathostome neck. In this sense, the dermal girdle of the ganathostomes would represent the wall of the branchial chamber into which the endochondral pectoral appendage appears to have attached since its appearance in evolution.

    DOI: 10.1111/joa.12502

    Web of Science

    PubMed

    researchmap

  • A specific tripeptidyl substrate for tripeptidyl peptidase activity is effectively hydrolyzed by alanyl aminopeptidase/aminopeptidase N/CD13 in the rat kidney

    Masahiro Shibata, Masato Koike, Satoshi Kusumi, Noboru Sato, Yasuo Uchiyama

    Archives of Histology and Cytology   76 ( 1 )   1 - 8   2016年3月

     詳細を見る

    掲載種別:研究論文(学術雑誌)  

    © 2016 by International Society of Histology and Cytology.L-Alanyl-L-alanyl-L-phenylalanine 4-methylcoumaryl-7-amide (AAF-MCA) is one of the classic substrates for use with tripeptidyl peptidases (TPP-I and TPP-II). We have previously clarified the tissue distribution of TPP-I in detail and noted that the protein expression of TPP-I is often incompatible with its enzyme activity. Herein, we describe the unknown peptidase, which could effectively hydrolyze AAF-MCA, in the rat kidney. The peptidase was purified after four chromatography steps, and its enzyme characteristics were elucidated. The peptidase activity was inhibited by amastatin, bestatin, and o-phenanthroline and was also inhibited by zinc and copper ions. The substrate specificity for several monoamino acidic-MCAs revealed that the peptidase had an affinity for alanyl-MCA. The amino terminal amino acid sequence of the peptidase was x-Ala-Pro-x-Leu-Pro-Gly-Ser-Thr-Ser-Ala-Thr-x-x-Ser, where x indicates undetectable amino acid residues, and the antiserum against the peptidase was immunopositive for the brush border of a renal proximal tubule and the small intestine, and the surface membrane of bile canaliculi. These results indicate that the unknown peptidase that hydrolyzed AAF-MCA is the soluble form of aminopeptidase N/CD13, and caution is required when using AAF-MCA as a substrate for tripeptidyl peptidase assays.

    DOI: 10.1679/aohc.76.1

    Scopus

    researchmap

  • Evidence from cyclostomes for complex regionalization of the ancestral vertebrate brain. 査読 国際誌

    Fumiaki Sugahara, Juan Pascual-Anaya, Yasuhiro Oisi, Shigehiro Kuraku, Shin-ichi Aota, Noritaka Adachi, Wataru Takagi, Tamami Hirai, Noboru Sato, Yasunori Murakami, Shigeru Kuratani

    Nature   531 ( 7592 )   97 - 100   2016年3月

     詳細を見る

    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)  

    The vertebrate brain is highly complex, but its evolutionary origin remains elusive. Because of the absence of certain developmental domains generally marked by the expression of regulatory genes, the embryonic brain of the lamprey, a jawless vertebrate, had been regarded as representing a less complex, ancestral state of the vertebrate brain. Specifically, the absence of a Hedgehog- and Nkx2.1-positive domain in the lamprey subpallium was thought to be similar to mouse mutants in which the suppression of Nkx2-1 leads to a loss of the medial ganglionic eminence. Here we show that the brain of the inshore hagfish (Eptatretus burgeri), another cyclostome group, develops domains equivalent to the medial ganglionic eminence and rhombic lip, resembling the gnathostome brain. Moreover, further investigation of lamprey larvae revealed that these domains are also present, ruling out the possibility of convergent evolution between hagfish and gnathostomes. Thus, brain regionalization as seen in crown gnathostomes is not an evolutionary innovation of this group, but dates back to the latest vertebrate ancestor before the divergence of cyclostomes and gnathostomes more than 500 million years ago.

    DOI: 10.1038/nature16518

    Web of Science

    PubMed

    researchmap

  • Endoplasmic Reticulum-Localized Transmembrane Protein Dpy19L1 Is Required for Neurite Outgrowth. 査読 国際誌

    Keisuke Watanabe, Norihisa Bizen, Noboru Sato, Hirohide Takebayashi

    PloS one   11 ( 12 )   e0167985   2016年

     詳細を見る

    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:PUBLIC LIBRARY SCIENCE  

    The endoplasmic reticulum (ER), including the nuclear envelope, is a continuous and intricate membrane-bound organelle responsible for various cellular functions. In neurons, the ER network is found in cell bodies, axons, and dendrites. Recent studies indicate the involvement of the ER network in neuronal development, such as neuronal migration and axonal outgrowth. However, the regulation of neural development by ER-localized proteins is not fully understood. We previously reported that the multi-transmembrane protein Dpy19L1 is required for neuronal migration in the developing mouse cerebral cortex. A Dpy19L family member, Dpy19L2, which is a causative gene for human Globozoospermia, is suggested to act as an anchor of the acrosome to the nuclear envelope. In this study, we found that the patterns of exogenous Dpy19L1 were partially coincident with the ER, including the nuclear envelope in COS-7 cells at the level of the light microscope. The reticular distribution of Dpy19L1 was disrupted by microtubule depolymerization that induces retraction of the ER. Furthermore, Dpy19L1 showed a similar distribution pattern with a ER marker protein in embryonic mouse cortical neurons. Finally, we showed that Dpy19L1 knockdown mediated by siRNA resulted in decreased neurite outgrowth in cultured neurons. These results indicate that transmembrane protein Dpy19L1 is localized to the ER membrane and regulates neurite extension during development.

    DOI: 10.1371/journal.pone.0167985

    Web of Science

    PubMed

    researchmap

  • On the homology of the shoulder girdle in turtles. 査読 国際誌

    Hiroshi Nagashima, Fumiaki Sugahara, Masaki Takechi, Noboru Sato, Shigeru Kuratani

    Journal of experimental zoology. Part B, Molecular and developmental evolution   324 ( 3 )   244 - 54   2015年5月

     詳細を見る

    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:WILEY-BLACKWELL  

    The shoulder girdle in turtles is encapsulated in the shell and has a triradiate morphology. Due to its unique configuration among amniotes, many theories have been proposed about the skeletal identities of the projections for the past two centuries. Although the dorsal ramus represents the scapular blade, the ventral two rami remain uncertain. In particular, the ventrorostral process has been compared to a clavicle, an acromion, and a procoracoid based on its morphology, its connectivity to the rest of the skeleton and to muscles, as well as with its ossification center, cell lineage, and gene expression. In making these comparisons, the shoulder girdle skeleton of anurans has often been used as a reference. This review traces the history of the debate on the homology of the shoulder girdle in turtles. And based on the integrative aspects of developmental biology, comparative morphology, and paleontology, we suggest acromion and procoracoid identities for the two ventral processes.

    DOI: 10.1002/jez.b.22584

    Web of Science

    PubMed

    researchmap

  • On the homology of the shoulder girdle in turtles. 査読

    Nagashima, H, Sugahara, F, Takechi, M, Sato, N, Kuratani, S

    J. Exp. Zool. B Mol. Dev. Evol.   324 ( 3 )   244 - 254   2015年5月

     詳細を見る

    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)  

    The shoulder girdle in turtles is encapsulated in the shell and has a triradiate morphology. Due to its unique configuration among amniotes, many theories have been proposed about the skeletal identities of the projections for the past two centuries. Although the dorsal ramus represents the scapular blade, the ventral two rami remain uncertain. In particular, the ventrorostral process has been compared to a clavicle, an acromion, and a procoracoid based on its morphology, its connectivity to the rest of the skeleton and to muscles, as well as with its ossification center, cell lineage, and gene expression. In making these comparisons, the shoulder girdle skeleton of anurans has often been used as a reference. This review traces the history of the debate on the homology of the shoulder girdle in turtles. And based on the integrative aspects of developmental biology, comparative morphology, and paleontology, we suggest acromion and procoracoid identities for the two ventral processes.

    DOI: 10.1002/jez.b.22584

    PubMed

    researchmap

  • Comparative study of the shell development of hard- and soft-shelled turtles. 査読 国際誌

    Hiroshi Nagashima, Masahiro Shibata, Mari Taniguchi, Shintaro Ueno, Naoki Kamezaki, Noboru Sato

    Journal of anatomy   225 ( 1 )   60 - 70   2014年7月

     詳細を見る

    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:WILEY-BLACKWELL  

    The turtle shell provides a fascinating model for the investigation of the evolutionary modifications of developmental mechanisms. Different conclusions have been put forth for its development, and it is suggested that one of the causes of the disagreement could be the differences in the species of the turtles used - the differences between hard-shelled turtles and soft-shelled turtles. To elucidate the cause of the difference, we compared the turtle shell development in the two groups of turtle. In the dorsal shell development, these two turtle groups shared the gene expression profile that is required for formation, and shared similar spatial organization of the anatomical elements during development. Thus, both turtles formed the dorsal shell through a folding of the lateral body wall, and the Wnt signaling pathway appears to have been involved in the development. The ventral portion of the shell, on the other hand, contains massive dermal bones. Although expression of HNK-1 epitope has suggested that the trunk neural crest contributed to the dermal bones in the hard-shelled turtles, it was not expressed in the initial anlage of the skeletons in either of the types of turtle. Hence, no evidence was found that would support a neural crest origin.

    DOI: 10.1111/joa.12189

    Web of Science

    PubMed

    researchmap

  • Origin of the unique morphology of the shoulder girdle in turtles. 査読 国際誌

    Hiroshi Nagashima, Tatsuya Hirasawa, Fumiaki Sugahara, Masaki Takechi, Ryo Usuda, Noboru Sato, Shigeru Kuratani

    Journal of anatomy   223 ( 6 )   547 - 56   2013年12月

     詳細を見る

    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:WILEY-BLACKWELL  

    The shoulder girdle of turtles has a triradiate morphology. Although its dorsal process represents the scapular blade, the skeletal identities of the two ventral processes remain uncertain. To elucidate the question, developmental patterns of the girdles were compared between Chinese soft-shelled turtles, chickens, and mice. Despite the morphological diversity of adults, the initial primordia of the shoulder girdles showed similar morphological patterns. The ventral two processes developed from the anlagen comparable to those of the acromion and the coracoid in other amniotes. The developmental pattern of the acromion is very similar among embryos, whereas that of the coracoid in mammals differs from that in non-mammals, implying that coracoids are not homologous between non-mammals and mammals. Therefore, amniotes have retained the ancestral pattern of the girdle anlage, and the shoulder girdle of turtles has been achieved through a transformation of the pattern in the late ontogenic period.

    DOI: 10.1111/joa.12116

    Web of Science

    PubMed

    researchmap

  • Elucidation of target muscle and detailed development of dorsal motor neurons in chick embryo spinal cord. 査読 国際誌

    Nobumi Kobayashi, Shunsaku Homma, Tomoaki Okada, Tomoyuki Masuda, Noboru Sato, Keiji Nishiyama, Chie Sakuma, Takako Shimada, Hiroyuki Yaginuma

    The Journal of comparative neurology   521 ( 13 )   2987 - 3002   2013年9月

     詳細を見る

    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:WILEY-BLACKWELL  

    The avian cervical spinal cord includes motoneurons (MNs) that send their axons through the dorsal roots. They have been called dorsal motoneurons (dMNs) and assumed to correspond to MNs of the accessory nerve that innervate the cucullaris muscle (SAN-MNs). However, their target muscles have not been elucidated to date. The present study sought to determine the targets and the specific combination of transcription factors expressed by dMNs and SAN-MNs and to describe the detailed development of dMNs. Experiments with tracing techniques confirmed that axons of dMNs innervated the cucullaris muscle. Retrogradely labeled dMNs were distributed in the ventral horn of C3 and more caudal segments. In most cases, some dMNs were also observed in the C2 segment. It was also demonstrated that SAN-MNs existed in the ventral horn of the C1-2 segments and the adjacent caudal hindbrain. Both SAN-MNs and dMNs expressed Isl1 but did not express Isl2, MNR2, or Lhx3. Rather, these MNs expressed Phox2b, a marker for branchial motoneurons (brMNs), although the intensity of expression was weaker. Dorsal MNs and SAN-MNs were derived from the Nkx2.2-positive precursor domain and migrated dorsally. Dorsal MNs remain in the ventral domain of the neural tube, unlike brMNs in the brainstem. These results indicate that dMNs and SAN-MNs belong to a common MN population innervating the cucullaris muscle and also suggest that they are similar to brMNs of the brainstem, although there are differences in Phox2b expression and in the final location of each population. J. Comp. Neurol. 521: 2987-3002, 2013. © 2013 Wiley Periodicals, Inc.

