記述言語：英語   掲載種別：研究論文（学術雑誌）  

Immune responses to non-pathogenic yeasts induced within the draining lymph node remain to be understood. In this study, we have investigated the changes in lymphocytes and their activity in skin-draining lymph nodes in response to transdermally injected zymosan (component of the yeast cell wall). Zymosan elicited the transient increase of B cell number and activation status without affecting the capacity for proliferation. The increased B cell content in the regional lymph nodes was likely due to the reduction of B cell egress from the tissue and in part the increase of homing from the circulation. Zymosan also upregulated the inflammatory cytokines, such as IL-1β, IL-6, IL-12, and IFNγ, regulatory cytokines IL-10 and TGFβ, and lymphoid chemokine CXCL13. Among these, the expression of IL-12 and IL-10 was markedly high in B cells. Altogether, these findings demonstrate a unique B cell-associated response to non-pathogenic yeast component in the draining lymph nodes. This will provide insights into the clinical and healthcare applications of non-pathogenic beneficial microbes.

DOI： 10.1016/j.cellimm.2020.104159

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記述言語：英語   掲載種別：研究論文（学術雑誌）  

DOI： 10.4049/jimmunol.1800539

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記述言語：英語   掲載種別：研究論文（学術雑誌）  

DOI： 10.4049/jimmunol.1700219

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記述言語：英語   掲載種別：研究論文（学術雑誌）  

DOI： 10.3389/fimmu.2018.02196

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記述言語：英語   掲載種別：研究論文（学術雑誌）  

DOI： 10.1093/intimm/dxx066

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記述言語：英語   掲載種別：研究論文（学術雑誌）   出版者・発行元：AMER SOC MICROBIOLOGY  

Antigen-specific adhesion between T cells and antigen-presenting cells (APC) during the formation of the immunological synapse (IS) is mediated by LFA-1 and ICAM-1. Here, LFA-1-ICAM-1 interactions were measured at the single-molecule level on supported lipid bilayers. High-affinity binding was detected at low frequencies in the inner peripheral supramolecular activation cluster (SMAC) zone that contained high levels of activated Rap1 and kindlin-3. Rap1 was essential for T cell attachment, whereas deficiencies of ste20-like kinases, Mst1/Mst2, diminished high-affinity binding and abrogated central SMAC (cSMAC) formation with mis-localized kindlin-3 and vesicle transport regulators involved in T cell receptor recycling/releasing machineries, resulting in impaired T cell-APC interactions. We found that NDR1 kinase, activated by the Rap1 signaling cascade through RAPL and Mst1/Mst2, associated with and recruited kindlin-3 to the IS, which was required for high-affinity LFA-1/ICAM-1 binding and cSMAC formation. Our findings reveal crucial roles for Rap1 signaling via NDR1 for recruitment of kindlin-3 and IS organization.

DOI： 10.1128/MCB.00424-16

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記述言語：英語   掲載種別：研究論文（学術雑誌）   出版者・発行元：AMER ASSOC IMMUNOLOGISTS  

Regulation of thymocyte trafficking plays an important role during thymic selection, but our understanding of the molecular mechanisms underlying these processes is limited. In this study, we demonstrated that class III semaphorin E (sema3e), a guidance molecule during neural and vascular development, directly inhibited Rap1 activation and LFA-1-dependent adhesion through the GTPase-activating protein activity of plexin D1. Sema3e inhibited Rap1 activation of thymocytes in response to chemokines and TCR stimulation, LFA-mediated adhesion, and T cell-APC interactions. Immunological synapse (IS) formation in mature thymocytes on supported lipid bilayers was also attenuated by sema3e. Impaired IS formation was associated with reduced Rap1 activation on the contact surface and cell periphery. Moreover, a significant increase of CD4(+) thymocytes was detected in the medulla of mice with T cell lineage-specific deletion of plexin D1. Two-photon live imaging of thymic explants and slices revealed enhanced Rap1 activation and migration of CD69(+) double-positive and single-positive cells with plexin D1 deficiency. Our results demonstrate that sema3e/plexin D1 modulates IS formation and Ag-scanning activities of thymocytes within thymic tissues.

DOI： 10.4049/jimmunol.1502121

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記述言語：英語   掲載種別：研究論文（学術雑誌）   出版者・発行元：ELSEVIER SCIENCE BV  

Mammalian ste-20 like kinase Mst1 plays important roles during apoptosis, proliferation, cell polarity, and migration. Here, we report a novel role of Mst1 for cytotoxic T-cell responses and tumor suppression. The defect of Mst1 caused decreased levels of FoxO, and promoted cytotoxicity in vitro. Mst1(-/-) cytotoxic T cells also exhibited enhanced T-bet expression that was associated with elevated expression levels of IFN and granzyme B. Moreover, Mst1(-/-) cytotoxic T cells suppressed tumor growth in vivo. The data suggest that Mst1 inhibits cytotoxicity via T-bet suppression by FoxO1 and FoxO3a. Thus, Mst1 is a potential therapeutic target for tumor immunotherapy.