    DOI: 10.1002/cne.23326

    Web of Science

    PubMed

    researchmap

  • Neurogenin2 expression together with NeuroM regulates GDNF family neurotrophic factor receptor α1 (GFRα1) expression in the embryonic spinal cord. 査読 国際誌

    Shimada T, Yaginuma H, Sato N, Homma S

    Developmental biology   370 ( 2 )   250 - 63   2012年10月

     詳細を見る

    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)  

    DOI: 10.1016/j.ydbio.2012.08.002

    Web of Science

    PubMed

    researchmap

  • Bilateral, asymmetric anomalies of the anterior bellies of digastric muscles. 査読

    Yosuke Yamazaki, Masahiro Shibata, Tatsuo Ushiki, Keitaro Isokawa, Noboru Sato

    Journal of oral science   53 ( 4 )   523 - 7   2011年12月

     詳細を見る

    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)  

    Bilateral, asymmetric anomalies of the anterior bellies of digastric muscles were observed during dissection of the submental region. Specifically, four extra muscle bundles were found between the anterior bellies of the digastric muscle. Although anomalies of the anterior bellies of digastric muscles are often observed, this complicated pattern of digastric anomalies has not been previously reported. Our findings and previous observations illustrate the morphogenetic complexity of the anterior belly of the digastric muscle derived from the first pharyngeal arch, which gives rise to jaw musculature such as the mylohyoid muscle.

    DOI: 10.2334/josnusd.53.523

    PubMed

    researchmap

  • Intrasulcal Electrocorticography in Macaque Monkeys with Minimally Invasive Neurosurgical Protocols

    Takeshi Matsuo, Keisuke Kawasaki, Takahiro Osada, Hirohito Sawahata, Takafumi Suzuki, Masahiro Shibata, Naohisa Miyakawa, Kiyoshi Nakahara, Atsuhiko Iijima, Noboru Sato, Kensuke Kawai, Nobuhito Saito, Isao Hasegawa

    Frontiers in Systems Neuroscience   5   2011年

     詳細を見る

    掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:Frontiers Media SA  

    DOI: 10.3389/fnsys.2011.00034

    researchmap

  • Intrasulcal electrocorticography in macaque monkeys 査読

    Keisuke Kawasaki, Takeshi Matsuo, Takahiro Osada, Hirohito Sawahata, Takafumi Suzuki, Masahiro Shibata, Naohisa Miyakawa, Kiyoshi Nakahara, Noboru Sato, Kensuke Kawai, Nobuhito Saito, Isao Hasegawa

    NEUROSCIENCE RESEARCH   71   E413 - E414   2011年

     詳細を見る

    記述言語:英語   出版者・発行元:ELSEVIER IRELAND LTD  

    DOI: 10.1016/j.neures.2011.07.1812

    Web of Science

    researchmap

  • ISLR2 expression during the period of naturally occurring cell death in the embryonic nervous system 査読

    Shunsaku Homma, Takako Shimada, Masahiro Shibata, Noboru Sato, Yasuo Uchiyama, Hiroyuki Yaginuma

    NEUROSCIENCE RESEARCH   68   E257 - E257   2010年

     詳細を見る

    記述言語:英語   出版者・発行元:ELSEVIER IRELAND LTD  

    DOI: 10.1016/j.neures.2010.07.1140

    Web of Science

    researchmap

  • Conditional RNA interference using a combination of Cre-loxP system and Tol2 transposition is a useful tool for the developmental studies in the chick 査読

    Masahiro Shibata, Kenjiro Ito, Noboru Sato

    NEUROSCIENCE RESEARCH   68   E372 - E372   2010年

     詳細を見る

    記述言語:英語   出版者・発行元:ELSEVIER IRELAND LTD  

    DOI: 10.1016/j.neures.2010.07.1649

    Web of Science

    researchmap

  • Efficient gene transfer to developing chick astrocytes by Tol2 transposition 査読

    Masahiro Shibata, Ryosuke Inoue, Noboru Sato

    MECHANISMS OF DEVELOPMENT   126   S319 - S320   2009年8月

     詳細を見る

    記述言語:英語   出版者・発行元:ELSEVIER SCIENCE BV  

    DOI: 10.1016/j.mod.2009.06.886

    Web of Science

    researchmap

  • Efficient gene transfer to developing chick astrocytes by Tol2 transposition 査読

    Masahiro Shibata, Ryosuke Inoue, Noboru Sato

    NEUROSCIENCE RESEARCH   65   S88 - S88   2009年

     詳細を見る

    記述言語:英語   出版者・発行元:ELSEVIER IRELAND LTD  

    DOI: 10.1016/j.neures.2009.09.355

    Web of Science

    researchmap

  • Distinct susceptibility of developing neurons to death following Bax overexpression in the chicken embryo

    N Sato, C Sakuma, Y Sato, TW Gould, RW Oppenheim, H Yaginuma

    CELL DEATH AND DIFFERENTIATION   13 ( 3 )   435 - 445   2006年3月

     詳細を見る

    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:NATURE PUBLISHING GROUP  

    Bax is a proapoptotic protein that is required for programmed cell death (PCD) of many neuronal populations. Here we show that, during an early period of retinal PCD and in naturally occurring sensory and motor neuron (MN) death in the spinal cord, Bax delivery results in enhanced death of these neural populations. In contrast, Bax overexpression fails to enhance an early phase of MN death that occurs in the cervical spinal cord, although overexpressed Bax appears to be activated in dying MNs. Bax overexpression does not also affect the survival of immature neurons prior to the PCD period. Taken together, these data provide the first in vivo evidence suggesting that Bax appears to act selectively as an executioner only in neurons undergoing PCD. Furthermore, although Bax appears to mediate the execution pathway for PCD, the effect of Bax overexpression on susceptibility to death differs between different neuronal populations.

    DOI: 10.1038/sj.cdd.4401760

    Web of Science

    PubMed

    CiNii Article

    researchmap

  • Early motoneuron death in the cervical spinal cord of the avian embryo occurs in the subgroup of motoneurons that correspond to the motoneurons innervating intercostal muscles 査読

    Hiroyuki Yaginuma, Nobumi Kobayashi, Shunsaku Homma, Noboru Sato, Takako Shimada, Chie Sakuma

    NEUROSCIENCE RESEARCH   55   S120 - S120   2006年

     詳細を見る

    記述言語:英語   出版者・発行元:ELSEVIER IRELAND LTD  

    Web of Science

    researchmap

  • Spatial and temporal regulation of gene transfer in the chicken embryo 査読

    Noboru Sato, Chie Sakuma, Hiroyuki Yaginuma

    NEUROSCIENCE RESEARCH   55   S106 - S106   2006年

     詳細を見る

    記述言語:英語   出版者・発行元:ELSEVIER IRELAND LTD  

    Web of Science

    researchmap

  • Gene delivery into the chicken embryo by using replication-competent retroviral vectors. 査読

    Noboru Sato

    Fukushima journal of medical science   50 ( 2 )   37 - 46   2004年12月

     詳細を見る

    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)  

    Rous sarcoma virus (RSV)-derived retroviral vectors have allowed for efficient gene transfer into the chicken embryo which is a classical model for studying vertebrate development. Current evidence reveals that this method can be used for regionally restricted expression, inducible expression, and for interfering with endogenous gene function, suggesting that gain-of-function and loss-of-function strategies for specific genes can be achieved spatially and temporally in the avian embryo. Thus, retroviral-mediated gene transfer into the chicken embryo coupled with a wide variety of strategies is now an important tool to address specific biological questions in the vertebrate.

    DOI: 10.5387/fms.50.37

    PubMed

    researchmap

  • Bcl-2 rescues motoneurons from early cell death in the cervical spinal cord of the chicken embryo. 査読 国際誌

    Noboru Sato, Chie Sakuma, Hiromi Kato, Carolanne E Milligan, Ronald W Oppenheim, Hiroyuki Yaginuma

    Journal of neurobiology   53 ( 3 )   381 - 90   2002年11月

     詳細を見る

    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:JOHN WILEY & SONS INC  

    Motoneurons (MNs) in the cervical spinal cord of the chicken embryo undergo programmed cell death (PCD) between embryonic day (E) 4 and E5. The intracellular molecules regulating this early phase of PCD remain unknown. Here we show that introduction of Bcl-2 by a replication-competent avian retroviral vector prevented MN degeneration at E4.5, whereas the expression of the green fluorescent protein (GFP) was ineffective. Bcl-2 expression did not affect the number of Islet-1/2-positive MNs at the onset of cell death (E4). However, when examined at the end of the cell death period (E5.5), the number of Islet-1/2-positive MNs was clearly increased in Bcl-2-transfected embryos compared with control and GFP-transfected embryos. Activation of caspase-3, which is normally observed in this early MN death, was also prevented by Bcl-2. Thus, MNs in the cervical spinal cord appear to use intracellular pathway(s) for early PCD that is responsive to Bcl-2.

    DOI: 10.1002/neu.10108

    Web of Science

    PubMed

    researchmap

  • Regulated gene expression in the chicken embryo by using replication-competent retroviral vectors. 査読 国際誌

    Noboru Sato, Kenji Matsuda, Chie Sakuma, Douglas N Foster, Ronald W Oppenheim, Hiroyuki Yaginuma

    Journal of virology   76 ( 4 )   1980 - 5   2002年2月

     詳細を見る

    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:AMER SOC MICROBIOLOGY  

    Rous sarcoma virus (RSV)-derived retroviral vector could efficiently deliver the green fluorescent protein (GFP), which is driven by the internal cytomegalovirus enhancer/promoter, into restricted cell populations in the chicken embryo. RSV-derived vectors coupled with the tet regulatory elements also revealed doxycycline-dependent inducible GFP expression in the chicken embryo in ovo.

    DOI: 10.1128/JVI.76.4.1980-1985.2002

    Web of Science

    PubMed

    researchmap

  • Roles of Caspases in the programmed cell death of motoneurons in vivo 査読

    H Yaginuma, N Sato, S Homma, RW Oppenheim

    ARCHIVES OF HISTOLOGY AND CYTOLOGY   64 ( 5 )   461 - 474   2001年12月

     詳細を見る

    記述言語:英語   出版者・発行元:INT SOC HISTOLOGY & CYTOLOGY  

    Cysteine proteases comprising the caspase family have been considered one of the major executioners of programmed cell death. However, detailed analyses of the programmed cell death of developing motoneurons in mice following the genetic deletion of two key caspases, casp-3 and casp-9, and in the chick embryo following treatment with caspase inhibitors, indicate that normal amounts of cell loss occur although the death process is delayed. Motoneurons undergoing programmed cell death without caspase activities exhibit a nonapoptotic morphology in which nuclear changes such as chromatin condensation are absent or reduced and which exhibit extensive cytoplasmic vacuolization such as is rarely observed in degenerating control neurons. These results suggest that caspases are involved in, but are not indispensable for, the developmental death of motoneurons, and that one function of caspases may be to facilitate the removal of cells that are destined to die. Possible alternative caspase-independent pathways for the programmed death of motoneurons are discussed.