DOI： 10.1002/1873-3468.12045

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記述言語：英語   掲載種別：研究論文（学術雑誌）   出版者・発行元：AMER ASSOC ADVANCEMENT SCIENCE  

In lymphocytes, the kinase Mst1 is required for the proper organization of integrins in the plasma membrane at the leading edge of migrating cells, which is critical for lymphocyte trafficking. We found a functional link between the small G protein Rab13 and Mst1 in lymphocyte adhesion and migration. In response to stimulation of T lymphocytes with chemokine, Mst1 promoted phosphorylation of the guanine nucleotide exchange factor DENND1C (differentially expressed in normal and neoplastic cells domain 1C), which activated Rab13. Active Rab13 associated with Mst1 to facilitate the delivery of the integrin LFA-1 (lymphocyte function-associated antigen 1) to the leading edge of lymphocytes. Delivery of LFA-1 involved the recruitment of myosin Va along actin filaments, which extended as a result of the localization of the actin regulatory protein VASP to the cell periphery through phosphorylation of VASP at Ser(157) by Mst1. Inhibition of Rab13 function reduced the adhesion and migration of lymphocytes on ICAM-1 (intercellular adhesion molecule-1), the ligand for LFA-1, and inhibited the formation of a ring-like arrangement of LFA-1 at the contact sites between T cells and antigen-presenting cells. The lymphoid tissues of Rab13-deficient mice had reduced numbers of lymphocytes because of the defective trafficking capability of these cells. These results suggest that Rab13 acts with Mst1 to regulate the spatial distribution of LFA-1 and the motility and trafficking of lymphocytes.

DOI： 10.1126/scisignal.2005199

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記述言語：英語   掲載種別：研究論文（学術雑誌）   出版者・発行元：ELSEVIER SCIENCE INC  

Recent studies have illustrated multiple differentiation potentials of embryonic stem cells (ESCs), derived from parthenogenetic embryos, to various kinds of cells (all three embryonic germ layers). However, differentiation diversity of the parthenogenetic ESCs (PgESCs) in vivo remains to be elucidated. In the present study, we established mouse PgESC-lines and observed their contribution diversity in vivo by producing chimeric mice using embryos possessing single nucleotide polymorphisms of mitochondrial DNA (mtDNA) as hosts. Based on southern blot analysis using specific probes to detect the SNPs on mtDNA, PgESC-derived mtDNA were contained in many organs such as brain, lung, and heart of the chimeric mouse. We concluded that PgESCs contributed to various internal organs in vivo, and that they were also stably maintained in adult animals. (C) 2010 Elsevier Inc. All rights reserved.

DOI： 10.1016/j.theriogenology.2010.01.024

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記述言語：日本語   出版者・発行元：公益社団法人 日本薬理学会  

For a long time ago, people have believed that good medicine tastes bitter to the mouth; however, whether the bitter taste itself has therapeutic effects is less studied. Generally, bitter taste is recognized by Type-2 bitter-taste receptors (TAS2Rs) belonging to G-protein coupled receptors and TAS2Rs are localized on taste bud cells of the tongue. Growing evidence suggests that TAS2Rs are expressed not only in the taste bud cells but also in other cells including airway smooth muscle cells, intestinal tuft cells and immune cells. In this study, we show that bitter taste substance-TAS2R axis regulates neutrophil migration. By gene expression analysis, we found that neutrophils express TAS2R126, TAS2R135 and TAS2R143. Next, we observed the effect of TAS2R126/135/143 agonists on neutrophil migration. Although TAS2R135 agonists did not affect neutrophil migration, TAS2R126/143 agonists significantly enhanced CXCL2-induced neutrophil migration. The enhancing effects were not observed in a TAS2R126/143 deficient neutrophil-like cell line. In addition, TAS2R126/143 agonist also promotes neutrophil infiltration into zymosan-injected abdominal cavity. These results suggest that TAS2R126/143 signaling facilitates neutrophil-mediated immune responses and may be targets to promote host defense against infection.