    DOI: 10.1679/aohc.64.461

    Web of Science

    PubMed

    researchmap

  • Selective localization of Bcl-2 to the inner mitochondrial and smooth endoplasmic reticulum membranes in mammalian cells 査読

    T Gotow, M Shibata, S Kanamori, O Tokuno, Y Ohsawa, N Sato, K Isahara, Y Yayoi, T Watanabe, JF Leterrier, M Linden, E Kominami, Y Uchiyama

    CELL DEATH AND DIFFERENTIATION   7 ( 7 )   666 - 674   2000年7月

     詳細を見る

    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:NATURE PUBLISHING GROUP  

    Bcl-2, an anti-apoptotic protein, is believed to be localized in the outer mitochondrial membrane, endoplasmic reticulum, and nuclear envelope, However, Bcl-2 has also been suggested as playing a role in the maintenance of mitochondrial membrane potential, indicating its possible association with the inner mitochondrial membrane. We therefore further examined the exact localization of Bcl-2 in mitochondria purified from wild-type and bcl-2-transfected PC12 cells and pre- and postnatal rat brains. Double immunostaining demonstrated that Bcl-5 was co-localized with subunit beta of F(1)F(0)ATPase in the inner mitochondrial membrane. Biochemical analysis of isolated mitochondria using digitonin and trypsin suggests an association of Bcl-2 with the inner mitochondrial membrane, More interestingly, the majority of Bcl-2 disappeared from the inner membrane of mitochondria when cultured under serum deprivation. These results suggest that Bcl-2 acts as an anti-apoptotic regulator by localizing mainly to the inner mitochondrial and smooth ER membranes.

    DOI: 10.1038/sj.cdd.4400694

    Web of Science

    PubMed

    researchmap

  • Novel biphasic effect of pyrrolidine dithiocarbamate on neuronal cell viability is mediated by the differential regulation of intracellular zinc and copper ion levels, NF-kappa B, and MAP kinases 査読

    KC Chung, JH Park, CH Kim, HW Lee, N Sato, Y Uchiyama, YS Ahn

    JOURNAL OF NEUROSCIENCE RESEARCH   59 ( 1 )   117 - 125   2000年1月

     詳細を見る

    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:WILEY-LISS  

    Nuclear factor kappa B (NF-kappa B) is a transcription factor involved in the expression of a wide range of genes, most of which code for proteins that play a role in immunity and inflammation. Pyrrolidine dithiocarbamate (PDTC) is a well-known inhibitor of NF-kappa B. Although its mechanism of action is conferred by its antioxidant property, other mechanisms by which PDTC can act as a prooxidant, metal chelator, and free thiol group modulator have recently been suggested. Here we report that PDTC caused a dual effect on cell viability in neuronal rat pheochromocytoma (PC12) cells, depending on its concentration. Increase of intracellular zinc and copper ion levels selectively potentiated the cytotoxic PDTC effect in a dose-dependent manner, and thiol reagents, such as glutathione and N-acetylcysteine, as well as divalent metal-chelating reagents, such as EDTA and bathocuproline disulfonic acid, blocked its cell death effect. The differential effect of PDTC on cell viability correlates well with the inhibition of NF-kappa B activities. In addition, PDTC differentially activated microtubule-associated protein (MAP) kinases, such as extracellular signal-regulated kinase (ERK), c-Jun N-terminal kinase (JNK), but not p38, depending on its dose, and the coaddition of glutathione (GSH), other antioxidants, and metal ions also modulated their activities. Furthermore, stable Bcl-2 expression blocked the PDTC-induced cell death. These results suggest that the thiol groups and free zinc and copper ion levels are important for the novel biphasic PDTC effect on cell viability, which is associated with the differential activation of NF-kappa B and MAP kinases. (C) 2000 Wiley-Liss, Inc.

    DOI: 10.1002/(SICI)1097-4547(20000101)59:1<117::AID-JNR14>3.0.CO;2-Q

    Web of Science

    PubMed

    researchmap

  • Regulation of a novel pathway for cell death by lysosomal aspartic and cysteine proteinases 査読

    K Isahara, Y Ohsawa, S Kanamori, M Shibata, S Waguri, N Sato, T Gotow, T Watanabe, T Momoi, K Urase, E Kominami, Y Uchiyama

    NEUROSCIENCE   91 ( 1 )   233 - 249   1999年

     詳細を見る

    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:PERGAMON-ELSEVIER SCIENCE LTD  

    PC12 cells undergo apoptosis when cultured under conditions of serum deprivation. In this situation, the activity of caspase-3-like proteinases was elevated, and the survival rate could be maintained by treatment with acetyl-DEVD-cho, a specific inhibitor of caspase-3. In a culture of PC12 cells treated with acetyl-DEVD-cho, where caspase-3-like proteinases are not activated, CA074, a specific inhibitor of cathepsin B induced active death of the cells. Cathepsin B antisense oligonucleotides showed a similar effect to CA074 on the induction of active cell death. By double staining of terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated deoxyuridine triphosphate-biotin nick end-labeling and activated caspase-3, the dying cells treated with CA074 were positive for terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated deoxyuridine triphosphate-biotin nick end-labeling staining but negative for activated caspase-3. Ultrastructurally, the cells were relatively large and had nuclei with chromatin condensation. The initiation of cell death by CA074 or the cathepsin B antisense were inhibited by the addition of pepstatin A, a lysosomal aspartic proteinase inhibitor, or by cathepsin D antisense. To examine whether this cell death pathway was present in cell types other than PC12 cells, we analysed dorsal root ganglion neurons obtained from rat embryos on the 15th gestational day, a time when they require nerve growth factor for survival and differentiation in culture. When cultured in the absence of nerve growth factor, the neurons survived in the presence of acetyl-DEVD-cho or acetyl-YVAD-cho. Under these conditions, CA074 reduced the survival rate of the neurons, which was subsequently restored by the further addition of pepstain A.
    These results suggest that a novel pathway for initiating cell death exists which is regulated by lysosomal cathepsins, and in which cathepsin D acts as a death factor. We speculate that this death-inducing activity is normally suppressed by cathepsin B. (C) 1999 IBRO. Published by Elsevier Science Ltd.

    DOI: 10.1016/S0306-4522(98)00566-1

    Web of Science

    PubMed

    researchmap

  • A novel strategy for introducing exogenous Bcl-2 into neuronal cells: The Cre/loxP system-mediated activation of Bcl-2 for preventing programmed cell death using recombinant adenoviruses

    N Sato, SW Wang, L Li, K Okabe, M Hashimoto, H Yaginuma, K Mikoshiba, Y Uchiyama, T Uetsuki, K Yoshikawa, CE Milligan, RW Oppenheim

    MOLECULAR AND CELLULAR NEUROSCIENCE   12 ( 1-2 )   65 - 78   1998年9月

     詳細を見る

    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:ACADEMIC PRESS INC  

    We have established a novel strategy for introducing exogenous Bcl-2 into neuronal cells that is mediated by Cre/loxP recombination using recombinant adenoviral vectors. An on/off-switching cassette for Bcl-2 (CALNLbcl-2) was designed to express Bcl-2 by recombinase Cre-mediated excisional deletion of a spacer DNA flanked by a pair of loxP sites. Exogenous Bcl-2 was clearly induced in PC12 cell lines carrying CALNLbcl-2 after infection with recombinant adenovirus producing recombinase Cre (AxCANCre). Dual infection with both AxCANCre and a recombinant adenovirus bearing CALNLbcl-2 showed efficient delivery of exogenous Bcl-2 into a hybrid motoneuronal cell line and primary chicken spinal motoneurons. The delivery of foreign Bcl-2 promoted survival of motoneurons in medium either containing or lacking trophic support. Thus, this strategy for delivery of exogenous Bcl-2 will be useful for studying neuronal death as well as for introducing foreign genes into postmitotic neurons under the control of recombinase Cre.

    DOI: 10.1006/mcne.1998.0703

    Web of Science

    PubMed

    CiNii Article

    researchmap

  • Suppression of lysosomal proteolysis at three different steps in regenerating rat liver 査読

    Watanabe K, Ishidoh K, Ueno T, Sato N, Kominami E

    Journal of Biochemistry   124 ( 5 )   947 - 956   1998年

     詳細を見る

    記述言語:英語   出版者・発行元:The Japanese Biochemical Society  

    Decreased lysosomal proteolysis in regenerating liver after 70% hepatectomy was analyzed. The activities of cathepsins B and L increased transiently 4 h after hepatectomy, began to decrease gradually reaching about 30% of the control level at 24 h, then returned to near control level after 7 days. Immunoblot and RNA blot analyses confirmed that the changes in cathepsin activities coincided with changes in protein levels and mRNA levels. In parallel with the changes in cathepsins, we found that the amounts of LGP120, LGP110, and LGP85, three integral lysosomal membrane proteins, declined significantly after hepatectomy, suggesting that the lysosomal levels are also diminished in regenerating liver. We isolated dextran-loaded lysosomes and found that the protein content and marker enzyme activities of dextran-loaded lysosomes from partially hepatectomized livers are lower by 50 and 40%, respectively, compared with control livers. This indicates that there is a significant reduction in the cellular lysosomal level in regenerating liver. In addition, we used a sensitive biochemical assay to quantify leupeptin-induced autolysosomes and found that the autophagic activity is markedly suppressed in regenerating liver as compared with normal liver. Thus, the suppression of lysosomal proteolysis in regenerating liver is attained through three steps, <i>i.e.</i>, decreased biosynthesis of cathepsins, decreased lysosomal biogenesis, and decreased cellular autophagy.

    PubMed

    CiNii Article

    researchmap

  • Cloning and expression of the cDNA encoding rat caspase-2

    Noboru Sato, Carolanne E. Milligan, Yasuo Uchiyama, Ronald W. Oppenheim

    Gene   202 ( 1-2 )   127 - 132   1997年11月

     詳細を見る

    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)  

    We have isolated cDNA clones for rat caspase-2 (also called Nedd2/Ich-1), that encodes a protein similar to interleukin-1β-converting enzyme (ICE) and the product of the nematode Caenorhabditis elegans cell death gene ced-3 both of which play an important role in programmed cell death (PCD). The rat caspase-2 cDNA clones have an open reading frame (ORF) of 452 amino acids (aa). The predicted aa sequence of rat caspase-2 is highly similar to that of mouse Nedd2 (97.3%) and human Ich-1(L) (91.3%). The aa sequence QACRG containing the active Cys residue, that is necessary for the proteolytic activity of ICE/Ced-3 (caspase) family of proteases, is also conserved in rat caspase-2. Rat caspase-2 also has several Asp residues in the amino and carboxyl cleavage regions similar to other caspase family proteins. We have developed PC12 cells carrying an on/off switching cassette of caspase-2 (named PC-Nd cells), which contains the neo gene flanked by a pair of loxP sites, the Cre-specific recognition sequence of 34 nucleotides (nt), that lies between the promoter and the caspase-2 cDNA. This expression cassette was designed to express the neo gene initially and to turn on the expression of caspase-2 by site-specific recombinase Cre-mediated excisional deletion of the neo gene. After infection with Cre-producing recombinant adenovirus (re-Ad), the expression of caspase-2 was highly induced in PC-Nd cells and presumptive actively processed fragments of caspase-2 were also observed. This gene activation strategy of caspase-2 will be useful for the study of the biological effects of caspase family proteins in PCD.

    DOI: 10.1016/S0378-1119(97)00463-0

    Scopus

    PubMed

    CiNii Article

    researchmap

  • Lysosomal cysteine and aspartic proteinases and ubiquitin in rat and human urinary bladder epithelium 査読

    H Tokunaga, S Waguri, N Sato, Y Ohsawa, Y Banya, E Kominami, Y Uchiyama

    ARCHIVES OF HISTOLOGY AND CYTOLOGY   59 ( 3 )   249 - 260   1996年8月

     詳細を見る

    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:INT SOC HISTOLOGY & CYTOLOGY  

    To examine localization of cysteine and aspartic proteinases, and ubiquitin in rat and human urinary bladders, immunocytochemistry was applied to the tissues, In semi-thin sections, immunoreactivity for cathepsins B and D was densely localized throughout epithelial layers of rats and humans, while that for cathepsins H and L was mainly localized in rat superficial and human intermediate cells, Immunoreactivity for cathepsin C was relatively high in rat and human epithelia, especially in humans, Immunoreactivity for ubiquitin was detected in rat and human epithelial cells. By electron microscopy, vesicular or heterogeneously dense lysosomes labeled with immunogold particles indicating cathepsin B were seen in rat and human epithelial cells; particularly, they often appeared near fusiform vesicles in rat superficial cells and in human intermediate and superficial cells. By double immunostaining, lysosomes with or without vesicular structures were co-labeled with immunogold particles showing both cathepsin B and ubiquitin, The results suggest that cathepsins B, C, H, and L, and cathepsin D are involved in the lysosomal system of rat and human bladder epithelia, Moreover, considering that ubiquitin is a cofactor in the soluble ATP-dependent proteolysis, the results may also indicate that epithelial cells actively form autophagolysosomes.

    DOI: 10.1679/aohc.59.249

    Web of Science

    PubMed

    researchmap

  • Participation of cathepsins B, H, and L in perikaryal condensation of Ca1 pyramidal neurons undergoing apoptosis after brief ischemia 査読

    T Nitatori, N Sato, E Kominami, Y Uchiyama

    INTRACELLULAR PROTEIN CATABOLISM   389   177 - 185   1996年

     詳細を見る

    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(国際会議プロシーディングス)   出版者・発行元:PLENUM PRESS DIV PLENUM PUBLISHING CORP  

    Web of Science

    PubMed

    researchmap

  • CYSTEINE PROTEINASES IN GH(4)C(1) CELLS, A RAT PITUITARY-TUMOR CELL-LINE, ARE SECRETED BY THE CONSTITUTIVE AND REGULATED SECRETORY PATHWAYS 査読

    S WAGURI, N SATO, T WATANABE, K ISHIDOH, E KOMINAMI, K SATO, Y UCHIYAMA

    EUROPEAN JOURNAL OF CELL BIOLOGY   67 ( 4 )   308 - 318   1995年8月

     詳細を見る

    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:WISSENSCHAFTLICHE VERLAG GMBH  

    Secretory granules of GH(4)C(1) cells, a rat pituitary tumor cell line, are known to be induced by the treatment of estradiol (E(2)), insulin, and epidermal growth factor (EGF). We examined changes in the localization of cathepsins B, H, and L, lysosomal cysteine proteinases, in GH(4)C(1) cells before and after hormonal treatment. Northern blotting and immunofluorescence microscopy showed that both mRNAs and intracellular protein concentrations of these enzymes were increased in the hormone-induced cells, By immunoelectron microscopy, immunogold particles indicating cathepsins B, H, and L were localized not only in lysosomes but also in some secretory granules. To further examine the molecular forms of these proteinases in secretory granules, radiolabeling and immunoprecipitation methods were applied to the media of the cells incubated with or without secretagogues (100 nM 12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate and 50 mu M forskolin); the proforms of cathepsins B, H, and L were secreted from the cells by the constitutive pathway, whereas the mature forms of cathepsins B and H, and the preform and mature form of cathepsin L were secreted by the regulated pathway. These results suggest that in hormone-induced GH(4)C(1) cells, cathepsins B, H, and L are sorted from the Golgi complex not only into lysosomes but also into secretory granules, in which proforms of cathepsins B and H, and a part of procathepsin L are processed into mature forms.

    Web of Science

    PubMed

    researchmap

  • THE FATE OF EFFETE EPITHELIAL-CELLS AT THE VILLUS TIPS OF THE HUMAN SMALL-INTESTINE 査読

    T SHIBAHARA, N SATO, S WAGURI, T IWANAGA, A NAKAHARA, H FUKUTOMI, Y UCHIYAMA

    ARCHIVES OF HISTOLOGY AND CYTOLOGY   58 ( 2 )   205 - 219   1995年6月

     詳細を見る

    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:INT SOC HISTOLOGY & CYTOLOGY  

    Until recently, little has been known about the morphological features of dying enterocytes at the villus tips of the human small intestine. The present study aimed to show the exfoliating processes of effete enterocytes at the villus tips. Cellular elements of the duodenal lumen and jejunal tissue in humans were fixed and processed for DNA nick end labeling (TUNEL), and transmission and scanning electron microscopy (TEM and SEM). Most cellular elements in the duodenal lumen were enterocytes having TUNEL-positive nuclei. By SEM, protruding enterocytes were discerned at the villus tips. Using the SEM samples embedded in epoxy resin, protruding enterocytes were observed at the villus tips by TEM; they were shrunk by forming numerous clear and autophagic vacuoles, took dome-like profiles, and possessed nuclei with chromatin condensation. The intercellular spaces beneath these protruding or effete enterocytes were often occupied by large lymphocytes. By TUNEL reaction, positive stainings appeared in the epithelium not only at the tip of the villi but also around the site. The results suggest that effete enterocytes at the villus tips of human small intertine are first shrunk by forming clear and autophagic vacuoles, and showed that their nuclei exhibit chromatin condensation immediately before being exfoliated into the lumen.

    DOI: 10.1679/aohc.58.205

    Web of Science

    PubMed

    researchmap

  • APOPTOSIS AND HETEROPHAGY OF MEDIAL EDGE EPITHELIAL-CELLS OF THE SECONDARY PALATINE SHELVES DURING FUSION 査読

    K TANIGUCHI, N SATO, Y UCHIYAMA

    ARCHIVES OF HISTOLOGY AND CYTOLOGY   58 ( 2 )   191 - 203   1995年6月

     詳細を見る

    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:INT SOC HISTOLOGY & CYTOLOGY  

    Recent in vivo and in vitro studies have suggested that medial edge epithelial (MEE) cells covering the lateral palatine shelves do not undergo cell death, but migrate into the oral and nasal epithelium or transform into mesenchymal cells. We, therefore, reexamined the fate of MEE cells during palatal fusion in rat embryos by in situ 3' nick end labeling of dUTP (TUNEL), electron microscopy, and immunohisto/cytochemistry. TUNEL staining revealed positive nuclei in the medial edge epithelium immediately prior to contact, in epithelial triangles formed between the epithelial seam and nasal or oral epithelium, in epithelial pearls, and in mesenchymal tissue near the epithelium. However, these TUNEL-positive cells were rarely present in the epithelial seam. Electron microscopy revealed MEE cells showing nuclear chromatin condensation and cell shrinkage, and apoptotic bodies in the fusing epithelium; these often contained apoptotic body-like structures as heterophagosomes. By double staining using a laser scanning microscope, TUNEL-positive nuclei mere co-localized with lysosomal cysteine proteinases, cathepsin B or L in MEE and mesenchymal cells adjacent to the epithelium. These results suggest that MEE cells undergo apoptosis during the palatal formation, even though they migrate into epithelial triangles or transform into mesenchymal cells. Moreover, apoptotic bodies and cellular debris were phagocytosed by adjacent MEE cells or mesenchymal cells and digested by lysosomal enzymes.

    DOI: 10.1679/aohc.58.191

    Web of Science

    PubMed

    researchmap

  • DELAYED NEURONAL DEATH IN THE CA1 PYRAMIDAL CELL LAYER OF THE GERBIL HIPPOCAMPUS FOLLOWING TRANSIENT ISCHEMIA IS APOPTOSIS 査読

    T NITATORI, N SATO, S WAGURI, Y KARASAWA, H ARAKI, K SHIBANAI, E KOMINAMI, Y UCHIYAMA

    JOURNAL OF NEUROSCIENCE   15 ( 2 )   1001 - 1011   1995年2月

     詳細を見る

    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:OXFORD UNIV PRESS INC  

    The CA1 pyramidal neurons in the hippocampus are selectively vulnerable to transient ischemic damage. in experimental animals, the CA1 pyramidal neurons undergo cell death several days after brief forebrain ischemia. It remains, however, unknown whether this delayed neuronal death is necrosis or apoptosis. To investigate the degenerating processes of the CA1 pyramidal neurons in gerbil hippocampus after brief ischemia, lysosomal and nuclear alterations in the cells were examined using immunocytochemistry, in situ nick-end labeling, and Southern blotting. By light and electron microscopy, immunoreactivity for cathepsins B, H, and L, representative lysosomal cysteine proteinases, increased in the CA1 pyramidal neurons 3 d after ischemic insult, which showed cell shrinkage. By morphometric analysis, the volume density of cathepsin B-positive lysosomes markedly increased 3 d after ischemic insult, while that of autophagic vacuole-like structures also increased at this stage, suggesting that cathepsin B-immunopositive lysosomes increasing in the neurons after ischemic insult are mostly autolysosomes. Nuclei of the CA1 neurons were nick-end labeled by biotinylated dUTP mediated by terminal deoxy-transferase 3 and 4 d after ischemic insult, but not in the prior stages. Simultaneously, dense chromatin masses appeared in nuclei of the neurons. By Southern blotting, laddering of DNA occurred only in CA1 hippocampal tissues obtained 4 d after ischemic insult. Confocal laser scanning microscopy demonstrated that the fragmented DNA in the CA1 pyramidal layer was phagocytosed by microglial cells. The results suggest that delayed death of the CA1 pyramidal neurons after brief ischemia is not necrotic but apoptotic.

    Web of Science

    PubMed

    researchmap

  • NEURONAL DIFFERENTIATION OF PC12 CELLS AS A RESULT OF PREVENTION OF CELL-DEATH BY BCL-2

    N SATO, K HOTTA, S WAGURI, T NITATORI, K TOHYAMA, Y TSUJIMOTO, Y UCHIYAMA

    JOURNAL OF NEUROBIOLOGY   25 ( 10 )   1227 - 1234   1994年10月

     詳細を見る

    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:JOHN WILEY & SONS INC  

    Rat pheochromocytoma PC12 cells die when cultured in serum-free medium. Neurotrophic factors can rescue PC12 cells from cell death, and induce neuronal differentiation. To further investigate the relationship among cell death, survival, and differentiation, the bcl-2 cDNA, which is known to prevent apoptosis in various types of cells, was transfected into PC12 cells. Six monoclonal bcl-2-transfected cell lines were isolated and confirmed to express mRNA and protein product of bcl-2. The wildtype and bcl-2-transfected PC12 cells were kept to adhere to collagen-coated dishes at the inintiation of serum-free experiments to avoid cellular damage due to detachment of the cells by trituration. Even under the conditions, the control PC12 cells mostly died within 24 h, when cultured in serum-free medium, whereas those expressing Bcl-2 survived even for 7 days in serum-free medium. Moreover, outgrowth of long processes in the bcl-2-transfected cells was only observed under the condition to keep the cells attached to the dishes in serum-free medium without any additive neurotrophic or growth factors. Neurofilament medium protein, which is a neuron-specific cytoskeletal component, was also expressed in the differentiated cells, suggesting that the long processes in bcl-2-transfected PC12 cells are neurites. However, neuronal differentiation of PC12 cells expressing Bcl-2 was not observed when cultured in serum-containing medium. Accordingly, survival of PC12 cells expressing Bcl-2 under the condition which cells usually die may be accompanied with neuronal differentiation. (C) 1994 John Wiley and Sons, Inc.

    DOI: 10.1002/neu.480251005

    Web of Science

    PubMed

    CiNii Article

    researchmap

  • Cell and tissue distribution of lysosomal cysteine proteinases, cathepsins B, H, and L, and their biological roles 査読

    Uchiyama Y, Waguri S, Sato N, Watanabe T, Ishido K, Kominami E

    Acta Histochemica et Cytochemica   27 ( 4 )   287 - 308   1994年

     詳細を見る

    記述言語:英語   出版者・発行元:JAPAN SOCIETY OF HISTOCHEMISTRY AND CYTOCHEMISTRY  

    Cathepsins B, H, and L, representative lysosomal cysteine proteinases, have been shown to be involved in the degradation of proteins, generation of bioactive proteins, antigen processing, etc. Recent biochemical as well as Immunohisto/cytochemical studies have demonstrated that these enzymes are transferred from the trans Golgi network to lysosomes of cells, and in some cases, to secretory granules of certain endocrine cells, or they are secreted from cells. Localization of these enzymes in lysosomes differs depending on cell types even in the same tissues, suggesting that expression of these enzymes is regulated corresponding to cell specialization. Cathepsins B and H are localized in secretory granules of some peptide hormone-producing cells; particularly, cathepsin B is co-localized with renin in various endocrine cells producing active renin, indicating that cathepsin B is a major candidate of the renin converting enzyme. Moreover, these cysteine proteinases are secreted as their pro- or active forms from various tissue cells. In the resorption lacuna facing osteoclasts, secreted cathepsin L has been suggested to play a major role in the degradation of organic bone constituents, particularly collagen. Thus cathepsins B, H, and L act as biomodulators in various cells and tissues. In the present review, we introduce the precise localization of cathepsins B, H, and L and discuss their possible roles in cells and tissues.