DOI： 10.1254/jpssuppl.94.0_2-y-g3-3

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記述言語：日本語   出版者・発行元：関西医科大学医学会  

細胞傷害性CD8Tリンパ球は，ウイルス感染および腫瘍排除に対する免疫応答の主要な細胞である．分化したCTLは，パーフォリンおよびグランザイムBを含む多数の改変されたリソソームを有する．Mammalian ste-20 like kinaseであるMst1はリンパ球に豊富に発現しており，アポトーシス，増殖，細胞極性および細胞移動に重要な役割を果たす．

ここで私たちは，細胞傷害性T細胞応答および腫瘍抑制のためのMst1の新しい役割を報告する．

Mst1欠損細胞傷害性T細胞は，IFNγおよびグランザイムBの発現レベル上昇に関連する増強したT-bet発現を示した．

さらに，Mst1欠損細胞傷害性T細胞は<i>in vivo</i>で腫瘍増殖を抑制し，担癌マウスのoverall survivalを延長した．

このようにMst1は，腫瘍免疫療法のための潜在的な治療標的である．

DOI： 10.5361/jkmu.68.9

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その他リンク： https://www.jstage.jst.go.jp/article/jkmu/68/0/68_9/_pdf

記述言語：英語   出版者・発行元：(NPO)日本免疫学会  

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記述言語：英語   出版者・発行元：(NPO)日本免疫学会  

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記述言語：英語   出版者・発行元：(NPO)日本免疫学会  

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記述言語：英語   出版者・発行元：(NPO)日本免疫学会  

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記述言語：日本語   出版者・発行元：(一社)日本繁殖生物学会  

DOI： 10.14882/jrds.101.0.580.0

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記述言語：日本語   出版者・発行元：近畿大学先端技術総合研究所  

マウス胚性幹細胞（mouse embryonic stem cell;mES 細胞）は、各系譜の細胞へと分化可能な分化多能性を有している（1）。この特徴を用いて、様々な分化誘導実験が行なわれてきた。生殖細胞の分化誘導もまた、発生メカニズムの解明に繋がるとして研究の対象となってきた。しかし、受精能を獲得した精子様の細胞は得られたが、同様な卵母細胞様の細胞は得られていない。そこで本実験では、卵巣表面に存在する卵巣上皮細胞（ovarian surface epithelium cells;OSECs）がmES細胞から生殖細胞への分化に関与するかどうか、分子生物学的手法及び免疫化学的手法を用いて未分化マーカー遺伝子であるOct4 遺伝子、生殖細胞関連遺伝子であるMouse vasa homolog（Mvh）、Stella、Fragilis 遺伝子について解析した。その結果、胚様体（Embryoid Body;EB）をOSECs の馴化培養液で接着培養を行った場合、通常の接着培養と比べ、Oct4 遺伝子の発現が維持された。今回の実験系より得られた結果から、OSECs の分泌する液性因子が、mES 細胞から生殖細胞への分化を助長する傾向にあることが示された。

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記述言語：日本語   出版者・発行元：近畿大学先端技術総合研究所  

胚性幹細胞（Embryonic Stem Cell ; ES 細胞）は自己複製能と様々な細胞へと分化することの出来る分化多能性を有している細胞である。近年、このES 細胞を用いた再生修復医療の可能性が注目されている。しかし、受精卵からES 細胞を作出するため、移植後に免疫拒絶反応を示すことが示唆されており、ES 細胞を用いた再生修復医療の1 つの課題となっている。そこで、片親性の雌性単為発生胚と雄性発生胚からES 細胞を樹立し、片親性ES 細胞の分化多能性を観察した。

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記述言語：日本語   出版者・発行元：(公社)日本繁殖生物学会  

[目的]<BR> 卵巣の表面を覆う一層の細胞である卵巣表層上皮細胞(OSECs)は周辺の間葉系細胞に影響し、卵子の形成を誘導すると報告されている(Bukovsky et al. 2004. 2005)。ES細胞から生殖細胞への分化に具体的に働く誘導方法、あるいは刺激因子に関しての報告が近年なされているが(Johnson et al. 2004, Qing et al. 2007)、受精能を有する卵子を誘導したという報告はない。<BR> 本研究では、卵子への分化誘導系の検討の前に、B6マウス胚性幹細胞(ESCs)由来胚様体(EBs)と卵子の形成に関与していると報告されているOSECsとの配偶子維持能の検討を行った。<BR>
[方法]<BR> ICRマウス卵巣からOSECsを採取した。そして誘導初期と後期の胚葉体を単独培養区、OSECs上清培養区、OSECsと共培養(誘導初期のEBsとのみ)を行い、未分化マーカー遺伝子Oct4、生殖細胞関連遺伝子Mvh、Stella、FragillsとOCT4、MVHタンパク質を解析した。さらにOSECsが幹細胞である可能性を考慮して、OSECsをES培地とESCs馴化培地で培養し上記と同様に解析した。<BR>
[結果]<BR> 誘導初期のEBsとOSECsの培養上清で培養した場合にOct4遺伝子の発現がmRNA、タンパク質レベルで維持された。また他の各培養区では培養日数の経過に伴ってOct4遺伝子の発現が減少していた。OSECsをES培地とESCs馴化培地での培養区では、Oct4遺伝子とMvh遺伝子の発現は確認できなかった。<BR>
[考察]<BR> おそらくOSECs自体には幹細胞としての性質はないが、OSECs自体は分化を促進する機能を有していると考えられる。誘導初期のEBsにおいてOSECs馴化培地で30日間培養した場合にOct4遺伝子が発現しており、誘導後期のEBsを馴化培地で培養した場合にOct4遺伝子が発現していないことから、液性因子には未分化因子の発現低下レベルを遅らせる機能を有していると考えられる。卵巣の細胞には未分化を維持・促進させる環境が存在すると考えられ、OSECsは両方の環境を有していると考えられる。尚本研究は科技団・和歌山県地域結集型共同研究事業の助成により行われた。

DOI： 10.14882/jrds.100.0.20108.0

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記述言語：日本語   出版者・発行元：(一社)日本生殖医学会  

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記述言語：日本語   出版者・発行元：(一社)日本繁殖生物学会  

［目的］ ウサギは医療品、化粧品開発における薬効・安全性試験に多く使用されている。マウスよりも体が大きく、脳、胚などの組織における手術、観察が可能であるため、実験動物としての価値は高いと考えられる。現在、胚への遺伝子注入を介してトランスジェニック(TG)ウサギの作製により、有用タンパク質の大量生産が可能になっている。近年、マウスにおいてはES細胞、EG細胞などの幹細胞を介して、従来の前核注入法よりも効率よくTG個体作製がされるようになった。本研究ではウサギEG細胞の樹立を試みた。［方法］ 交配確認から10.5日後の雌NW種から胚を回収し、生殖原基に相当する部分をトリプシン-EDTAを用いて解離した。得られた細胞懸濁液をMMC処理したSTO細胞の上に播種し、LIF(1000units/ml)、bFGF(20ng/ml)、forskolin(20μM)を添加して培養し、ウサギEG様細胞群を得た。［結果］ アルカリファスファターゼ活性陽性細胞群が得られた。なおこれらの細胞群においてOct-4の発現が確認された。継代培養が可能で、凍結融解後も上記性状を維持していたことから、ウサギEG細胞と考えられた。［考察］ ウサギにおいてもマウスEG細胞の樹立方法が有効であった。現在、ウサギではES細胞が困難であり、報告も少ない。ES細胞は生殖細胞を含む多くの細胞に分化することが知られており、本研究におけるウサギEG細胞はTGウサギ作製の重要な手段となる可能性がある。

DOI： 10.14882/jrds.99.0.158.0

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記述言語：日本語   出版者・発行元：(一社)日本繁殖生物学会  

《目的》近年、主に胚体外組織に発生する四倍体胚にES細胞を注入することにより、ES細胞の寄与率を著しく高めたキメラマウスを作製する方法が開発された。この方法では、体外で任意に操作したES細胞を由来とするマウスを第一世代で得ることが出来るため、従来の前核注入法に代わる遺伝子導入マウス作製法として注目されている。本実験では交雑系C57BL/129terF1マウスよりES細胞株の樹立及び遺伝子導入を行うとともに、同法を用いてTGマウスの作製を行い、有用性を検討した。《方法》C57BL/6×129ter F1マウスより、ES細胞株を樹立した。その後、電気穿孔法によりEGFP-N3、GOF18-△PE(Goto et al.,2002)遺伝子導入を行った。四倍体胚はICRマウスの2細胞期胚に電気を印加し、割球を融合して得た。その後、培養を続け胚盤胞期胚まで発生した段階で遺伝子導入を行ったES細胞を注入した。ES細胞を注入した胚を偽妊娠状態の雌マウスに胚移植し、産仔を得た。《結果》F1 ES 細胞株にEGFP-N3遺伝子導入をしたESマウスの作製効率は3.9%(2/51)であった。GOF18ΔPE導入をしたESマウスの作製効率は8.8%(5/57)であった。EGFP-N3遺伝子導入マウスの尾部より回収した細胞ではGFP発光が認められた。GOF18ΔPE導入ESマウスでは尾部より細胞を採取し、ES細胞と融合させてOct-4を再発現させることでGFPの発光を確認した。《考察》F1 ES 細胞株に遺伝子導入をしたESマウスは性成熟するまで生存し、繁殖能を有していた。本研究では、ES細胞への電気穿孔法による遺伝子導入実験系、及び、ES細胞を介したTGマウス作製系が確立され、TG産仔を短時間で効率良く得る事が可能になった。本法は産仔の交配が必要なKOマウスの作製や、胎児期における時期特異的遺伝子発現の観察等において有効な手段となり得る。本研究はJSTの助成を受けて行った。

DOI： 10.14882/jrds.99.0.152.0

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