    DOI: 10.1267/ahc.27.287

    CiNii Article

    CiNii Books

    researchmap

  • COEXISTENCE OF RENIN AND CATHEPSIN-B IN SECRETORY GRANULES OF GRANULAR DUCT CELLS IN MALE-MOUSE SUBMANDIBULAR-GLAND 査読

    K SANO, S WAGURI, N SATO, E KOMINAMI, Y UCHIYAMA

    JOURNAL OF HISTOCHEMISTRY & CYTOCHEMISTRY   41 ( 3 )   433 - 438   1993年3月

     詳細を見る

    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:HISTOCHEMICAL SOC INC  

    Cathepsin B, a representative lysosomal cysteine proteinase, has been demonstrated to coexist with renin in secretary granules of rat pituitary LH/FSH cells and renal juxtaglomerular cells. We investigated immunocytochemically the localization of cathepsins B, H, and L in the submandibular gland of male mice, in which active renin is also produced. By light microscopy, granular immunodeposits for cathepsin B were detected in epithelial cells of the gland, particularly in granular duct cells and interstitial cells. Immunoreactivity for cathepsins H and L was mainly found in interstitial cells, although that for cathepsin H was weakly seen in acinar cells. By electron microscopy, immunogold particles indicating cathepsin B intensely labeled small granules near the Golgi complex of granular duct cells and weakly labeled large secretory granules, whereas those showing renin labeled both granules. Double immunostaining co-localized immunogold particles showing renin and cathepsin B in small perinuclear granules near the Golgi complex. Some immunopositive granules seemed to be closely associated with the Golgi elements. These results indicate that the co-localization of renin and cathepsin B is also seen in secretory granules of granular duct cells in the mouse submandibular gland, as seen in rat juxtaglomerular and LH/FSH cells. This suggests that cathepsin B is one of the possible candidates for the renin-processing enzyme.

    DOI: 10.1177/41.3.8429206

    Web of Science

    PubMed

    researchmap

  • STRUCTURAL ORGANIZATION OF THE GENE ENCODING RAT CYSTATIN-BETA

    N SATO, K ISHIDOH, Y UCHIYAMA, E KOMINAMI

    GENE   114 ( 2 )   257 - 260   1992年5月

     詳細を見る

    記述言語:英語   出版者・発行元:ELSEVIER SCIENCE BV  

    A genomic DNA clone encompassing the gene (cy-beta) encoding rat cystatin-beta (Cy-beta) was isolated by screening with a rat cy-beta cDNA as a probe. The gene spans about 2.6 kb and comprises three exons. The first intron is located between Lys22 and Val23 and the second between LyS56 and Val57 in the deduced amino acid sequence of Cy-beta. The second exon contains the highly conserved QVVAG sequence which, unlike the sequence of other cystatin family members, is not split by an intron. In the 5&apos;-upstream region, three SP-1-binding sites exist, but no typical TATA-box or CAAT-box sequences are found. The difference in the organization of the rat cy-beta gene, encoding a family-1 cystatin, from that encoding members of the other cystatin families, suggests that cy-beta diverged from a common ancestral gene earlier than the separation of genes encoding family-2 and family-3 cystatins.

    DOI: 10.1016/0378-1119(92)90584-C

    Web of Science

    PubMed

    CiNii Article

    researchmap

  • IMMUNOCYTOCHEMICAL LOCALIZATION OF CATHEPSIN-B IN RAT ANTERIOR-PITUITARY ENDOCRINE-CELLS, WITH SPECIAL REFERENCE TO ITS COLOCALIZATION WITH RENIN AND PRORENIN IN GONADOTROPHS 査読

    Y UCHIYAMA, M NAKAJIMA, T WATANABE, S WAGURI, N SATO, M YAMAMOTO, Y HASHIZUME, E KOMINAMI

    JOURNAL OF HISTOCHEMISTRY & CYTOCHEMISTRY   39 ( 9 )   1199 - 1205   1991年9月

     詳細を見る

    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:HISTOCHEMICAL SOC INC  

    We examined by immunocytochemistry the localization of cathepsin B in endocrine cells of rat anterior pituitary lobe, using a monospecific antibody to cathepsin B. By light microscopy, granular immunodeposits for cathepsin B were detected in most endocrine cells of anterior pituitary lobe. Cells immunoreactive for luteinizing hormone (LH) were diffusely immunostained by anti-cathepsin B. By electron microscopy, immunogold particles for cathepsin B were localized in lysosomes of thyrotrophs, somatotrophs, and mammotrophs. In mammotrophs, immunogold particles for cathepsin B were also detected in crinophagic bodies. Double immunostaining co-localized immunogold particles for LH and cathepsin B in secretory granules of gonadotrophs. Immunocytochemistry was also applied to demonstrate localization of renin and prorenin in LH-producing gonadotrophs; immunogold particles for renin were co-localized with those for LH, cathepsin B, or prorenin in their secretory granules. Immunogold particles for prorenin were also co-localized with those for LH or cathepsin B in secretory granules, but prorenin-positive granules appeared less frequently than renin-positive granules. These results suggest that cathepsin B not only plays a role in the protein degradation in lysosomes of anterior pituitary endocrine cells but also participates in the activation of renin in gonadotrophs, as has been demonstrated in secretory granules of juxtaglomerular cells.

    DOI: 10.1177/39.9.1918937

    Web of Science

    PubMed

    researchmap

  • CYSTEINE PROTEINASES IN BRONCHOALVEOLAR EPITHELIAL-CELLS AND LAVAGE FLUID OF RAT LUNG 査読

    Y ISHII, Y HASHIZUME, T WATANABE, S WAGURI, N SATO, M YAMAMOTO, S HASEGAWA, E KOMINAMI, Y UCHIYAMA

    JOURNAL OF HISTOCHEMISTRY & CYTOCHEMISTRY   39 ( 4 )   461 - 468   1991年4月

     詳細を見る

    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:HISTOCHEMICAL SOC INC  

    We examined the presence of cathepsins B, H, and L in bronchoalveolar epithelial cells, including alveolar macrophages, and in bronchoalveolar lavage fluid (BALF), using immunocytochemistry and immunoblotting. By light and electron microscopy, immunoreactivity for cathepsins B, H, and L was detected in lysosomes of ciliated and non-ciliated epithelial cells of bronchi and bronchioles, and in macrophages. Immunodeposits for cathepsin H only were demonstrated in lamellar bodies of Type II alveolar epithelial cells, suggesting the cosecretion of surfactants and cathepsin H from the cells into the alveolar space. By immunoblotting, cathepsins B and H were found to be present in BALF. To further investigate the origin of these enzymes in BALF, alveolar macrophages obtained from BALF were cultured for 6 hr in a serum-free medium. Immunoblotting revealed that protein bands corresponding to the pro-form and mature form of cathepsin B and the mature form of cathepsin H were present in the culture medium. From these results, the presence of cathepsins B and H in BALF can be explained by the fact that cathepsin B is secreted from alveolar macrophages and cathepsin H is secreted mainly with surfactants from Type II cells and also from macrophages.

    DOI: 10.1177/39.4.2005374

    Web of Science

    PubMed

    researchmap

  • Molecular cloning of cDNA for rat cathepsin C: Cathepsin C, A cysteine proteinase with an extremely long propeptide 査読

    Ishidoh K, Muno D, Sato N, Kominami E

    Journal of Biological Chemistry   266 ( 25 )   16312 - 16317   1991年

     詳細を見る

    記述言語:英語  

    PubMed

    researchmap

  • MOLECULAR-CLONING AND SEQUENCING OF CDNA FOR RAT CYSTATIN-BETA

    N SATO, K ISHIDOH, Y UCHIYAMA, E KOMINAMI

    NUCLEIC ACIDS RESEARCH   18 ( 22 )   6698 - 6698   1990年11月

     詳細を見る

    記述言語:英語   出版者・発行元:OXFORD UNIV PRESS UNITED KINGDOM  

    DOI: 10.1093/nar/18.22.6698

    Web of Science

    PubMed

    CiNii Article

    researchmap

  • IMMUNOCYTOCHEMICAL LOCALIZATION OF CATHEPSIN-B AND CATHEPSIN-H IN CORTICOTROPHS AND MELANOTROPHS OF RAT PITUITARY-GLAND 査読

    Y UCHIYAMA, M NAKAJIMA, D MUNO, T WATANABE, Y ISHII, S WAGURI, N SATO, E KOMINAMI

    JOURNAL OF HISTOCHEMISTRY & CYTOCHEMISTRY   38 ( 5 )   633 - 639   1990年5月

     詳細を見る

    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:HISTOCHEMICAL SOC INC  

    DOI: 10.1177/38.5.2159033

    Web of Science

    PubMed

    researchmap

▶ 全件表示

書籍等出版物

  • 培養細胞への遺伝子導入

    学際企画・組織細胞化学2000  2000年 

     詳細を見る

MISC

  • 神経系のプログラム細胞死期におけるISLR2の発現様式(ISLR2 expression during the period of naturally occurring cell death in the embryonic nervous system)

    本間 俊作, 島田 孝子, 柴田 昌宏, 佐藤 昇, 内山 安男, 八木沼 洋行

    神経化学   49 ( 2-3 )   631 - 631   2010年8月

     詳細を見る

    記述言語:英語   出版者・発行元:日本神経化学会  

    researchmap

  • Regulated gene expression in the chicken embryo by using replication-competent retroviral vectors

    N Sato, K Matsuda, C Sakuma, DN Foster, RW Oppenheim, H Yaginuma

    JOURNAL OF VIROLOGY   76 ( 4 )   1980 - 1985   2002年2月

     詳細を見る

    記述言語:英語   出版者・発行元:AMER SOC MICROBIOLOGY  

    Rous sarcoma virus (RSV)-derived retroviral vector could efficiently deliver the green fluorescent protein (GFP), which is driven by the internal cytomegalovirus enhancer/promoter, into restricted cell populations in the chicken embryo. RSV-derived vectors coupled with the tet regulatory elements also revealed doxycycline-dependent inducible GFP expression in the chicken embryo in ovo.

    DOI: 10.1128/JVI.76.4.1980-1985.2002

    Web of Science

    PubMed

    CiNii Article

    researchmap

  • Bcl-2の抗アポトーシス作用発現とミトコンドリア内膜への局在

    金森 市朗, 後藤 隆洋, 柴田 昌宏, 井佐原 京子, 大沢 良之, 佐藤 昇, 渡部 剛, 内山 安男

    神経化学   37 ( 3 )   370 - 370   1998年9月

     詳細を見る

    記述言語:日本語   出版者・発行元:日本神経化学会  

    researchmap

講演・口頭発表等

  • 神経系形成におけるRhoシグナル伝達の重要性

    第112回日本解剖学会総会・全国学術集会  2007年 

     詳細を見る

    会議種別:ポスター発表  

    researchmap

  • Distinct susceptibility of developing neurons to death after Bax overexpression in the chicken embryo

    36th Annual Meeting,Society for neuroscience  2006年 

     詳細を見る

    会議種別:ポスター発表  

    researchmap

  • Spatial and temporal regulation of gene transfer in the chicken embryo.

    2006年 

     詳細を見る

    会議種別:ポスター発表  

    researchmap

  • Distinct susceptibility of developing neurons to death after Bax overexpression in the chicken embryo

    36th Annual Meeting,Society for neuroscience  2006年 

     詳細を見る

    会議種別:ポスター発表  

    researchmap

  • ニワトリ胚での空間的・時間的な遺伝子発現の制御

    日本解剖学会  2006年 

     詳細を見る

    会議種別:ポスター発表  

    researchmap

  • Spatial and temporal regulation of gene transfer in the chicken embryo.

    2006年 

     詳細を見る

    会議種別:ポスター発表  

    researchmap

▶ 全件表示

共同研究・競争的資金等の研究

  • アキレス腱捻れ構造の非侵襲的評価法確立と腱の構造と特性に着目した障害予防法開発

    研究課題/領域番号:23H03258

    2023年4月 - 2027年3月

    制度名:科学研究費助成事業

    研究種目:基盤研究(B)

    提供機関:日本学術振興会

    江玉 睦明, 佐藤 昇, 高林 知也, 石垣 智恒, 大森 豪, 工藤 慎太郎, 影山 幾男

      詳細を見る

    配分額:18980000円 ( 直接経費:14600000円 、 間接経費:4380000円 )

    researchmap

  • 筋膜構造の形態学的・組織学的基盤確立と新たな運動療法の開発

    研究課題/領域番号:22K19739

    2022年6月 - 2025年3月

    制度名:科学研究費助成事業

    研究種目:挑戦的研究(萌芽)

    提供機関:日本学術振興会

    江玉 睦明, 佐藤 昇, 河上 敬介, 影山 幾男, 田口 徹

      詳細を見る

    配分額:6370000円 ( 直接経費:4900000円 、 間接経費:1470000円 )

    本研究では,ホルマリン固定遺体を用いて,①肉眼解剖学的に筋膜構造の部位差を解明し,②筋膜構造の侵害受容線維の分布様式を解明することで,筋膜構造の形態学的・組織学的基盤を確立する.さらに,Thiel固定遺体と生体を用いて,③適切な超音波画像の描出部位を確立し,④筋膜構造の違いによる機械刺激に対する各筋膜組織の反応(可動性,痛み)を解明する.そして,これら研究成果を基にして筋膜構造の特徴を考慮した最適な運動療法の開発を目指す.具体的には以下の4つの実験を3年計画で遂行し,筋膜構造の形態学的・組織学的基盤を確立することで筋膜構造の特徴を考慮した最適な運動療法の開発を目指す.
    2022年度は,実験① として「筋膜構造の部位差の解明」に取り組んだ.対象は,ホルマリン固定遺体10体として,皮膚,皮下組織,浅筋膜,筋上膜,筋線維と筋周膜・筋内膜を剖出し,浅筋膜と筋上膜に注目して肉眼解剖学的にタイプ分類(身体を14部位に区分)を行った.その結果,筋膜構造は基本形と思われる構造とそれ以外の構造があることが明らかとなった(主に4つのタイプ).基本の構造は,皮下組織,浅筋膜,筋上膜,筋周膜・筋内膜などの全ての筋膜組織が存在していた.僧帽筋や大殿筋などの肩こりや腰痛で治療対象となりやすい領域では,浅筋膜は無く,筋上膜・筋周膜が皮下組織の膠原線維や弾性線維と強く結合する筋膜構造のタイプであった.また,下腿近位部などでは浅筋膜から筋線維が始まるタイプ,大腿部外側面などでは浅筋膜がありその深層の腱膜から筋線維が始まるタイプが存在した.

    researchmap

  • 末梢標的とその支配神経形成についての定説の再考

    研究課題/領域番号:22K06807

    2022年4月 - 2025年3月

    制度名:科学研究費助成事業

    研究種目:基盤研究(C)

    提供機関:日本学術振興会

    佐藤 昇

      詳細を見る

    配分額:4290000円 ( 直接経費:3300000円 、 間接経費:990000円 )

    researchmap

  • 立体三次元構築法を用いた末梢神経交叉移行術後における可塑的神経再生経路の検討

    研究課題/領域番号:25293362

    2013年4月 - 2017年3月

    制度名:科学研究費助成事業

    研究種目:基盤研究(B)

    提供機関:日本学術振興会

    柴田 実, 松田 健, 佐藤 昇, 牛木 辰男, 渋木 克栄

      詳細を見る

    配分額:17940000円 ( 直接経費:13800000円 、 間接経費:4140000円 )

    神経交叉術は本来、過誤支配をもたらす手技であり、有用な機能再生が促されるにはこれまで知られていないメカニズムが作用すると考えられる。マウス腕神経叢、上腕末梢神経は小さく、全体標本を使用して可塑的神経再生の観察に適する。高度の神経縫合技術を確立し、カルボシアニン蛍光色素染色でマウス末梢神経支配髄節はヒトと同様の支配レベルで筋皮神経と尺骨神経の支配髄節はほぼ、重ならない事を示し、尺骨神経を近位、筋皮神経を遠位に交叉すると、交叉部遠位からの逆行とレーサーで尺骨神経支配髄節とともに筋皮神経髄節の支配が加わっていることが判明した。電気生理学的にも交叉術後に有用な筋収縮が起こることを示した。

    researchmap

  • トランスポゾンを用いた発生後期鶏胚への遺伝子導入

    研究課題/領域番号:22590188

    2010年 - 2012年

    制度名:科学研究費助成事業

    研究種目:基盤研究(C)

    提供機関:日本学術振興会

    佐藤 昇, 柴田 昌弘

      詳細を見る

    配分額:4420000円 ( 直接経費:3400000円 、 間接経費:1020000円 )

    本研究はトランスポゾンという遺伝子組み換え時に認められる構造を用いた遺伝子導入が発生後期のニワトリ胚でどれだけ有用かを検討したものである。この研究でトランスポゾンを用いて遺伝子発現ユニットを導入した場合、発生後期までの長期間にわたって遺伝子導入が可能となる可能性が示された。一方で目的とする細胞・組織に導入するには遺伝子発現ユニットの正確な構築が必要であることが明らかになった。

    researchmap

  • 発生運動ニューロンの時間的・空間的に特異的な標識法の検討

    研究課題/領域番号:19590192

    2007年 - 2008年

    制度名:科学研究費助成事業

    研究種目:基盤研究(C)

    提供機関:日本学術振興会

    佐藤 昇, 宮脇 誠, 鈴木 了, 宮脇 誠, 鈴木 了

      詳細を見る

    配分額:4680000円 ( 直接経費:3600000円 、 間接経費:1080000円 )

    本研究においては、レポーター遺伝子を運動ニューロン特異的エンハンサー・プロモーター領域に連結した遺伝子を発育鶏胚に導入することで、発生運動ニューロンの標識を行うことを検討した。その結果、GFPやアルカリフォスファターゼなどのレポーター遺伝子を用いることで、体性運動ニューロンの神経線維がその伸長し始める時期から明瞭に発育鶏胚で標識されることが明らかになった。また、時間経過を追うことで、脊髄神経叢の形成過程を観察することに成功した。

    researchmap

  • 運動神経サブグループに特異的に起こる細胞死の機序の解明

    研究課題/領域番号:18500266

    2006年 - 2007年

    制度名:科学研究費助成事業

    研究種目:基盤研究(C)

    提供機関:日本学術振興会

    八木沼 洋行, 本間 俊作, 増田 知之, 佐藤 昇

      詳細を見る

    配分額:3890000円 ( 直接経費:3500000円 、 間接経費:390000円 )

    我々は発生早期のニワトリ胚の頚髄に特異的に起こる運動神経細胞死に関係する様々な分子にについて検索を進めてきた。これまで発生早期の鳥類胚の頚髄に特異的に起こる運動神経細胞死において、死ぬ細胞はLimホメオドメイン転写因子の一つのLim3を一旦発現するもののその後発現が消失する特定の運動神経サブグループであることを明らかにしてきた。しかし、同様の転写因子の発現パタンを示す運動神経サブグループは他の脊髄レベルでも見られることから、死ぬ細胞の決定にはさらに吻尾軸における位置情報が重要な働きをすると考えられる。そこで、当該年度においては、吻尾軸におけるidentityの決定に関わるHox遺伝子の関与を調べるため、Hox遺伝子と共同して働き、運動神経細胞の部位特異的な分化に関わることが知られているForkhead domain転写因子の一つのFoxp1の発現について詳細に検討した。Foxp1は、細胞死が起こる直前の時期ではLim3の発現と相補的な発現パタンを示し、細胞死の進行とともに発現細胞数は減少し、細胞死が完了した時期には発現細胞は認められなくなった。また、細胞死の初期段階にある細胞における共存を調べたところほぼ全ての細胞においてFoxp1が陽性であった。これらの結果は、死ぬ細胞の決定や細胞死の開始の機序にFoxp1が関与している可能性を示唆するものである。さらに、Foxp1の機能や共同して働くHox遺伝子について、in situ hybridization法を用いて検索を進めたところ、細胞死が認められる範囲全域においてHoxC5の発現も認められることが明らかとなった。このことは、HoxC5が細胞死決定の因子であるための必要条件を満たすものと考えられる。今後、さらにほかのHox遺伝子の発現を調べたり、機能阻害実験などを通して解明を進める予定である。

    researchmap

  • 選択的細胞除去による脊髄運動ニューロン数の制御メカニズムの解析

    研究課題/領域番号:17590167

    2005年 - 2006年

    制度名:科学研究費助成事業

    研究種目:基盤研究(C)

    提供機関:日本学術振興会

    佐藤 昇

      詳細を見る

    配分額:3500000円 ( 直接経費:3500000円 )

    本研究課題では脊髄運動ニューロン数が発生過程でどのようにコントロールされているのか(産生と細胞死による除去)を明らかにする目的で、実験的に運動ニューロンを選択的に除去する系の構築を試みた。細胞死を促進する分子として知られるBaxのgain-of-function変異体をテトラサイクリン反応配列に連結してドキシサイクリン添加とrtTA発現によってBaxのgain-of-function変異体発現が誘導されるようにし、また一方でrtTAは運動ニューロン特異的エンハンサーであるHB9の制御を受けるようにすることによって、脊髄運動ニューロンでドキシサイクリンを添加した場合にのみ遺伝子が発現するようにデザインした。その結果、頚髄において本来細胞死を起こさず生き残るはずの運動ニューロンで、Baxのgain-of-function変異体が発現することによって細胞死を引き起こすことに成功した。また野生型Baxは生体エレクトロポレーション法で遺伝子導入後時間をおいてから(24時間程度)ドキシサイクリンによって発現誘導をおこなっても細胞死を惹起しないが、通常の発現ベクターを用いて生体エレクトロポレーション法で導入した場合は数時間後から脊髄全般で細胞死を引き起こすことが明らかになった。これらの手法を組み合わせることによって空間的・時間的に運動ニューロンの除去を行うことが実験的に可能になると予想され、本研究課題の成果を基に運動ニューロン数が発生過程でどのようにコントロールされているのかそのメカニズムの解析が一層進展することが期待される。

    researchmap

  • 発生早期に起こる運動神経細胞死における転写因子の関与の解明

    研究課題/領域番号:16500223

    2004年 - 2005年

    制度名:科学研究費助成事業

    研究種目:基盤研究(C)

    提供機関:日本学術振興会

    八木沼 洋行, 佐藤 昇, 本間 俊作

      詳細を見る

    配分額:3700000円 ( 直接経費:3700000円 )

    鳥類の頚髄特異的に、発生の早期(E4-5)に運動神経細胞死が起こる。我々は、この細胞死はLIM-HD転写因子に属するLim3の発現が見られない細胞群に起こることを明らかにして来ていた。本研究ではこの神経群の発達について詳細に検討し、他の部位の運動神経細胞の発生分化と比較することによって、この細胞死の機序、とくに細胞の分化を直接調節すると考えられる転写因子群の関与についての解明を目指した
    運動神経サブグループ特異的転写因子マーカーによる検索は、死ぬ細胞がLim3(-)、Isl1(+)、Isl2(+)、MNR2(+)のサブグループに属することを明らかにした。この細胞群はE3.5から運動神経核の外側部に出現しはじめ、E4では運動神経核の背外側部を占める様になる。運動神経の最終分裂時期を調べた結果から、Lim3(-)細胞群の出現は、一旦Lim3を発現していた細胞群の中にLim3の発現を低下させる細胞群が現れることによることが明らかとなった。またこのような細胞群は、細胞死の起こる時期の後では消失してしまう「一過性の細胞群」であることも明らかとなった。この細胞群と同じ転写因子の発現パタン示す運動神経細胞群を検索したところ、胸髄における内側運動神経核外側部(MMCl)と同じであった。MMClは肋間筋を支配する運動神経群であり、最終分裂の時期、内側運動神経核内における位置関係、LIM-HD転写因子の発現パタンの変化などにおいて頚髄における「一過性の細胞群」と対応する神経群であることが明らかとなった。2つの神経群が、同じLIM-HD転写因子の発現パタンながら異なる運命を辿ることから、脊髄における吻尾軸に沿った分化の違いを決定するHox転写因子の関与が考えられたため、Hoxc5などの発現パタンの解析や異所性発現の実験を進めたが、期間内に十分な結果を得ることは出来ず、今後の課題となった。

    researchmap

  • Bax発現系による発生過程で起こるニューロン死のメカニズム解析

    研究課題/領域番号:15590165

    2003年 - 2004年

    制度名:科学研究費助成事業

    研究種目:基盤研究(C)

    提供機関:日本学術振興会

    佐藤 昇

      詳細を見る

    配分額:3600000円 ( 直接経費:3600000円 )

    細胞死促進分子であるBaxをニワトリ胚へ強制発現させて、網膜、脊髄神経節、脊髄運動ニューロンで起こる生理的ニューロン死(発生過程で自然に起こるニューロン死)を解析した結果、ニューロン死の時期に一致して細胞死が増強し、ニューロン死の時期が終了した後の生存ニューロン数は減少することがわかりました。同様の神経細胞集団であってもニューロン死が起こる時期の以前ではBaxが強発現しても細胞死を引き起こさないことも見出しました。興味深いことに頚髄で早期に起こる運動ニューロン死においては、導入されたBaxは死につつある運動ニューロンでは活性型として機能していることが示唆されましたが、頚髄運動ニューロン死自体は増強されませんでした。以上の結果から、Baxがin vivoで機能するためには発現しているのみでは十分でなく細胞死を引き起こすシグナルが必要であることが明らかになりました。またそのような細胞死を引き起こすシグナルは、網膜、脊髄神経節、脊髄運動ニューロンなどで起こるニューロン死においては生き残るべきニューロンにも伝達されうる一方で、頚髄で早期に起こる運動ニューロン死においては死ぬべき細胞に限定して伝達されている可能性が示唆されました。これらの研究成果は、細胞死をコントロールする重要な分子であるBaxの生体での機能に関する今後の研究の進展、及び発生過程で起こるニューロンの生死決定のメカニズムを明らかにしていく上で重要な基盤となると思われます。

    researchmap

  • 発生早期に起こる鳥類胚頸髄の運動神経細胞死の決定機序の解析

    研究課題/領域番号:14580731

    2002年 - 2003年

    制度名:科学研究費助成事業

    研究種目:基盤研究(C)

    提供機関:日本学術振興会

    八木沼 洋行, 佐藤 昇, 本間 俊作

      詳細を見る

    配分額:4100000円 ( 直接経費:4100000円 )

    本研究では、発生早期の鳥類の頚髄に特異的に起こる運動神経細胞死において死ぬ細胞がどのように決定されるのかという機序の解明を目指した。これまでの研究から、この細胞死では、特定の分化を行った細胞に細胞死が起こることが示唆されていることから、運動神経の分化マーカーと細胞死マーカーとの共存について定量的な解析をおこなった。運動神経の分化マーカーとして、Limホメオドメインをもった転写因子のIsl1,Isl2およびLim3、さらにMNR2転写因子の発現を調べた。その結果、細胞死を起こすのはLim3の発現が無い細胞群であり、このような細胞群は細胞死によって完全に取り除かれてしまうことがあきらかになった。Bcl2遺伝子の導入で細胞を不死化すると、このような細胞群はLim3陰性の細胞群として、運動神経核の特定の部位に局在していることが分かり、定量した結果、細胞死の怒る前に存在していたLim3陰性の細胞数に一致していた。さらに、Lim3を強制発現させると細胞死が抑制されることも判明した。これらの結果は、この細胞死が特定の分化を行った運動神経サブグループにだけ起こり、その結果、サブグループは完全に発生から排除されてしまうことを示すものである。このような細胞死は、発生中の中枢神経系の他の部位では知られておらず、きわめてユニークな意味を持った細胞死であることが明らかとなった。このLim3陰性の細胞群がどのような発生過程を経て出現するのか、また、他の部位のどのような運動神経サブグループに相当するかなどの詳細な検討は今後の課題として残った。

    researchmap

  • 脊髄運動ニューロンの発生におけるBMPによる情報伝達の役割

    研究課題/領域番号:13770013

    2001年 - 2002年

    制度名:科学研究費助成事業

    研究種目:若手研究(B)

    提供機関:日本学術振興会

    佐藤 昇

      詳細を見る

    配分額:2100000円 ( 直接経費:2100000円 )

    本研究課題は、BMPの内在性インヒビターであるnogginやBMP受容体のdominant-negative変異体をレトロウイルスベクター(RCASBP)を用いてニワトリ胚で発現させることによって、BMPシグナル伝達をin vivoで阻害することによりその脊髄運動ニューロンの発生に及ぼす影響を検討するものである。まずRCASBPを用いた遺伝子導入法を確立する目的で、細胞死を抑制することで知られるBcl-2を運動ニューロン死の時期の時期に発現させてニューロン死が影響を受けるか検討した。その結果Bcl-2が発生早期に起きる頚髄運動ニューロン死を抑制することが明らかになった(Sato, et al. 2002)。このことからRCASBPレトロウイルスベクターがニワトリ胚の脊髄運動ニューロンへ遺伝子導入するための有力な手法であることが確認されたため、nogginを組み込んだウイルスを胚に感染させたところ、胚全体の発生が著しく損なわれそのままの実験系では脊髄運動ニューロンの発生に及ぼす影響を評価することが困難であった。これはnogginの持続的且つ広範囲な発現のためと考えられたため、導入遺伝子発現の時間的な制御を目的としてTet regulatory systemをこのレトロウイルスに組み込んで機能するかを検討した。その結果、ドキシサイクリン投与によって遺伝子発現が効率よく誘導されることが確認された(Sato, et al. 2002)。現在運動ニューロン特異的な発現を目指して各種の転写調節領域を検討している。当初目的には未だ至っていないが、目的達成のためのステップは確実にクリアしており今後さらに推進する予定である.

    researchmap

  • 増殖型トリレトロウイルスベクターを用いた遺伝子導入法による神経細胞死機構の解析

    研究課題/領域番号:11770006

    1999年 - 2000年

    制度名:科学研究費助成事業

    研究種目:奨励研究(A)

    提供機関:日本学術振興会

    佐藤 昇

      詳細を見る

    配分額:2200000円 ( 直接経費:2200000円 )

    本年度は前年度の研究成果を踏まえて、Bcl-2遺伝子を増殖型トリレトロウイルスベクター(RCASBP)を用いて鶏胚脊髄運動ニューロンへ導入して細胞死への影響を検討した。
    1)鶏胚(E4.5;stage24)の頚髄前角においてはpyknosisの形態像を伴った細胞死(アポトーシス)が多く認められるが、RCASBP(B)bcl-2を感染させた鶏胚では、頚髄の前角においてpyknosisの形態像が著明に減少していた。またアポトーシスに特徴的なDNAの断片化をTUNEL反応によって調べると、野生型やRCASBP(B)EGFPを感染させた鶏胚ではTUNEL陽性細胞が頚髄前角に多く認められたが、RCASBP(B)bcl-2を感染させた鶏胚においてはTUNEL陽性細胞は著明に減少していた。
    2)頚髄運動ニューロンの細胞死が始まる直前(E4;stage23)の運動ニューロン数を運動ニューロン特異的なマーカーであるislet-1/2に対する免疫染色によって検討したところ、野生型の胚、RCASBP(B)EGFPを感染させた胚、RCASBP(B)Bcl-2を感染させた胚の間でislet-1/2陽性細胞数に差は認められなかった。
    3)頚髄運動ニューロンの細胞死が終了した後(E5;stage26)の運動ニューロン数を同様に比較したところ、RCASBP(B)Bcl-2を感染させた胚では他に比べて明らかにislet-1/2陽性細胞が増加していた。
    4)以上から鶏胚(E4.5)における頚髄運動ニューロン死はBcl-2分子を導入することによって抑制されることが明らかになった。本研究によって頚髄運動ニューロン死に関与する分子の一つが初めて明らかにされ、また増殖型トリレトロウイルスベクターが鶏胚の発生研究において有用な手法であることが確認された。

    researchmap

  • 中大脳動脈閉塞実験モデルに見られる局所虚血性神経細胞死の機構とその回避

    研究課題/領域番号:07680828

    1995年 - 1997年

    制度名:科学研究費助成事業

    研究種目:基盤研究(C)

    提供機関:日本学術振興会

    似鳥 徹, 佐藤 昇

      詳細を見る

    配分額:2200000円 ( 直接経費:2200000円 )

    ラット(SHRSP)の中大脳動脈枝の完全閉塞実験による局所虚血性神経細胞死モデル実験系において、大脳皮質の虚血負荷後の経時的な形態変化を、主に組織学的に解析した。虚血後2時間で既に大脳皮質の虚血中心領域には梗塞巣が見られ、神経細胞は“necrosis"による細胞死の様相を呈する。同時期の梗塞巣周囲領域(penumbra)は一見正常であるが、電顕微細形態では膨化傾向にある神経細胞と、萎縮傾向にある神経細胞が共に観察された。虚血後6時間のpenumbraでは両者の形態がより明瞭になり、電子密度が低く細胞全体が大きく膨化して明らかに,“necrosis"に陥った細胞と、電子密度が高く細胞内小器官は正常であるがリソゾームシステインプロテアーゼ免疫反応性の増加を伴い細胞質の萎縮を示す“apoptosis"に陥った細胞が混在して観察された。これらの皮質神経細胞は虚血後1日から3日の間にTUNEL陽性の遅延性核変性を示す。Penumbraでは星状膠細胞と希突起膠細胞も死に至るが、中でも星状膠細胞は虚血後2時間で既に細胞質内の構造変化が著しく、従来虚血障害には最も強いとされていた星状膠細胞が最も早く細胞死に向かう可能性が示唆された。星状膠細胞の死は神経細胞に見られた“apoptosis"と“necrosis"の二つの異なった細胞死機構の始動に深く関連するものと思われた。スナネズミ短時間虚血後の海馬CA1錐体神経細胞において、Caspase familyの一つであるCPP32の免疫反応性がTUNEL陽性反応を示す直前に増強された。これらの結果は神経細胞が死に至る機構、特に“apoptosis"において、細胞を死に導く情報伝達機構の下流領域にCaspaseを含むシステインプロテアーゼが重要な因子の一つとして機能する事を示し、その活性化の抑制が細胞死を回避する要素の一つと成りうるものと考えられた。

    researchmap

  • 短時間前脳虚血に伴う海馬CA1錐体細胞のアポトーシスとその回避

    研究課題/領域番号:07458201

    1995年 - 1997年

    制度名:科学研究費助成事業

    研究種目:基盤研究(B)

    提供機関:日本学術振興会

    内山 安男, 大沢 良之, 後藤 隆洋, 渡部 剛, 和栗 聡, 似鳥 徹, 佐藤 昇

      詳細を見る

    配分額:7500000円 ( 直接経費:7500000円 )

    本研究では、虚血性神経細胞死等の神経細胞死とその回避因子の探索を目的とした。
    1)神経細胞死:私達は、神経細胞のアポトーシスの過程でリソソームカテプシン群の活性が上昇することを見い出し、細胞死におけるリソソームの役割をPC12細胞を用いて検討した。同細胞は無血清培養で培養するとcaspase-3が活性化され、その死はそのインヒビターであるacetyl-DEVD-cho(DEVD)の添加で抑制されることが分かった。DEVDでcaspase-3の活性化を抑制し、さらにリソソームカテプシンBのインヒビターであるCA074あるいはそのアンチセンスを添加すると再び細胞死が惹起された。この細胞死は、ペプスタチンAあるいはカテプシンDのアンチセンスの添加で抑制された。このことはリソソームカテプシンBとDで制御されるアポトーシスの経路が存在することを示している。
    2)細胞死回避因子の同定:私達は、human bcl-2遺伝子導入PC12細胞の培養上清中から野性型PC12細胞の細胞死を抑制する因子を見い出し、その因子が新規蛋白であることを明らかにした。定法に従い、同蛋白のcDNAを決定した結果、open reading frameは768bpで256アミノ酸残基からなり、シグナルペプチドは23アミノ酸残基、本体は233アミノ酸残基の分泌型蛋白であることが分かった。ペプチド抗体からSDS上での移動度で見ると分子量は約35kDである。本結果から、同蛋白をPCTF35(PC12 derived trophic factor 35 KD protein)と命名した。PCTF35の生理活性を確認するため、同遺伝子をPC12細胞、COS細胞、drosophilaの神経系由来のS2細胞に導入し、効率よくPCTF35を分泌する系を探索中である。また、ラットを用いて、その発生過程、生後発達過程でmRNAの発現をin situ hybridizationで検討した結果、中枢神経系でその発達の初期に発現することを確認した。

    researchmap

  • ラットIch-1/Nedd2遺伝子の構造及び発見の解析

    研究課題/領域番号:07770015

    1995年

    制度名:科学研究費助成事業

    研究種目:奨励研究(A)

    提供機関:日本学術振興会

    佐藤 昇

      詳細を見る

    配分額:1000000円 ( 直接経費:1000000円 )

    細胞死(アポトーシス)の細胞内機構を解析する目的で、細胞死の原因遺伝子の一つとして同定されNedd2/Ich1遺伝子のクローニングを試みた。マウスの塩基配列を参考に作製されたプライマーを用いてRT-PCR法を施行し増幅されたDNA断片をプローブとしてPC12細胞のcDNAライブラリーをスクリーニングした。得られたcDNAクローンの塩基配列を決定したところラットNedd2/Ich1は452アミノ酸残基から成ることが予想され、ヒト及びマウスのそれと高い相同性を有することが明かになった。ラットNedd2/Ich1のアミノ酸配列にはICE関連遺伝子ファミリーにみられるQACRGというシステインプロテアーゼとしての活性中心のモチーフも存在されていた。
    次にNedd2/Ich1遺伝子産物の機能を解析するために抗体作製を計画した。Nedd2/Ich1のC末端330-452アミノ酸残基部分をマルトース結合蛋白質のC末端に連結した融合蛋白質を大腸菌で作らせた。融合蛋白質をアミロースカラムで精製してウサギに免疫して抗Nedd2/Ich1血清を得た。この抗血清でPC12細胞のイムノブロットを施行したところNedd2/Ich1と予想されるバンドが分子量約28.000付近に確認された。PC12細胞は無血清培地で培養するとアポトーシスで死ぬが、その経時経過をNedd2/Ich1のイムノブロットで観察すると経過中Nedd2/Ich1のバンドが常に認められまたその発現量に著明な変化が認められないことから、1)Nedd2/Ich1の発現量ではなく活性の有無が重要である、2)Nedd2/Ich1の基質(未だに未知)の量が重要である、3)Nedd2/Ich1以外のICE関連遺伝子ファミリーが細胞死に関与している、などの可能性を今後検討する予定である。

    researchmap

  • 原型癌遺伝子bcl-2の遺伝子発現による神経細胞死の回避とその生理的意義

    研究課題/領域番号:07264236

    1995年

    制度名:科学研究費助成事業

    研究種目:重点領域研究

    提供機関:日本学術振興会

    内山 安男, 似鳥 徹, 佐藤 昇, 和栗 聡

      詳細を見る

    配分額:2000000円 ( 直接経費:2000000円 )

    これまでの研究から、Bcl-2蛋白は粗面小胞体や滑面小胞体、核膜、ミトコンドリアの外膜に局在することが報告されている。周知のごとく、アポトーシスは形態的な定義であり、核に初期変化があるとされてきた。特に、核クロマチンの凝縮、アポトーシス小体の形成時においてもミトコンドリアを初めとする細胞内小器官は形態的に正常である。しかし、近年の研究から、核DNAの断裂化が生じる時には、ミトコンドリアの機能も低下しているこが明らかにされている。さらに、Bcl-2はアポトーシスのみならず一部のネクローシス(呼吸鎖阻害により誘導された)をも回避することが分かった。これらの現象を理解するために、Bcl-2(およびBcl-X_L)の正確な局在をbcl-2/bcl-X_L遺伝子を導入したPC12細胞(PC-bcl/PC-bolx細胞)で免疫組織細胞化学的に検討した。免疫反応には、ヒト、マウスBcl-2/Bcl-x蛋白あるいはその合成ペプチドに対するポリクローナルあるいはモノクローナル抗体を用いた。共焦点レーザー顕微鏡でPC-bcl/bclx細胞を観察すると、Bcl-2/Bcl-x蛋白に対する細顆粒状の免疫陽性反応が細胞質や神経突起に見られた。凍結超薄切片-金コロイド法によって、Bcl-2/Bcl-x蛋白の局在をみると、Bcl-2/Bcl-x蛋白の抗原性を示す金コロイド粒子は主にミトコンドリアの内膜上に認められた。金粒子は小胞構造にも見られたが、核膜に沈着する金粒子は認められなかった。神経突起内に存在するミトコンドリアの内膜にも金粒子の局在が認められた。同蛋白陽性の金粒子は核にも見られたが、非特異的な局在との差は見られなかった。脊髄前角細胞、肝細胞においても同様の所見が得られた。現在のところ、Bcl-2およびその関連蛋白がミトコンドリア内膜のいかなる機構と関与するかは不明であるが、本研究結果は、アポトーシスを回避する機構にミトコンドリアが関与する可能性を示唆するものと思われる。

    researchmap

  • 神経内分泌細胞におけるシステインプロテアーゼインヒビターの機能解析

    研究課題/領域番号:06770018

    1994年

    制度名:科学研究費助成事業

    研究種目:奨励研究(A)

    提供機関:日本学術振興会

    佐藤 昇

      詳細を見る

    配分額:900000円 ( 直接経費:900000円 )

    細胞質に存在するリソゾームシステインプロテアーゼの一つであるシスタチンβのPC12細胞における機能を明らかにする目的でアンチセンスオリゴヌクレオチド法によるシスタチンβの発現抑制を試みた。複数のアンチセンスオリゴヌクレオチドを用意したが有為な発現抑制は認められなかった。特にNGFで神経様に分化させる実験など長時間におよぶ系では安定した結果を得るのが難しいと考えられた。そこでアンチセンスオリゴヌクレオチド法による一過性の発現抑制ではなくアンチセンスベクターによる恒常的な発現抑制の系を検討することにした。
    その手始めとしてPC12細胞が発現ベクター導入によって持続的かつ安定な発現クローンを得るのに適した細胞であるか検討してみた。ヒト原型癌遺伝子bc1-2のcDNAをRSV-LTRプロモーターに連結したベクターを作製しリン酸カルシウム法によりPC12細胞に遺伝子を導入したところ6つの安定発現株を得た。いずれの株においてもヒトbc1-2がmRNA及び蛋白の両方のレベルでNGFによる神経分化誘導や血清除去によるアポトーシスの誘導刺激においても安定して発現していることをノーザンブロット法及びイムノブロット法にて確認した。このことよりRSV-LTRプロモーターによって発現が支配されるベクターがPC12細胞において有効に機能することが明らかになった。そこで現在シスタチンβのcDNAをRSV-LTRプロモータに逆向きに組み込んだ発現ベクターを作製している。このベクターは恒常的にシスタチンβのアンチセンスmRNAを発現することが予想され、その結果PC12細胞におけるシスタチンβの蛋白レベルでの発現が抑制されることが期待できる。

    researchmap

  • 原型癌遺伝子bcl-2の遺伝子発現による神経細胞死の回避とその生理的意義

    研究課題/領域番号:06272229

    1994年

    制度名:科学研究費助成事業

    研究種目:重点領域研究

    提供機関:日本学術振興会

    内山 安男, 佐藤 昇, 和栗 聡, 似鳥 徹

      詳細を見る

    配分額:2200000円 ( 直接経費:2200000円 )

    ラット褐色細胞腫由来のPC12細胞は血清を含む培地で培養すると増殖し、培地から血清を除くとポトーシスに陥ることが知られている。さらに、PC12細胞は血清非存在下で神経栄養因子(NGF)を添加した培地で培養すると、突起を伸展して神経細胞様に分化する。このような特徴を備えたPC12細胞に、細胞死を回避する原型癌遺伝子として知られるbcl-2遺伝子を過剰発現することによって、細胞死とその回避について検討した。発現ベクターに組み込んだヒトbcl-2遺伝子を燐酸カルシウム法により、PC12細胞に過剰発現させた。mRNAと蛋白レベルで検討し、bcl-2を発現した細胞株6種を得た。これらの株を用いて、血清存在下で培養すると野生株と同様に増殖した。無血清下で培養すると、野生株とベクターのみを組み込んだ細胞は24時間後には多くの細胞が死に、4日以内に全ての細胞が死んだ。しかし、bcl-2を組み込んだ細胞では4日後にみると、全ての株で80から100%の生存を示した。さらに、血清非存在下で2週間培養を続けた結果、bcl-2を発現した細胞は突起を伸展し、NGF存在下で培養した細胞と同様に神経細胞様に分化した。この細胞はニューロフィラメントM陽性であった。本実験結果から、bcl-2遺伝子を組み込んだ細胞は、血清存在下では野生株と同様に増殖するが、血清非存在下では野生株と異なり生存し、追には神経細胞様に分化することが明らかになった。今後、さらに、この系を用いて、分化因子の同定とbcl-2が細胞を如何に生存させるのかを検討する。

    researchmap

  • Gene transfer by viral vectors

      詳細を見る

    資金種別:競争的資金

    researchmap

  • Neuronal cell death

      詳細を見る

    資金種別:競争的資金

    researchmap

  • 神経細胞死

      詳細を見る

    資金種別:競争的資金

    researchmap

  • ウイルスベクタ-による遺伝子導入

      詳細を見る

    資金種別:競争的資金

    researchmap

▶ 全件表示

 

担当経験のある授業科目

  • 医学序説 II

    2022年
    -
    現在
    機関名:新潟大学

  • 医学論文を読む(ジャーナルクラブ)B

    2021年
    -
    現在
    機関名:新潟大学

  • 医学序説 I

    2021年
    機関名:新潟大学

  • はじめての医学

    2020年
    -
    現在
    機関名:新潟大学

  • 医学序説 II

    2020年
    機関名:新潟大学

  • 臓器別講義・演習Ⅲ

    2017年
    機関名:新潟大学

  • 臓器別講義・演習Ⅱ

    2017年
    機関名:新潟大学

  • 医学論文を読む(ジャーナルクラブ)A

    2016年
    -
    2020年
    機関名:新潟大学

  • 医学論文を読む(ジャーナルクラブ)B

    2016年
    -
    2017年
    機関名:新潟大学

  • 臓器別講義・演習Ⅰ

    2016年
    -
    2017年
    機関名:新潟大学

  • 人体の構造と機能Ⅰ(解剖総論)

    2015年
    -
    現在
    機関名:新潟大学

  • 人体の構造と機能Ⅰ(肉眼解剖学)

    2015年
    -
    現在
    機関名:新潟大学

  • 生命倫理

    2015年
    -
    2017年
    機関名:新潟大学

  • 医事法制

    2015年
    -
    2016年
    機関名:新潟大学

  • 臨床実習II(clinical clerkship)

    2014年
    -
    2017年
    機関名:新潟大学

  • 臨床医学講義(集中)

    2014年
    -
    2017年
    機関名:新潟大学

  • 医学論文を読む

    2014年
    -
    2015年
    機関名:新潟大学

  • 医学研究実習

    2011年
    -
    2013年
    機関名:新潟大学

  • 人体の構造

    2009年
    -
    現在
    機関名:新潟大学

  • 人体の構造と機能I(解剖総論)

    2008年
    -
    2014年
    機関名:新潟大学

  • 人体解剖学実習

    2008年
    -
    2014年
    機関名:新潟大学

  • 先端医科学研究概説

    2008年
    -
    2013年
    機関名:新潟大学

▶ 全件表示